当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究(可编辑)
山东中医药大学
硕士学位论文
当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
姓名:王芳
申请学位级别:硕士
专业:中药学
指导教师:孙秀梅
2003.4.20提要
豳的:通过对当归苦参丸方药不同方法提取渡中的指标成分含爨进行
比较,进一步验证半仿生提取法的优越性,同时对当蛸苦参丸的二次开发
,
提供季;学猿糕。坊法:以港妇寒装参中蠢效残分嚣魏羧、善参碱、蓉参总
碱及麒提取液的干浸膏为指标,对当归苦参丸方药半仿生提取的工艺条件、
缀合方式、半仿生撬取醇沉浓度避行优选,在诧基磕上,对巍菇苦参兔方
药半仿生提取液液、水提取液液、半仿生提取醇沉液液、
水提取醇沉液液进行成分禽量魄较,并避一步比较当烟、苦参各
单
味药半仿生提取波和水提取液中指标成分含量。结果:当归落参丸方药的
、.、.,煎煮
半仿生提取法工艺条件为次煎煮水的依次为
鼓羯姣次为,。,.;药耪维合毅混合熬煮瓣缀合方式戈毯;半镑生提
取醇沉浓度为%较佳;种方去提取液的综合
值顺序为:
。。。。。。当归、苦参稀提取方法掇取液均三半仿生提
%,苦
取法为优,其中阿魏酸的转移率为.%,苦参碱的转移率为
参总碱的转移率为 %,瑶论:当归酱参丸方药及单味药提取液中各指
标成分含量垮为半傍生提敬滚徒予承提瑕滚,拳薅生提取獒沈滚往予瘩提
醇沉液。实骏再一次证明半仿生提取法的科学性和实用性,提示半仿生提
取法蠢可施敬代承撵取法,半傍生提取簿沉法鸯哥髓代替承稳醇沉法,著
为中麴复方的研究提供了借鉴。
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笑键谣
当妇落参丸;半傍囊提取法;提取工艺;篷垒逐磐》
指标成分、
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当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
引
言
痤疮、湿疹为临床常见皮肤病,影响着患者的生活质量和美观。西医治疗痤疮、
湿疹等皮肤病多用激素、抗生素或其它的~些消炎抑菌药,易产生过敏,肝、肾损
伤,色素沉着,停药后反弹等副作用“;而当归苦参丸是我国第一批非处方中成药,
其作用缓和,毒副作用小,价格低廉,无需联合用药,是治疗这些皮肤病较理想的
复方。
当归苦参丸来源于《古今医鉴》中的参归丸,有?血、祛湿的功效,主要用于
血燥湿热引起的头面生疮,粉刺疙瘩,湿疹刺痒,酒糟鼻赤等症。该方由当归、苦
参两味药组成,对于由于雄激素分泌过多、细菌感染、炎症、变态反应及免疫功能
异常引起的痤疮、湿疹等皮肤病有良好的疗效。但当归苦参丸多以药材原粉入药制
成大蜜丸,不但服用不便,易霉变,而且挥发性成分易损失,质量难以控制。目前,
对当归苦参丸方药成分提取和剂型改革方面的研究报道很少,为
此,采用“半仿生
提取法” ,简称法对其进行提取研究。
“半仿生提取法”是既符合药物经胃肠道转运过程,适合工业化生产,体现中
医治病综合成分作用的特点,又有利于用单体成分控制制剂质量的一种比常规提取
方法更优的中药和方剂药效物质提取的新技术。它将整体药物研究与分子药物研究
方法相结合,从生物药剂学角度模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理,为经消
化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。
多年来,中药制剂工艺主要存在两个问
:一是“唯成分”论,二是“通则”
论。“唯成分”论是指针对中药及复方中的单体成分选择适宜溶剂和方法提取。这种
方法从本质上是用西医药的观点对中医药的概念、范畴进行曲解和改造。它不能体
现复方的整体作用和中医临床用药的综合作用特点。“通则”论则是指中药及复方一
律采用“水煎煮”法或“水提醇沉”法进行提取。但是随着科学的进步,几千年来
传统的水提取工艺,已经被证明损失较大,提取不完全。:从年代
后期一直习用
的“水提醇沉”工艺也暴露了不少弊端。‘。因此将“水煎煮”法和“水提醇沉”法
作为通则对所有中药及复方进行提取显然是不合适的,是绝对化了。
为了能将方剂中的药效物质最大限度的提取出来,以保持原方特有的疗效。半
仿生提取法在提取中坚持“有成分论,不唯成分论,重在机体的药效学反应”,突山东中医鲻大学届硕士举位论克
破了水提醇沉的旧思路、日方法,既体现了中医临床用药的综合作用特点,又符合
强暇蘩耪经露弱遂转运吸收豹蘸瑾。它致一释或死稀有效成努、总浚壅耪及不同投
性部分等作指标和戏主鬻药理作用为指标,选择工艺条件。用选定的酸性水、
中性承和碱性水依次连续提取,这样既能充分发挥混合扬成分的综念作用特点,又
有利予利用单体成分控制制荆质量。
本论文拟以当归茜参丸为例,骏证半仿生提取法的科学性和实用性。首先选用
当妇葶爨苦参审鲍有效成分隧魏酸、茜参碱、莲参总碱及于没囊为拯撼,月均匀设诗
对当归苦参丸方药的半仿生提取法工艺条件进行优选,再对方药组含方法、半仿生
提取黪沉浓发进行绫选,在貌基醢上,魄较《秘方法半傍裳提取法、半傍罄疆取
醇沉法、水提取法、水提醇沉法提取液的指标成分含量,选择当归苦参丸进行剂
壅改攀时的褥取工艺。同时避一步对当、藩参荸妹药进行半仿生提取法帮永提取
法提取液中搬标成分的含量比较,辫次验诋半仿生提取法的优越性,并以单味药的
有效成分含擞为基础,得出有效成分的转移率,为当归苦参丸的二次开发提供科学
婊撂。研究内容
文献研究综述
.
与当归苦参丸相关的研究进展情况
当归苦参丸来源于《古今医鉴》参归丸,原书记载“参归丸,治酒糟鼻,乃血
热入肺”。近代医家在辨证基础上,将其广泛用于治疗血燥湿热所致的头面疮疡,粉
刺疙瘩以及湿疹等疾病。
痤疮、湿疹等皮肤病是临床常见病,其发病机理目前尚不十分明
确。西医认为
湿疹是由多种内、外因素引起的真皮浅层及表皮炎症所致,与变态反应有关。痤疮
则与雄性激素分泌过多、免疫功能失调和局部细菌感染有关。祖国医学现多认为此
病系由于脏腑功能失调,素体肝火过旺,肺胃蕴热,血热瘀毒壅盛,外感毒邪与内
蕴湿热相扰,熏蒸不解,滞久化热,瘀毒郁于肌肤而发。
当归苦参丸功主清热活血,祛风燥湿,杀虫止瘁,临床主要用来治疗湿热蕴结,
熏蒸于上所致的头面生疮,湿疹刺痒,酒糟鼻赤以及粉刺疙瘩等。本方选苦参为君,
该药味苦性寒,具有清热燥湿,祛风杀虫之功。然苦参属苦燥伤阴之品,血虚生燥
易加重瘙痒,故佐以当归,该药味甘辛苦,性温能养血润燥,与苦参相伍,既可防
苦参性寒助湿之弊,又可用其辛散活血、补血之功,阻遏湿邪重浊粘滞之性,使之
能寒温并施,寒不助湿,温不增燥,燥湿无妨补血,补血无碍燥湿,血活湿不得留
滞,共奏清热活血,祛风燥湿,杀虫止痒之功。
现代药理研究表明:茜参碱具有明显的抑制金黄色葡萄球菌、皮
肤致病性真菌
及变态反应的作用“。,裴仁九等人研究证明苦参碱对网状内皮系统吞噬功能、迟发
性超敏反应、血清溶血素的生成均有抑制作用”。苦参总生物碱对金黄色葡萄球菌
也有抑制作用”。苦参抑制变态反应的
与氨茶碱相同,即苦参中的苦参总碱能
抑制环核苷酸磷酸二酯酶,提高体内环磷腺苷,阻止肥大细胞脱颗粒释放组胺“”“。
当归含有阿魏酸、多糖、种氨基酸及微量金属元素等成分,具有提高机体细胞免
及类雌激素样作用“”的作用。当归中的阿魏酸具有抗氧化作用,
疫、体液免疫功能“
通过对自由基的消除,阻断了自由基的反应而发挥抗损伤、提高免疫系统功能,同
时还有抗菌消炎等作用““。
当归苦参丸有?血活血、清热祛风利湿的作用。有实验研究表明:具有此类作山东中鞋筠大学屉硕士学位论文
用的复方有较强的抑制小鼠变态性接触性皮炎的作用““。相对西药,它疗效可靠,
裁佟甭小,觅需联合用药,艇在帮黧方面它仍以药材原粉入药,不仅服爝不便,挥
发性成分易损失,而且质量难以控制。近年来对其刹型改革鞠成分提取方甏的研突
却鲜有报道。
。目裁中药复方戆提取琏状
中药提取是以中药材原料中分离有效成分为目的的单元操作,提取效率的高低
壹按关系至翻裁赘蠹在质量、稳床疗效及经济效益等。多年来,毒予受嚣静悉维方
式的影响,中药制剂工艺一窟踏步不前,没有走出国己的路,主要存在两个问题:
一是“准成分”论,二是“遴鄹”论。
.。“唯成分”论
这种方法从本质上是西药的化学研究方法。主蒙是针对中药复方制剂中的单体
成分躲理化瞧质,选择逶宣熬溶劐遴行提取。毒入甚至恕这秘阻单髂成分必猿据翳
提取视为“中药现代化”,怒与“国际接轨”。虽然从大医学角度看,这种研究值得
鼓藏,因为京对骚炎方裁孛菜耱药锯鹃纯学残分及蕊药瑾警瘸十分露秘,凌可戳簸
微观上说明方荆的某些药理作用机制,使制成的制剂更精确化、量化,有利于进一
步走入工合成的道路,为西茨增添一种薪的箍床用药。僵它忽视了转物之间各种戒
分的屡次性、联系性,不能体现复方的整体作用,照不符合中医临床用药的综合作
用特点。这种整体等于部分之和的形而上学的思维方式在中药制剂上统治人们的头
照,盛将会使孛药巷趣鹜枣疲寿懿发展方定。
..“通则”论
“逶翊”楚普遍逶溪豹琢鬻。审莼裁裁瓢弱年代嚣蘩一矗习雳“承提醇沉”法,
即以水为提取溶剂,提取药物后再用一定浓度的乙醇沉淀,去除杂质后得到“有效
部位”。它是根据多数药物成分在永和醇中溶解度较大,且永和醇价廉易褥,使瘸安
全而提出的。这种应用有效部位在临床上能够代表或部分代袭原方荆疗效的提取方
法,有利于中药发挥其综合效能,符合中医用药的特点。但是“水掇醇沉”法还是
鼠化学角度,薅不是生物药裁学角度考虑趣题。“承提醇潺”法虽然霹戳达到“去糖
存精”的目的,但沉淀也会带走一些有效成分,一必在水提取液中含量本来就不高
浆成分在经过凡次静滚处瑾之磊,鸯一部分霹疆滤涂,显鸯蓬有效戏分不一定溶解
于乙醇中,例如对免疫功能旃重要调节作用的多糖类等,易造成有效成分损失。而
当归苦参丸方药的丰仿生提取法实验研究
且药物的疗效不仅取决于投入的原型药物,也包括药物的代谢物。有些化合物本身
虽然没有活性或活性不强,但经代谢后变得有活性或活性增强,更何况有些药物不
一定溶于水或乙醇中。观察问题的片面性、表面性、孤立性束缚了中药制剂的新开
拓,阻碍了制剂工艺向新的高度飞跃。
在新的思维方式指导下产生的“半仿生提取法”既符合中医药理论,又能体现
现代科学技术水平,必将为医学模式的转换起到较大的推动作用。
.半仿生提取法的特点
.
半仿生提取法是分析思维与系统思维的统一
分析思维的长处是使构成物的成分量化、精确化,能够较为准确地把握事物,
较为深刻地认识事物;其短处是忘记了要素和整体的关系。系统
思维强调的是构成
事物要素的系统性,对局部的认识是不精确、模糊的。中药及复方的作用特点是多
成分、多途径、多环节、多靶点。半仿生提取法根据两种思维形式的长处和短处。
以一种或
取长补短,提出了“有成分论,不难成分论,重在机体的药效学反应”。
几种有效成分和或主要药理作用为指标优选提取工艺,又不拘泥于某化学成分
或适合纯化学成分的药理模型,而是考虑到综合成分的作用。
..半仿生提取法是单体成分和混合成分的统一
中药成分复杂,复方中所含成分更复杂,难以用一种成分的药效来代表整个中
药或复方。半仿生提取法在具体的工艺选择中,既考虑到单体成分,又考虑到活性
混合成分,以单体成分做指标和或适宜的药理模型作指标,提取活性混合物,
使单体寓于混合物中,这样,既有利于发挥活性混合物成分的综合作用的特点,又
有利于单体成分控制制剂的质量。同时考虑各指标在工艺选择中的主次,给于不同
的加权系数,
化处理后加权求和,结果更可靠。
..
半仿生提取法是口服给药特点和中医治病特点的统一
口服给药的吸收受消化系统生理状态、药物理化性质和食物等多种因素影响,
多数药物是弱有机酸和弱有机碱,分子型药物相对离子型药物易吸收。对药物吸收
而言,增加其溶解度比考虑掷离度更重要。中医用药决不是单体成分,而是多种成
分相互作用的综合结果,半仿生提取法将整体药物研究法与分子药物研究法相结
合,从生物学角度模拟口服给药及药物经胃肠道转运原理,为经消化道给药的中药
制剂设计的一种新的提取工艺。山东中医药走学届硕士学位论文
半仿生提取法之所以称之为“法”,是因为为了适合工业化生产的需要,提
取条件不可能与人体消化道环境完全相同,仅是“半仿生”而已。例如,法是
在常压下煎煮,其温度与体温差别很大;人体胃肠道中有多种酶和细菌的作用,而
法不加酶等物质,因为煎煮温度下可使其失活。
此外,“法”与纯化学观点的“酸碱法”有着本质的不同。 “酸
碱法”是
针对某单体成分的溶解度与酸碱有关的性质,在提取溶剂中加入适量的酸或碱,调
节至~定范围,其目的是使单体成分溶解或析出,其本质着眼于个别;而“
法”对中药成分的提取是模仿口服药物在人体内的转运过程,采用选定值的酸性
水和碱性水依次连续提取,其目的是提取含指标成分高的“活性混合物”,其本质
是着眼于整体。
.半仿生提取法的研究进展
半仿生提取法突破了近半个世纪水提醇沉工艺的旧框框,将中药口服给药的传
统同现代生物药剂理论相结合,使传统用药在理论上得到升华,提供了中医药学中
中药和方剂以综合成分发挥药效的传统理论与经验,又同西医药学重视单体有效成
分和动物实验指标评价药效与安全性的现代科技接轨,通过芍甘止痛颗粒剂、寒痛
定泡腾冲剂、四神茶剂、麻杏石甘汤、当归苦参丸、参附汤、乙肝颗粒剂、黄连解
毒颗粒剂等制荆“。”和甘草、麻黄、川乌、黄柏等单味药“”
的实验研究证实,
法在增加有效成分提取率、提高某些药效学指标方面明显地优于法,充分体现了
半仿生提取法的先进性及科学性””州。进一步提示:半仿生提取法有可能代替水提
取法,半仿生提取醇沉法有可能代替水提取醇沉法。
当归苦参丸方药半仿生提取法工艺条件的优选
.仪器与材料
一型精密计上海雷磁仪器厂;型电子分析天平上海第二天平
仪器厂:?型离心沉淀机上海第三分析仪器厂;一型医用超声波清
洗器昆山市超声仪器有限公司;一薄层扫描仪日本岛津;定量毛细管日
本。
.,的干燥根:
药材经鉴定,当归为伞形科植物
的干燥根。
苦参为豆科植物苦参
阿魏酸对照品批号:,苦参碱对照品批号:?均购自
当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
中国药品生物制品检定所,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。
.
当归苦参丸方药提取工艺优选实验设计确定考察因素水平
根据法理论,在药材粒度、煎提温度、煎提用水量、滤过、浓缩
等条件相
同的情况下,确定考察的主要因素与水平,见表。
表 因素与水平
.
均匀设计安排实验
根据中国航天工业总公司第三研究所提供的×拟水平表安排各
因素水
平进行实验。实验
见表。 表 。×实验设计表
??
序号
. .
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.实验方法与结果 .
样品液的制备 将处方中当归、苦参种药材分别粉碎,按处方比例称取~目粗粉
共,
混匀,用。双提法”在常压下加热回流提取次加水量分别为药材
重量的、、
倍,水的值及提取时间按表,提取液用层纱布加目筛,分别滤过,
离
心.~,,合并上清液,浓缩并定容至即得每样品液相
当于原处方药材.。挥发油另器保存。
山东中匾药大学届硕士学位论文
..供试液的制备
取..顼下种样晶液各,予蒸发皿中水浴蒸至近干,加硅藻土,揽
匀,烘干,研细,以乙酸乙酯:甲酸:,索氏提取,回收溶刹,残浚
以甲醇定容至,得到供试液。、。每供试液相当于麒处方药材。
取。.瑗下秘样黢滚荟,熙浓氨本调节珏至。鼹,置蒸发畦中东
浴蒸至近干,加硅藻土,搅匀,烘干,研细,以氯仿索氏提取后,回收
氯镑,残渣戮氯傍定容,褥到镞试滚。每难镞试滚耀当予覆处方药榜。
..对照液的制备
精密称取阿魏黻对照豁.,甲醇定容,得酣魏酸对照液;精密称取蔷
参碱对照晶。,无水乙醇定容,褥簧参碱对照液,备用。
..阿魏酸的定性检查翩’,分疑点予一块。%?硅驳
取供试渡各。 及阿魏羧对照波.
薄层板上,用苯一冰醋酸一甲醇::.上行展开,挥干溶剂,于紫外
下鬣察,莰试晶色游中在与对照瑟色谱程藏谊置上显疆弱深夔色荧必斑点凳鎏。
图 当归苦参丸方药躺液的当归薄层鉴别色谱豳
。阿魏羧对熬滚。撵晶
。样品
.当归 .样品缺当归归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究 ..
阿魏酸的含量测定
...线性关系考察
取阿魏酸对照液.,. ,. ,. ,. ,. 分别
点于一块.%.硅胶薄层板上,用苯.冰醋酸一甲醇::.上行展开 ,挥干溶剂,于紫外下观察,测定吸收曲线,见图。在处有最大 吸收,而在处吸收最小。故扫描条件为:双波长反射式锯齿扫描,
检测波长为
,参比波长为,,狭缝,×.,灵敏度中,薄层扫描测
定,以峰面积积分值和阿魏酸点样量进行回归分析,得回归方程: :,.。以点样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标作图, 得一不过原点的直线,在. 线性关系良好,故用外标两点法测定
含量。
~.
结果见表和图。
表阿魏酸标准曲线测定值
阿魏酸紫外吸收图
图
联『
离『
每『
。
一点样量
圈 阿魏酸标准曲线图
生查主堕麴叁鲎.星塑主鲎焦堕圭 。
...精密度实验
将阿魏酸对照液.姐点于同一.%?醚胶薄层板上,展开,按上述步 骤进行扫描遣续次,.%,表明仪器精密度良好,结果见表。 表 仪器精密度实验结果
予同一.%?硅胶薄层板点相同爨哑魏酸对照液.“,共个点,按 上述步骤进行扫描,.%,表明点样精密度良好,结果见表。 表 点撰壤密瘫实验缀果炻
基型塞迭塑
??
嘲??????????。。??????..????..?.????.???????????????????????
.?一
...稳定性实验
褥供试液豹嗣一斑焘,镣隔飘按上遮步骤羟绉次。缝果袭明,斑点
委裁
积分值在稳定。结果见表
表稳定穗实验结莱勘 膏 %
测定次数
峰面积
????????????????????????????????????一
,..供试滚戆含爨测定 。、. ,分别点子同一块 ,阿魏酸对照液.
取供试液各.
.%?硅获薄菇扳主,羧...硬下条件震开,定位,孛叠攒,次溅定结
采燕
表和图。
当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
.. . .
. . . .
.
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. . . .
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. . . .
. . . .
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. .日
. 已.目
;“既一一毒一一 .三一一.
图阿魏酸薄层扫描图 .样品
.阿魏酸对照品
...阿魏酸的回收率考察 精密量取号样品液,分别精密加入.阿魏酸对照液.。一,
制备成供试液,按样品测定方法测定,结果见表。表阿魏酸加样回
收率考察结果
序号 样品量 加入量 测定量 一%回收率% %
.苦参碱的定性检查
取供试液各. 及苦参碱对照液. 。分别点于一块.%?硅胶
薄层板上,用甲苯一丙酮一无水乙醇一浓氨水::.:上行展开,取出,
晾干,改良碘化铋钾显色,供试液色谱中在与对照液色谱相应位置上显相同橙红色
斑点。见图。
图 当归苦参丸方药液的苦参薄层鉴别色谱图
.样品 .苦参碱对照液.样品
.苦参 .样品缺苦参
. 苦参碱的含量测定
...线?生关系考察
,. ,. ,. 分别点于一
,.
取苦参碱对照液.当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
.%?硅胶薄层板上,用甲苯一丙酮一无水乙醇一浓氨水::.:上行展
开,挥干展不剂,改良碘化铋钾显色,玻璃板覆盖定位,测定吸收曲线,在
处有最大吸收,而在处吸收最小,见图。故扫描条件为:双波长反射式锯齿
.,灵敏度
扫描,检测波长为,参比波长为,,狭缝. 中,薄层扫描测定,以峰面积积分值和苦参碱点样量进行回归分
析,得回归方程:
:.一.,.。以点样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标作图,~. 线
性关系良好,故用外标两点法测定含量。 得一不过原点的直线,在.
结果见表和图。
表苦参碱标准曲线测定值
: :
:
堂壁量
:??』蔓一
: 望:
些亘堡 箜:
:?堡堕坠旦一
图苦参碱紫外吸收图
鼷
旧
磐
???????????????????。????????一??????一????
点样量
图 苦参碱标准曲线图
...精密度实验
点于一块.%?硅胶薄层板上,按上述步骤进行 将苦参碱对照液.
扫描连续次,.%,表明仪器精密度良好,结果见表。出查士堕垫叁
兰壁塑主壁垒垒圭
表仪器精密度实验缡果
,共个点,
予嗣一块。%?硅浚薄层扳点稳弱鳌苦参虢对照液. 按上述步骤进行扫描,.%,表明点样精密度良好,结果见表。 表 点样精密魔实验测定结果:
塑塑 星
型塞达墼
蜂谣积
...稳定?陛实验
将供试液的同一斑点,每隔扫描次。结巢表明,斑点面积积分值在
内稳定。结果见表。
袭 苦静碱稳定性实验测定结果
型塞盗鍪
星??塑坚一
鲤
丝塑 丝些鲠塑
坠塑??堕一
。..供试滚的食曩测定
、.斗,分别点于间一块
墩供试液各. ,苦参碱对照液. .%?娃愆薄瑟叛上,按。,.自下条终震嚣,定像,扫撵,次测定结暴
见表和图。
表 种挺取液中豹苦参械含量 一一????????????????????,?????????????一
含量?一
摄
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序譬?????????了??????. . . 垂 彳 跎曲强硒站? 墼
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二???坠???丝一
当沿苦奉丸方鹞磅孚仿童提取法实验擐究
国..驹秘
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?”?叫?“?”
窭苦参碱薄攫据搓雕
.样品
.苦参碱对照品
...苦参碱的醚收率考察 ,加入.
后,精确量取稀释液 精密量取号样器液.,稀释至 苦参碱对照液,制备成供试液,按样品测定方法测定结果见寝。
表苦参城加样回收率考察缀果
回收率
加入量 测定量
样品量
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燃 粥褥伯
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..苦参总碱的测定
彀供试液各燃毛予三角叛孛,零浴蒸予,残渣瘸无承乙簿溶解,农
浴蒸于,
加乙醚溶解后,加.?.硫酸,水浴挥净己醚,加新沸过的冷蒸馏 水,甲基红漓,醴.?鬣氧铯镳滴定至黄色,戳无隶乙簿 和硫酸滚,?.四,苦参总碱含量以苦参碱计,苦参总碱的 含量测定结果见表。
辫参慧溅的含量×?
:氢飘化钠的浓度
。;窆舀对照中游耗豹缀氧毽锻熬毫秀数? 生妻室垦蔓墨鲎壁黧主芏堡塑蕊
:供试液消耗的氢靛化铺的毫升数
:落参碱的分子最
表 种掇职液中的苦参总碱含量
禽蘸?‖
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一竺三二三二二王。。
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取祥麓液吨予已经熬的蒸发髓孛,承浴蒸至近予,在烘箱辛绥至
怄
重,计算于漫膏得率。结聚见表 袭 ?种提取液中的干澄膏得率溯定结暴
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禽量?‖
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黟号?????????????????一 .
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一?????????????????????一 竺墅.:???羔登一
..水分测定 精确称敬已干燥的予漫謇于圜底烧瓶审,加约?绎苯,连接农分
测
定装晷,从冷凝管上口注入甲苯,鼹水分测定管狭长部分满目,加
热保持蹲一秒滴
下滴甲苯液,至水分测定管中水分的量不荐增加,静置井读数。结
果觅淡口
.
????竺???????????????????????一.???????????????兰坐量变
查垄蔓照?堡兰壅璺些塞堕童塞?~ 表,
种提敷液中平浸膏的水分测定结粟 一???????????????????????????‖??????~
查墼塑
帝萼
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:塑 :塑
:塑
:塑 :
.实验结果的处理
将阿魏酸、蕾参碱、苦参蕊羰、予浅鬻个揩糠综会,褥备数据按
下列公式遴抒
标准化处理:
。瞪?一/
。:标准化后的值。
,
一样品中种成分的含量。
,;榉品孛释成分的平均毽, ,:成分的标准偏差。
禳壤各稽轹在提取互艺选撂孛照绘与不阕酶热投系数,分裂将标
准佬螽熬蕊熟
权后求和即得综食评价指标值: 阿魏黢苦参虢苦参总碱×.予浸膏×.,结莱觉表。
袭
种提取滚中各指标成分含量的标准化值及综合攀价值
序号 阿魏酸 苦参碱 苦参总溅 予澄膏 壤
. 。 . . . . 。 。孽。 心, ,
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《 承 莰 筑
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一.
一.
了山东中医药大学届碰士擘住论戈
.实验结采优他处理
梅表中数据投计算的值输入计算枫,用的数据分拱模块处理,彳导嬲
归方程;..×.×.×.××
一.×。一。:。,.,
.“““,所以检验通过,回归方程有意义,爵将方程在计算机上进行
饶纯处理, 静期蘩僮方囱大者为镣,褥窭警翔苦参丸方药静“法”最后提取条
件:煎用水的依次为:.,.,.:总煎提时间为:.,
预测最大为.。结合生产实际,确定其法最佳工艺条串嫩:三煎承的筛
依次为,、。、。,煎煮慰闼依次为、.、.。
.验证优化条件
稷蠢俊选夔王装条转,按..~。磺方法藏法遴嚣次蓬复实验,结果见
表。将数据按公式,.工,一,/进行标准化处理。』为验证实验样品液中
戒钫静含麓,叉,、,势弱秀个承平榉茹液孛戒分魏平鸯蓬霹椽准差,。为标准
化聪的值。同上,以标准化后的值加权求和,即得综合评价值,结
果见表。结果
表明,验诚实验提取液综合评价’值接近于预测德,且高于表中种
提取液熊
综合评绘俊。
表验证性实验提取液各指标成分含髓 廷鏊鍪 :至董叁夔:羲:董璧璺堡璧?:??三望篓:.?
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膏
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.
标准化值
.小绪与讨论
。。
弱均匀设谤佐选当归苦参曳方药的擎仿生撼取法提取工艺条件,煎用水的
依次为:.、.、.,煎煮总时闸为:.。结合实际生产,拟
定箕工艺条释菇:熬臻永豹鞠菝次先。、。、。;蒸煮嚣瓣依次灸、。、
.。
..阿魏酸对照品在甲弊中易变质分解,所蔽酶现配现璃,避毙低温绦存。
塞当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
.双波长扫描法测定苦参碱含量中,采用改良碘化铋钾显色后,应立即覆盖玻
璃板,以肪色斑消褪,影响测定结果。
.每一部分的实验数据都进行了标准化处理,以消除指标成分量纲不同带来
的差异,使实验的可比性增强,并根据各指标成分在药效学方面的不同作用给于不
同的加权系数,突出主要药效成分,使结论更加合理、全面。
.
中药在人体内发挥的疗效绝非单一成分的作用,而是多种成分相互作用的
综合结果,在相同的滤过、精制条件下,总固体物或干浸膏量大,从中医药角度应
视为较佳。故本课题除选用当归、苦参中有效成分阿魏酸、苦参碱、苦参总碱为指
标,还选用干浸膏作为指标成分,进行综合评判量化。
..所测干浸膏得率较高,分析其原因有二:一是年版《中国药典》附录
规定:照醇溶性浸出物测定项下的热浸法测定,用%乙醇作溶剂,不得少于.%,
由于当归、苦参中含有大量的水溶性物质,且在不同的条件下煎煮,使得其酸性
物质、碱性物质以及在乙醇中不溶的多糖类物质得以提取完全。二是从“齐同对比”
的原则考虑,本实验未采用饮片,而是选用~目粗粉,所以干浸膏得率较高。
从水分测定结果来看:含水量%,符合干浸膏含水量的要求。
当归苦参丸方药半仿生提取法药材组合方式的优选
仪器与材料
一型精密计上海雷磁仪器厂;型电子分析天平上海第二天平
仪器厂;?高效液相色谱仪日本岛津;?型离心沉淀机上海第
三分析仪器厂;一型医用超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司;一
薄层扫描仪日本岛津;定量毛细管日本。
.药材组合方式
方中药材当归、苦参可排列组合成组,即用优选出的半仿生提取工艺条件,
对当归和苦参合煎为一组,对当归和苦参分别单煎后再合并为一组。
.方法与结果
..样品液的制备
将处方中种药材分别粉碎,按处方比例称取~目粗粉,混匀,用“双
提法”在常压下加热回流提取次,加水量分别为药材重量的、、倍,水的
值依次为:.、.、.,提取时间依次为、.、.,提取液用层山东中黻药大学届硕士学位论文
纱布如 岛筛,分别滤过,离心
?,,合并上消液,浓缩戎:定
容至,即得混合煎煮液每样品液相当子原处方蓊材.。挥发油另器
保存。
将当归粗粉、占参粗粉按上述方法,分别提取、滤过、离心、浓
缩,
合势定容至褥擎熬漉合液每撵燕滚稳警于爨处方药楗。。挥发淫 另器保存。
.,侯试滚麓鞠备
按..项下制锯得到供试液每供试液相当于原处方药材,供试液 每供试液相当于原处方药材。
,,对照液的制簧
精密称取阿魏酸对照品.,甲醇定容,得阿魏酸对照液;精密称取
苦
参碱对照鑫。,无承乙簿定套,季譬装参疆对照渡,撰震。 ..阿魏黢的定性检查
溺..矮下,子紫矫下溪察,谈试滚簸谱孛袭与对照液色谱稿瘫位
登
上显相同深藏色荧光斑点。
.阿魏酸的含羹测定
。..色谱条牛汹
柱;流动搁:甲醇一含%醋酸的水:检测
色谱柱:
波长:滚这:。?~;棱渥:?;定爨阀:。
...线性关系考察
取。.矮下弼魏酸对照液分鞭耩释至?‘,?~,?‘,?后进样,按上述
色谱条件测定,以峰面积对浓度进行回归,
?一,
?‘线性
?‘~
得回嬲方程为:一,.,在 关系良好。结果见表和图。 寝阿魏酸标准曲线测定值 婴
鎏壁蓬霪塑::
丝生?一一塑旦~一
.
婴嬖
丝
望
:
:
些堕黧当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
匿
旧
鹫
进样浓度.。
图 阿魏酸标准曲线图
...精密度实验
取 进样,连续进样次,按上述色谱条件测定 ?阿魏酸对照液
峰面积,.%,表明精密度良好,结果见表。 表精密度实验结果
...稳定性实验
取同一供试液进样,于天内按上述色谱条件重复测定峰面积
次,.%,
表明仪器稳定性良好,结果见表。
表仪器稳定性测定结果
取同一供试液按上述色谱条件每天测定峰面积,连续,.%,表明日
间稳定性良好,结果见表。
表 日问稳定性测定结果
堕型
至型壅达塑
垫:
丝翌 塑
些亘塑
:一.样品测定
取供试液与阿魏酸对照液按上述色谱条件测定峰面积,计算结果
见表和图
。阴性对照液在相同的色谱条件下未见干扰色谱峰。??一生查垦
堑叁茎鱼塑主堂堡垒圭
表
种组合提取液中的阿魏酸含量 含量?一样品液
??
:
堕
.
.
单煎混合液
.
.
堡鱼整重堡 :
墅:
兰:
: :塑
注:.
图阿魏酸高效液相色谱图 .阿魏酸对照品.样品.阴性对照品.阿魏酸色谱峰
...阿魏酸的回收率考察 精密量取已知含量的混合煎煮液,精密加入?。阿魏酸对照液当耋
营誊丸旁耩秘书彷皇提取海赛齄辫宪 也
姆
始魁鼢黼蹒
凇漱耋蓦僦凇 耄莲耄驽般 勰艚;瓣瓣 强龆耩褥羚
撇撇瓣撇蹴 勰嬲?瓣瓣 瓣?粥瓣瓣 :塑。. 塑:翌 :竖。。 ?。. .?垫垫, 。。苦参碱翘金星测定
赣敬.顼下镦试液嚣务敷蒋参碱辩照液。?,。壮魔予翔
一浚.%?疆黢藩瓣援,簌。.。矮下条拳袋开、显爨、镑爨,鞋多豁
嚣囊
法测定英禽蘧,辖采嚣液
裘 种组寅疆职液率豹替参碱含蠢 葛
榉晶涟??芝攀可一。。纛
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一:一,
注:。
.。若渗慧城豹客鬟测定
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耩褒..顼下供试渣嚣娥予三懿簸串,按黢,。
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榉熬滚???????????一???一《。矿辫, 躺.
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堡垒夔枣蓬.
:?一一旦曼????』蔓一
注.
,,丰澄誊褥攀抟溯寒
精确取样品液长,按照,。项下测定禽爨。.缩聚觅
袭。???????????????????生立幽叁芏鱼塑查茔焦垒圭
表
种组合提取液中的干浸膏得率测定结果
牙
鱼量:立
样品液??
一一
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盟
?????????土??一 单煎混合液. . .
.
堡垒塑耋堕
:塑
:竺 :塑
:
:竺
注:.
..干浸膏水分测定 按..项下测定,结果见表。
表
种组合提取液干浸膏的水分测定结果
.小结与讨论
中药材成分复杂,单味药中可含有多种成分,复方中的成分就更多,各种成分
之间存在着相互作用,在煎煮过程中可能会产生增溶、沉淀等现象,甚至可能发生
化学反应,影响成分的转移率及药效的发挥。以阿魏酸、苦参碱、苦参总碱、干浸
膏为指标对当归苦参丸方药中当归、苦参味药进行种组合方式的半仿生提取液
进行比较结果显示:各指标成分含量混合煎煮液明显优于单独煎煮液,有显著性差
异。
当归苦参丸方药半仿生提取醇沉浓度的优选
.仪器与材料
同.项下。
.实验方法和结果
..
样品液的制备
称取倍量处方比例~目药材粗粉,按优选的最佳提取工艺条件和药材组
合方法进行半仿生提取,将总提取液平均分成份,每份浓缩并定
容至,各缓
慢加入乙醇,边加边搅拌,至规定醇浓度%、%、%、%、%、%,静置, .~,,上清液回收乙醇至无醇味后,分别
~冷藏,离心
,即得不同醇沉浓度的样品液
用蒸馏水定容至
..
供试液的制备当归苦参丸方药的半仿生提驭法实验研究 精取..项下样品液分别按..项下制备得到供试液肌每供试液相
当
于原处方药材,供试液每供试液相当于原处方药材。 .
对照液的制备
精密称取阿魏酸对照品.,甲醇定容,得阿魏酸对照液;精密称取
苦
参碱对照品.,无水乙醇定容,得苦参碱对照液,备用。 .
阿魏酸的含量测定
精取..项下供试液依...项下条件测定其含量,结果见表。 表不同醇沉浓度液中的阿魏酸含量
醇沉浓度 含量?
%%
. . . . .
. . .
.
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.
. . . . .
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. . .
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丝: 墼:
墼:
.
苦参碱的含量测定 、. 点于同一块 及苦参碱对照液. 精取..项下供试液各. .%?胶薄层板,依...项下条件展开、显色、扫描,以外标两点法测
定其含量,结果见表。 表 不同醇沉浓度液中的苦参碱含量
醇沉浓度 含曼: %?
%
.
.
. .
.
.
.
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.
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塑:
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塑:
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.
苦参总碱的含量测定 精取..项下供试液各,按照..项下测定含量。结果见表。???一一.
生至主堕题叁堂鱼塑主鲎焦堡圭
表不同醇沉浓度液中的苦参总碱含纛
醇沉浓度
含量?矿 孑
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.
.
. .
。 。
.
..干浸膏的含量测定 糟确取榉晶液各,按照..顼下测定。绪袋觅表。
表不同醇沉浓度液中的干浸聱得率测定结果
酵沉浓度 含量? 一
%%
?,
.
. . , . , . . . . , . , . . . . . . . , 。 . .
.
. . . . .实验结果的处璩
按照.项下数据处理方法进行实验结果处理,结果见亵。当归苦参丸方药的半仿生提取法实验研究
表不同醇沉浓度队液中的各指标成分标准化值及综合评价值
.小结与讨论半仿生提取法不主张用乙醇去除杂质,但制备某些小剂量剂型时,浸膏量
不宜太大,而且有些药材中还含有很多吸湿性成分,在煎煮过程中溶出,使浸膏的
吸湿性增强,难以制成所需要的稳定剂型。本实验是在已优选出的当归苦参丸方药
法最佳提取工艺条件和药材组合方式的基础上,进行的半仿生提取醇沉浓度的
筛选,结果以%的醇沉浓度保留有效成分最多,为制各小剂量剂型提供参考。
..
醇沉时必须对乙醇本身的浓度作温度校正,以保证醇沉浓度的准确。校正
公式为:宴测一,×.当时室温为。
..加乙醇时应缓慢并不断搅拌溶液,以减少沉淀对有效成分的吸附。
当归苦参丸方药种方法提取液的成分比较
仪器与材料
同.项下。
.实验方法和结果
.
样品液的制备
将处方中当归、苦参种药材分别粉碎,按处方比例称取~目粗粉, 混匀,用“双提法”在常压下加热回流提取次加水量分别为药材
重量的、、
倍,提取时间依次为、..,提取液用层纱布加目筛,分别滤 ?~,,合并上清液,浓缩并定容至,即得水提取
过,离心
液液每样品液相当于原处方药材.。挥发油另器保存。 按上述方法,只将三次煎煮水的依次改为。、.、.,即得半仿生提 取液液 每样品液相当于原处方药材.,挥发油另器保存。 取液,加入无水乙醇至醇浓度为%,冷藏静置,离心
.。。,,液回收乙醇至无醇味,定容,即得水捉醇沉液液山东中医药
大学届硕士学位论文
每样品液相当于原处方药材.。
取液,加入无水乙醇至醇浓度为%,冷藏静置,离心~,,上清液回收
乙醇至无醇味,定容,即得半仿生提取醇沉液
液每样品液相当于原处方药材.。
..供试液的制备
精取,.项下样品液按..项下制备得到供试液每供试液相当于原 处方药材,供试液每供试液相当于原处方药材。
.
对照液的制备
精密称阿魏酸对照品.,甲醇定容,得阿魏酸对照液;精密称取苦
参
碱对照品.,无水乙醇定容,得苦参碱对照液,备用。 ..
阿魏酸的含量测定
精取..项下供试液依...项下测定其含量。结果见表。 表 种方法提取液中的阿魏酸含量
.苦参碱的含量测定
,.四块
及苦参碱对照液.
精取..项下供试液各
.%?硅胶薄层板,依...项下条件展开、显色、扫描,以外标两点法
测定其含量。结果见表。
表 种方法提取液中的苦参碱含量
含量?一
%
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液.
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苦参总碱的含量测定
精取..项下供试液各。,按..项下测定。结果见表。当归苦参丸
方药鲢事.生提取法实验研党
..译澄蠢襻率的溅定
精取样品液各,按照..项下测定禽嶷。结果见表。
表 种方法提取液千浸蕾铸率测定缡柴
禽量?‖
%
样晶液??????了?????一 .矿
. .
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..水分测窳 按.。矮下涮定,结栗爨表。
表 种方法提取液浸膏的水分测定结果
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.
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渡
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渡 :
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:竺 :
塑遒 实验结果的处理
按照.项下数据簸理方法进行实验结果赴瑾,缩莱觅表。综合评价
指标值
囊方图见图。 袭 种方法撼鞭液中各指标成分标准化值及综合评价值
?婆塞 堡
薹妻篁墼
塑婆鳖 釜量整 登釜逮
.
.
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::塑一..‘塑羔盥一山东中医药大学届硕士学位论文 匝丽砸一
?
图
种提取液综合评价指标值直方图
液 骶液 液
.小结与讨论
以阿魏酸、苦参碱、苦参总碱、干浸膏为指标对当归苦参丸方药
采用半仿生提
取法简称法、水提法简称法、水提醇沉法简称法、半仿生提取 醇沉法简称法提取并进行成分含量比较。结果个指标综合评价值
为:
。。。悯。。。从而说明半仿生提取法优于水提法,半仿生提醇沉法
优于水
提醇沉法,再次证实了半仿生提取法的优越性。
当归种方法提取液的成分比较
.仪器与材料
一型精密计上海雷磁仪器厂;型电子分析天平上海第二天平 仪器厂:?型离心沉淀机上海第三分析仪器厂:一型医用超声波清 洗器昆山市超声仪器有限公司;?高效液相色谱仪日本岛滓 .实验方法和结果
..样品液的制备
称取~目当归粗粉,用“双提法”在常压下加热回流提取次加水 量分别为药材重量的、、倍,提取时间依次为、.、.,提取液用 层纱布加目筛分别滤过,离心?‘?,,合并上清液,浓缩并定 容至,即得水提取液液每样品液相当于原处方药材.。挥发 油另器保存。当归擎参丸方药的半仿圭挺取法实验研究 按上述方法,廷蒋三次煎煮承静依次改为.、、.,依法得半仿生 提取液液每样品液相当于原处方药材.。挥发油另器保存。 ..
供试滚矗勺翩备
取液、燃液各,予蒸发皿中农浴蒸楚近于,加硅藻土,搅匀,烘手, 研细,以乙酸乙酯:甲酸:为提取液进行索氏提取小时,回收溶剂, 以学醇定容至,靼缮副静馔试滚。
..
对照液的制备
精密称取醚魏酸对愁最。,甲簿定容,褥鬻魏酸辩麓滚,备塌。 一
..
阿魏酸的含量测定 ,依法测定,
取已精箭好的样品液,在与对照品稽同的色谱条件下,进栉
结累见裳。
表当姻种方法提取液中的阿魏黻含量
妾
含爨?
样品液
%
.
.
. .
.
波
:翌
翌:
型: :
噬
:旦.一
淀:。
..:浸膏樽率的测定 次测定结果见表。
按照。,顶下方法进行测定,
袭粕归种方法提取液干浸膏樽率测定结粜 样晶液?广?萼盟四谚。。;.
.
液,
:
:兰
:塑
堂
:一上竺一
波:.
。.水分测震
按.,联下测定,结果篼表。山东中医药大学届硕士学位论丈
表
当归种方法提取液千浸膏的水分测定结果 样品液??????型
.转移率
由阿魏酸的含量测定可知:半仿生提取法简称法优于水提法简称
法,因此以液阿魏酸的含量作为当归药材中阿魏酸含量,可得:
嗽转降嚣薯雾甏毽%嘉赫舢雌,麟; 臌转棒嚣嚣雾鬈籍枷鬈未‰舢%毪删 .小结与讨论
..
以阿魏酸、干浸膏为指标对当归采用半仿生提取法简称法,水提法
简称法提取,并对其提取液进行成分比较,结果说明:半仿生提取法明显
优于水提法,有显著性差异,再次证明了半仿生提取的优越性。
..通过对转移率的计算,为当归苦参丸的二次开发提供了科学依据。
苦参种方法提取液的成分比较
.
仪器与材料
同.项下。
.实验方法和结果
..样品液的制备
取苦参单味药材粉碎,称取~目粗粉,用“双提法”在常压下加热回
流提取次加水量分别为药材重量的、、倍,提取时间依次为、.、
?一,,
.,提取液用层纱布加目筛,分别滤过,离心
合并上清液,浓缩并定容至,即得水提取液液每样品液相当于原
处方药材.。挥发油另器保存。
按上述方法,只将三次煎煮水的依次改为.、.、.,依法得半仿生
提取液液,挥发油另器保存。当归苦参丸方药的半仿生提取法实
验究
..
供试液的制备
取液、液各,用浓氨水调节至.后置于蒸发皿中水浴蒸至近干, 加硅藻土,搅匀,烘干,研细,以氯仿索氏提取后,回收氯仿,残渣
以
氯仿定容。得到种供试液每供试液相当于原处方药材。 ..
对照液的制备
精密称取苦参碱对照品.,无水乙醇定容,得苦参碱对照液,备用。 ..
苦参碱的含量测定
、.
,按照...
,苦参碱对照液.
取液. ,液.
项下方法进行测定,结果如表。
表 苦参种方法提取液中的苦参碱含量
..苦参总碱的含量测定
按照..项下方法进行测定。次测定结果见表。
表苦参种方法提取液中的苦参总碱含量
含量?
样品液
.
.
.
.
.
一:
一
一
一:
生垄?堕墅叁茎墨壁主鲎焦垒墨 ?一
按..项下测定,结粜见表。 表
羞参秘方法搓嘏浚手澄囊的承分测定缝巢
.转移率
由苦参碱的含量测定结果可以得出:半仿生提取液简称波中苦参
碱含
量明爨优于水提液简称液,因此以法若参碱的含量作为苦参中苦
参碱含量,
可德:
蛰参碱鼢嫩转移率篓菩鬟黧鬻。%西丽.川雌弧% 蒜参碱臌滚转移搴嚣菩霎雾鬻舢。%蕊丽.圳姒铆赫 苦参慧鼬磁转移率;嚣籍霎薯器篱蝴%蔷‰×粼弼麟 苦参总碱溅转移率嚣詈荔鬻曩籍×僦翥‰枷?妣% 。夺结与讨论
..
以苦参碱、苦参总碱、干浸酱为指标对苦参单味药采用半仿生提取法简称
法,水提法简称并法提取避行成分魄较,说明半仿童提取法优予永提法,
有显著性差异,再次证明了半仿生提取的优越性。 .