HPLC?ELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量

HPLC?ELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量　　【摘要】目的建立芪红胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法，为芪红胶囊质量标准的研究提供依据。方法采用HPLC法分离并测定了中药芪红胶囊中黄芪甲苷的含量。色谱条件：DiamnosilC18柱(460mm×250mm,5μm)，以乙腈?水(体积比35∶65)为流动相;蒸发光散射检测器(ELSD)。结果：此方法线性为2.53～15.18μg，平均加样回收率为99.4%。结论本方法精密度高，分离度良好，可用于中药芪红胶囊中黄芪甲苷的含量测定。　　【关键词】芪红胶囊;黄芪甲苷;高效液相色谱　　Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminingthecontentofastragalosideIVinQihongcapsule.MethodsAstragalosideIVwasanalyzedonanHPLCDiamnosilC18column(4.6mm×250mm,5μm)usingacetonitrile?water(35∶65)asmobilephase.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof2.53-15.18μg.Theaveragerecoverywas99.4%.ConclusionsThismethodisaccurate,reliableandreproducible,whichcanbeusedforthequalitycontrolofQihongcapsule.　　Keywords:Qihongcapsule;astragalosideIV;HPLC　　芪红胶囊是由黄芪、红花，冰片、桃仁等多味药材制成的中药复方制剂，具有活血化淤、通络止痛的功效，临床主要用于治疗冠心病(气虚血淤型)，疗效确切。方中黄芪是芪红胶囊的君药，其药用有效成分主要是黄芪甲苷(astragalosideIV)。为了控制药品的质量，本文选择黄芪甲苷作为含量测定指标，建立HPLC?ELSD法分离测定芪红胶囊中黄芪甲苷含量的方法，为中药芪红胶囊的质量标准研究提供依据。　　1仪器与试药　　1.1仪器Waters600E泵高效液相色谱仪，WatersM32色谱工作站;SEDEX55蒸发光散射检测器(法国)(漂移管温度60℃，增溢为7，气压2.1×105Pa);MettlerAE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZ?A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。　　1.2试药黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0781?200301);乙腈(色谱纯,TediaCompany,Inc.,Fairfield,OH,USA);芪红胶囊(广州鑫升科技公司提供，规格：0.4g/粒，批号：20060307，20060308，20060309)。　　2方法与结果　　2.1色谱条件的选择DiamonsilC18(4.6mm×250mm,5μm)(迪马公司产)为色谱柱;乙腈?水(体积比35∶65)为流动相;柱温：30℃;流速1.0mL/min;SEDEX55蒸发光散射检测器(漂移管温度60℃，增溢为7，气压2.1×105Pa)。在此色谱条件下，黄芪甲苷与样品中其他组分分离良好，理论板数按黄芪甲苷色谱峰计大于3000。色谱图见图1、2。　　图1黄芪甲苷对照品HPLC图　略　　图2芪红胶囊HPLC图　略　　2.2对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品12.65mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.3供试品溶液的制备精密称取样品8g，加水50mL使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次30mL，合并正丁醇液，以氨试液洗涤5次，每次20mL，弃去氨试液，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。　　2.4线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30μL，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以对照品进样量(m)自然对数为横坐标、峰面积值(A)自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，测定结果明，黄芪甲苷对照品在进样量2.53～15.18μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：A=1.5210m+10.6662，r=0.9997。　　2.5精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液10μL,连续进样5次,测定黄芪甲苷峰面积值，求得黄芪甲苷峰面积值平均值为537179，RSD为1.2%，结果表明仪器精密度良好。　　2.6稳定性试验精密称取本品，照上述方法制备供试品溶液，精密吸取15μL，在上述色谱条件下，每隔一定时间进样,测定黄芪甲苷峰面积值,求得黄芪甲苷峰面积值平均值为636505，RSD值为1.6%，表明样品在24h内基本稳定。　　2.7回收率试验精密称取芪红胶囊6份，每份约8g，照前述供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液15μL，进样，测定，计算含量，求得黄芪甲苷含量平均值为0.099mg/粒，RSD为2.0%，表明本法测定的重复性良好。　　2.8准确度试验采用加样回收法，取已知含量样品(黄芪甲苷含量为：0.099mg/粒)6份，精密称取各约4g，分别精密加入黄芪甲苷对照品，照供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液15μL，进样，测定，计算，求得黄芪甲苷平均回收率为99.4%，RSD为2.0%。结果说明本法准确。　　表1回收率试验结果　略　　2.9阴性对照试验取缺黄芪的各味药材按工艺制备成阴性对照溶液，照供试品的测定项下的方法测定，结果在黄芪甲苷对照品吸收峰位置处无干扰(见图3)。　　2.10样品的测定取3批样品，分别按“2.3”项方法制得供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液10μL和20μL，供试品溶液15μL，注入液相色谱仪，测定，计算，3批样品黄芪甲苷含量的测定结果分别为0.099、0.136、0.114mg/粒。　　图3缺黄芪阴性对照HPLC图　略　　3讨论　　3.1供试品溶液的制备由于黄芪甲苷类成分在正丁醇中的溶解度比较大，因此选用正丁醇进行提取，经回收试验证明方法可行。作者曾试验采用未经氨试液处理的供试品溶液进行测定，含量大大偏低，故供试品溶液经氨试液处理才能进行含量测定。　　3.2检测器的选择黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法[1～3]，紫外检测的HPLC法[4]及HPLC?ELSD法[5～6]，由于薄层扫描法对黄芪甲苷的含量测定结果误差大，紫外检测的HPLC法则选择203nm的末端吸收波长来测定，其误差也很大，故目前专家建议采用HPLC?ELSD法测定，此方法减少了误差，满足了含量测定的要求，故本文也选择蒸发光散射检测器。　　3.3流动相的选择HPLC测定选择了乙腈?水(体积比35∶65)，乙腈?水(体积比30∶70)，甲醇?水(体积比35∶65)几种流动相体系，通过比较分离情况，确定了上述体系，该体系使各成分得到了较好的分离，满足定量的要求。　　3.4本文以高效液相色谱法测定芪红胶囊中主要成分黄芪甲苷的含量，方法分析条件易于精确控制，待测成分易于分离，且具有较好的重现性和较高的精密度，为中药芪红胶囊的质量标准的制订提供了依据。　　【】　　[1]曹正中,俞家华,陈萍.黄芪注射液中黄芪甲甙的薄层光密度法测定[J].药物分析杂志,1988,8(3):176-177.　　[2]李晓蒙,李晓莹,徐位良,等.糖康安颗粒质量标准研究[J].广东药学院学报,2002,18(3)∶169-171.　　[3]刘金旗,时文霞,刘劲松,等.薄层扫描法测定健脑精喷雾剂中黄芪甲甙的含量[J].中药材,1996,19(10)∶529-530.　　[4]阎汝南,王静竹,刘舒平,等.HPLC法测定黄芪中黄芪甲甙的含量[J].中国中药杂志,1998,23(7)∶398-399.　　[5]吴永平,徐永梅,曹园,等.HPLC-ELSD法测定黄芪提取物中黄芪甲苷的含量[J].中成药,2001,23(9):673-674.　　[6]曹湘萍,梁建宁,何晓艳,等.HPLC-ELSD法测定乙肝宁颗粒中黄芪甲苷含量[J].中成药,2005,27(2):165-167.