Friedwald公式法与电泳法测定极低密度脂蛋白的比较

Friedwald法与电泳法测定极低密度脂蛋白的比较 Friedwald公式法与电泳法测定极低密度脂 蛋白的比较 ? 462?实用医技杂志2007年2月第l4卷第4期(旬 刊)JPMT.February.2007.Vo1.14,No.4(IssuedEveryTenDays 滴,加供(受)血者3%一4%红细胞盐水悬液1滴.各管加入 低离子介质0.8ml,混匀静置1min,加凝聚胺1滴,混匀,以3 500r/min离心10s—i5s,倒出上清液(残留0.1m1),轻摇试 管肉眼可见明显的凝集状,如无凝集须重做.再加1滴假凝 集清除液,边摇动边观察结果.如果凝集散开为阴性,即为非 特异性凝集,如不能散开为阳性,即为特异性凝集.如反应可 疑应用显微镜观察,上述凝聚胺配血方法见(输血技术 学). 4 可以用含EDTA血浆代替血清进行交叉配血使用.若使 用血清可把标本放入37?水浴箱,使其纤维蛋白析出后再 用,否则,红细胞缠绕在纤维蛋白上造成假凝集现象.如洗肾 患者;血清(浆)中含有肝素,可出现假凝集,此时,须多加2 滴一4滴凝聚胺溶液,以中和肝素.冬天室温低,某些患者可 能含有冷凝集素而导致假阳性结果出现,遇此情况,须再滴入 2滴悬浮液后37?水浴1min,再观察,若凝集消失说明为冷 凝集.如盐水试验不凝集,凝集胺试验凝集说明有不完全抗 体,必须进一步做抗体鉴定. 5讨论 凝聚胺交叉配血技术主要用于检测患者血清(浆)中是 否有具有临床意义的红血球异体抗体先进国家早于8o年 代就广泛应用于血库工作卫生部就于1997年明确提出在 交叉配血时要检查是否含有不规则抗体,以保证输血安全,更 重要的是减少和避免了临床输血反应,而且凝聚胺试剂稳定 性好,操作方便,重复性好,而且不用特殊设备,大,中,小医院 均易于普及,推广使用. 参考文献: [1]王培华.输血技术学[M].第2版.北京:人民出版社,2003:226. [2]LalezariP,JiangAF.Themanualpolybrenetest:asimpleandrapid procedurefordetectionofredcellantibodies[J].Transfusion, l980.20:206-211. ?(收稿日期:200641-05) Friedwald公式法与电泳法测定极低密度脂 蛋白的比较 吴胜军,郭东峰 (浙江大学医学院附属邵逸夫医院,浙江杭州310016) [摘要】目的:评价琼脂糖电泳法与Friedwald计算法在测定极低密度脂蛋白.胆固醇中的优劣.方法:用PEP 全自动电泳分析系统和LX一20分别测定血清极低密度脂蛋白(VLDL?c).结果:在不考虑黄疸,溶血,脂浊等因素影 响下'rG在'rG150g/L,300g/L区段(在人正常血脂范围内),电泳法与与F公式法均值接近,r为0.897.随TG升高 或降低F公式计算结果偏低较多,尤其在TG<60g/L组两法相差明显.F公式计算偏低>10%者占TG150g/L一 300g/L组标本中的2l%,TG<60g/L组标本75.6%,随着TG降低而明显增加.结论:虽然用全自动生化分析仪测 定VLDL-C快速,方便,不需要人工计算,但所计算出的结果的准确性扣可靠性都不是很好,并且所用的试剂非常昂 贵,成本很高.全自动血脂蛋白电泳仪,操作方便,快速(大批标本并不比全自动生化分析仪慢),且结果准确,可靠, 试剂价廉,成本低. [关键词】Friedwald公式法;电泳法;血清极低密度脂蛋白 [中图分类号】R446.61[文献标识码】B[文章编号】1671-5098(2007}04-0462-03 测定血清极低密度脂蛋白(VLDI~C)不仅在临床诊断? 型高脂蛋白血症上很有价值,而且对动脉粥样硬化(AS)和冠 心病(CHD)的防治具有重意义,甚至已经渗透并应用于其他 诸多临床相关专业疾病的研究,如高血压,脑血管病,肾脏疾 病以及绝经期后妇女内分泌代谢改变等.血VLDL测定 化也日益引起临床化学工作者的重视,目前以VLDL中胆固 醇VLDL.C为定量VLDL的依据,VLDL-C水平与TG一样,是 判断高脂血症,预防AS的重要指标.但是近年来,许多学者 认为VLDL-C水平更能说明胆固醇的代谢情况.以往直接测 定VLDL.C的经典方法是超速离心分离VLDL,或超离心(去 除低密度脂蛋白LDL)结合沉淀,但均非一般实验室所能采 用.本文介绍琼脂糖电泳法和对Friedwald计算法,并对这两 种方法做出了评价. l与方法 1.1标本712例本院住院患者标本和门诊患者标本,取空 腹静脉血,分离血清(无溶血,黄疸,脂浊),血清在冰箱保留 ?3d.. 1.2仪器和试剂 1.2.1仪器PEP全自动电泳分析系统,EDC光密度扫描 仪,CEESCA软件均由HELENA公司提供;BECKMAN公司提 供的LX20全自动生化分析仪 1.2.2试剂胆固醇电泳试剂盒,美国HELENA公司提供; 甘油三脂测定试剂盒(磷酸甘油氧化酶法),美国BECKMAN 公司提供;胆固醇测定试剂盒(胆固醇氧化酶法),美国 BECKMAN公司提供. 1.3测定方法(TG,Chol,CHol电泳)' 1.3,1TG:磷酸甘油氧化酶法. 1.3.2Chol:胆固醇氧化酶法. 1.3.3CHOL电泳 1.3.3.1原理PEP系统是利用琼脂糖凝胶电泳技术对主 要脂蛋白进行分类.它通过酶试剂对脂蛋白带进行染色,并 通过光密度扫描仪技术测定脂蛋白中胆固醇的含量.距离阳 极最近的q.电泳带对应于高密度脂蛋白,邻近的前B电泳带 对应于极低密度蛋白移动最慢的B.电泳带近似于LDL.如 实用医技杂志2007年2月第l4卷第4期(旬 刊)JPMT,February.2OO7,vo1.14,No.4(IssuedEveryTenDays)?463? 果在与B之间又出现一个新的电泳带为Lp(a)这个电泳 带并不一定在每个标本中出现,如果出现乳糜微粒则停留在 原地.配备570nln滤过器的光密度仪扫描可以测出每一部 分当中胆固醇的相对比列. 1.3.3.2电泳法测定VLDL—C采用Helena公司(Helena I.aimmtoriesBeaumontTx)提供REP全自动快速电泳仪用的脂 蛋白胆固醇检测试剂盒进行测定.琼脂糖凝胶pH9.60,内 含lO.72g巴比妥钠,0.28gEDTA,0.40gNaN3,5.0g盐酸 胍,850mmol尿素和15mmol的MgCl2,电泳条件如下,即1 血清经琼脂糖凝胶电泳(350V,40Amin)后,空气干燥20 min,将胆固醇基质均匀铺在凝胶面,3o?孵育15min,取 出凝胶片用10%醋酸固定10min,再用水振荡洗涤5min,然 后将凝胶烤干(154?7min)在波长570nln处,用Ez— SCAN光密度扫描仪自动扫描.用PEP提供的软件根据所带 质控进行切割,质控血清(PEPcholesterolprofileControl—Fhr) 由Helena公司提供. 1.3.3.3制版BEPVischolestermGel由Helena公司提供 的现成琼脂糖凝胶片. 1.3.3.4点样由Helena公司提供的ApplicatorBladeAs— sembly点样器自动加样. 1.3.3.5电泳BEP全自动电泳分析仪. 1.3.3.6扫描EDC光密度扫描仪570nln荧光扫描. 1.3.3.7统计分析采用CEESCAN软件,统计数据用平均 值和相关系r表示. 1.3.3.8电泳结果和扫描图及对照图. 2 \ 1.5 壹 避0.5 匿 七j'0 图1脂蛋白电泳图 o0.5l1.52 ? 理论浓度(retool/L) 图2用电泳法测出的VLDL-C值 与理论值之闻的线性回归图 2结果 以TG为基础分成4个组,标本按TG>300g/L(1minor/ L=88.5g/L),150g/L,300g/L,60g/L,150g/L,<60g/L 分为四组,两法均值相关及F公式计算值的偏差,见表l. 在不考虑黄疸,溶血,脂浊等因素影响下1B在TG150g/ L,300g/L区段(在人正常血脂范围内)电泳法与F公式法 均值接近,r为0.953.随rG升高或降低F公式计算结果偏 低较多,尤其在TG<60g/L组两法相差明显.F公式计算偏 低>10%者占TG150g/L,300g/L组标本中的21%,TG< 6og/L组标本75.6%,随着TG降低而明显增加. 裹1各组以琼脂糖电泳法(x)与F公式计算(Y). ~LDL-C结果的比较(i4-$.nmml/L) 组别(g/L)佣{~j甄_菊酾VLDL-C:~相关F公式计算 系数值的偏差(%) 5 4 喜i1 0 012345 30.4 \ 0.3,重}o.2 墓0.1 窖0 VLDL(mmoI/L) 图3(a)TG>姗mg/L组VLDL回归 OO.O5O.1O.15O.2 VLDL(mmol/D 图3(b)TG150mp/L-3OOmF/L组VLDL回归 一一1 ,--40.8 星0.6 0.4 0.2 >O OO.2O.4O.6O.8 VLDL(retool/L) 图3(c)TGl50mg/L一砷mg/L组VLDL回归 1.75 1.5' 1.2? 0.750.5 0.25 >,--d0 00.51 VLDL(mmoi/L) 图3(d)TG60mF/L'一3omF/L组?J)l,回归图 图3示:(a)VLDL:y=O.947x一0.5ms/L,r=0.821;(B) VLDL:),=1.268x4-0.151mg/L,r=0.953;(C)VLDL:y=0. 739x一0.133mg/L,r=O.884;(d)VLDL:y:0.424x一0.0135 实用医撞杂志2007年2月第l4卷第4期(旬刊)JPMT.February.2007.Vo1.14.No.4(IssuedEveryTenDay . ms/L,r=0.734.可见在TG150ms/L一300ms/L和TG150 ms/L一60ms/L这两组相关性最好r=0.897和r=0.895,各 点分布在回归线的附近说明用公式法和电泳法求得的VLDL- c值差异性最小,二者的精密度更加接近P<0.05.经t检验 (t=2.612和t=2.209)两者差异无显着性,而当佗>300 ms/L或.I.G<60mg/L两者的相关性分别为r=0.81和r= 0.734,且P>0.05两者差异有显着性.通过回归曲线可以看 出用电泳法求得的VLDL-C比公式法求得的准确性更加高, 精密度更加好,而且它的低成本更能满足临床的需求. 3讨论 VLDL是一种独立的运载胆固醇的脂蛋白颗粒,于1963 年由Berg发现并命名.研究表明VLDL与冠状动脉病变密 切相关…,因此常用于心脑血管病危险度评估及降脂药疗效 观察等.VLDL具有分子量大(3.8x106na),表型多(约6或 11种),个体间血浓度变异大(0mg/L一2000mg/L)等特 点;目前临床上所用测定VLDL的方法都为免疫学方法,主 要为免疫透射比浊法(ITA)和免疫散射比浊法(INA)它们都 是利用VLDL-C的抗原性来测定VLDL,由于VLDL具有多态 性,而使测定值缺乏可比性.有人认为检测VLDL-C可克服 免疫法测定的不足之处J,近来我们采用改良电泳法测定 VLDL-C并探讨了与临床常用VLDL-C免疫测定法的相关性, 对该法进行了初步评价.以前测定V~L-C主要是Friedwald 公式计算法(F公式法)和直接测定法.直接测定在临床上用 得比较广泛,它是分两步用表面活性剂对血清中不同脂蛋白 进行反应,第一步是让HDL,LDL,CM中的胆固醇水解并氧化 生成H:0:,H:0:在过氧化物酶的作用下使4-AAP转变成有 色产物,通过比色即可测知胆固醇的含量;第二步,活化 VLDL中的胆固醇,使之水解,氧化,重复上述反应测得胆固 醇的量.随着全自动生化分析仪的问世,临床上用得最多的 是Friedwald公式法来计算V~L-C.以我院为例,我院使用 MECKMAN公司LX一20全自动生化分析仪.先测出CHOL, HDL,LDL,LP(a)的值,在根据F公式计算出VLDL-C的值. 虽然用全自动生化分析仪测定VLDL-C快速,方便,不需要人 工计算,但所计算出的结果的准确性和可靠性都不是很好,往 往得出负数结果.我院目前测定血清血脂蛋白采用琼脂糖电 泳法,采用的是HELENA公司提供的全自动血脂蛋白电泳 仪.操作方便,快速(大批标本并不比全自动生化分析仪 慢),且结果准确,可靠,试剂价廉,成本低,得到临床医生的 一 致认可.从上述统计结果可以看出F公式法在TG中高水 平时仍适用,但高TG时结果不可靠,影响F公式计算的准确 性.例如病理情况下脂蛋白中脂质组成的改变,血清中乳糜 微粒与低密度脂蛋白残余微粒的积聚.此外F公式计算 VLDL-C值时要求TC,1.G,HDL-C,LP(a)四项测定结果全部 准确,但日常工作中可能出现某些测定值有较大的误差以至 F公式计算结果有影响,这些都使F公式应用受到限制.随 着检测要求的提高,检测方法的不断改进及商品试剂盒的推 广应用为电泳法测定VLDL-C创造了条件.因此我们建议有 条件的实验室采用电泳法测定VLDL-C. 参考文献: [1]王克勤,全国第一届医学生化学术会议论文摘要汇编,1988. [2]陈文祥,李健斋.美国疾病控制与预防中心血脂标准化工作简 介[J].中华医学检验杂志,1998,21:13-15. [3]KannelwB,CastelliWP,GordonT.Serumcholesterol,lilmpro- teimandtherisk0fcoronaryheartdisease:theFraminghamStudy 【J].AnnInternMed,1971,74:1-12. [4]Delalla,0.F.andGofraan,J.W.,UltrocentrifugalAnalysisofSerum Lipopmtein,inMethodsofBiochemicalAnalysis,Vo1.1,Editedby D[J].Glick,NemYork,Interscience,1954:459478, [5]Burstein,M.andSandScholrdck,H.R..Precipitatienofchylomi- cronsandverylowdensitylipoproteinsfromhumanserumwithsedi- ulnlaurylsulfate[J].LifeSci,1972:177.184. [6]Cobb,S.A.andSanders,J.L.EnzymicDetermination0fCholester- olinSemmLipoproteinsSepaaratedbyEleetmphoresis[J].Cain Chem,1978,24(7):1116-1120. [7]InternationalTaskForceforPrevention0fCoronaryHeartDisease. Prevention0foDionsryheartdisease:scientificback-groundandnew clinicalguidelines.R~mmendatiom0ftheEuropeanAthemeclero- sisSociety[J].NuMetabCardiovascDis,1992,2:113-56. [8]FriedewaldWT.Estimatim0fcOncentration0flowdensitylipoprotein cholesterolwithoutnile0fprepaprativeultracentrifu~Jon[J].Clin ' Chem,1972,18:499-502. (收稿日期"241106-11-06) MedradVistrouCT注射系统用于CT增强扫描 的护理操作体会? 郗正群 (南京市中西医结合医院,江苏南京21~14) -[关键词】MedradViBtmucr注射系统;增强扫描;护理 [中图分类号】R44$.2[文献标识码】B[文章编号】1671-5098(2007)0,14M64-02 CT增强扫描是经静脉给予水溶性碘造影剂使病变组织 x线吸收率增高,加大了正常组织间灰阶的差别,从而提高了 病变的显示率.我院自从引进了MedradVistrouCa"注射系 统,大大地提高了病变的显示及诊断,收到了很好的效果. 1资料与方法 1.1临床资料使用CT增强扫描120例,其中男7O例,女 5O例,年龄5岁一76岁,其中颈部38例,胸部24例,腹部58 例.轻度反应99%,中度反应1%. 1.2设备仪器西门子双螺旋cr机.Medr~lVistrouCT注 射系统,非离子碘造影剂如碘必乐,安射力等. 1.3方法MedradVistrouCT注射系统是由注射头,主机和 带显示触摸屏的操作台组成,将非离子碘造影剂如碘必乐,安