抗阿片肽血清对脊髓内催产素镇痛作用的影响

抗阿片肽血清对脊髓内催产素镇痛作用的影响 抗阿片肽血清对脊髓内催产素镇痛作用的 影响 中国行为医学科学2006年8月第15卷第8期ChinJofBehavioralMedSci,August2006,Vol15,No.8?683? ? 基础研究? 抗阿片肽血清对脊髓内催产素镇痛作用的影响 孔庆胜刘文彦孔令斌张向阳宋朝佑 【摘要】目的探讨脊髓内催产素(OT)与内源性脑啡肽和强啡肽A在痛觉调制中的关系.方法 以钾离子透入法引起大鼠甩尾反应的电流强度(mA)为痛行为反应的指标,观察向脊髓蛛网膜下腔内注入 抗甲一脑啡肽血清,抗强啡肽A血清和OT对动物痛阈的影响.结果脊髓内注入抗甲一脑啡肽血清,抗 强啡肽A血清后,大鼠痛阈与注药前相比分别变化(一23.32?2.81)%,(一12.11?2.13)%和 (一26.33?5.42)%,(一13.21?2.32)%,与对照组相比痛阈明显降低;但在注射OT前预先注射抗甲一脑 啡肽血清或抗强啡肽A血清,大鼠痛阈较注药前增加(8.96?3.02)%,(70.22?6.16)%和(5.56? 2.63)%,(61.21?5.21)%,抗甲一脑啡肽血清或抗强啡肽A血清均不能完全阻断OT的镇痛效应.结 论脊髓内OT在痛觉调制中的作用不完全依赖于脊髓内的内源性脑啡肽和强啡肽A. 【关键词】催产素;抗甲一脑啡肽血清;抗强啡肽A,血清;痛阈 Effectofanti-opioidpeptideseraonanalgesiaofoxytocininspinalcordofratsKONGQing?s heng,LIU Wen—yah,KONGLing—bin,eta1.DepartmentofBiochemistry,JiningMedicalCollege,Jining272013,China 【Abstract】0bjectiveTostudytheeffectofoxytocin(OT)onpainmodulationinspinalcordanditsrela— tiontoendogenousmet—enkephalinanddynorphinAl,1. MethodsThepotassiumiontophoresisinducedtail—flick wasusedtomeasurethepainthreshold.ResultsOTadministrationinducedanenhancemento fpainthreshold. Furthermore,pre—injectionofAMEKSorADYNSinspinalcordnotcouldweakenanalgesiaeffectofOT.Concl u- sionThesedatasuggesttheenhancementofanalgesiabyOTisnotdependentuponthemet—enkephalinand dynorphinA1— 13 inspinalcord. 【Keywords】Oxytocin;Anti—met—enkephalinserum;Anti—dynorphinAl,13sernm;Painthreshold 以往的研究明,中枢神经系统内的催产素(oxy. tocin,OT)和阿片肽在痛觉调制过程中发挥着重要的 作用,脊髓是痛觉调制关键的中枢部位之一,其内的 OT和阿片肽均参与痛觉调制引.但在痛觉调制过程 中,脊髓内OT与脑啡肽和强啡肽A,之间的关系怎 样,较少.本研究通过向脊髓内注入OT,抗甲.脑 啡肽血清(anti.met.enkephalinserum,AMEKS),抗强 啡肽A3血清(anti?dynorphinA3serum,ADYNS), 观察脊髓内脑啡肽和强啡肽A对催产素镇痛作用 的影响. 材料与方法 一 ,实验动物与模型制备 实验用雄性健康wistar大鼠,体质量210,260g, 由山东大学医学动物供应中心提供,给予充足的饮水 和饲料.用戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉后, 借助江湾型脑立体定向仪固定动物,切开大鼠颈部皮 肤,分离软组织后切开寰枕后膜,经小脑延髓池向脊髓 蛛网膜下腔插入全长12am的PE一10聚乙烯管(外径 0.6mm,内径0.28mm),插入长度7.2am达脊髓腰膨 大上缘,插管外露部分固定于皮肤上,缝合皮肤切口, 术后3,5d开始实验. 二,动物分组与痛阈测定 基金项目:山东省自然科学基金资助课题(Q98C01124) 作者单位:272013济宁,济宁医学院(孔庆胜,刘文彦,孔令斌,张 向阳);第二军医大学(宋朝佑) 实验分2个大组.第一组为抗甲.脑啡肽血清对 催产素镇痛作用的影响:(1)抗甲.脑啡肽血清.人工脑 脊液组(AMEKS.ACSF组);(2)抗甲.脑啡肽血清.催 产素组(AMEKS.OT组);(3)正常兔血清.人工脑脊液 组(NRS.ACSF组).第二组为抗强啡肽A血清对 催产素镇痛作用的影响:(1)抗强啡肽A.血清.人工 脑脊液组(ADYNS.ACSF组);(2)抗强啡肽A.血 清.催产素组(ADYNS.OT组);(3)正常兔血清.人工脑 脊液组(NRS?ACSF组). 将大鼠放置于特制的大鼠固定器中,30min后开 始实验.用WQ-9E型钾离子透人痛阈测量仪测痛,以 引起甩尾的最小电流强度(mA)为痛反应值,间隔 1min的3次痛反应值的平均值为1次痛阈,每10min 测定痛阈1次,取给药前的2次痛阈的平均值作为基 础痛阈,给药后各次的痛阈与其相比,计算痛阈变化的 百分数. 三,实验药品 催产素为美国PeninsulaLab出品,用人工脑脊液 (ACSF)配成所需浓度.AMEKS,和ADYNS为第二 军医大学神经生物学教研室制备,滴度分别为1:5000 和1:30000,与催产素,精氨酸加压素及神经降压素等 多肽在浓度为2,4096pg/管时均无交叉反应.脊髓 蛛网膜下腔注射时,均先注入10l药液,再注射 10lxlACSF冲洗导管腔(导管的容积为6),每次注 射的总容积为20l,3min内注射完毕. 四,解剖定位和实验数据处理 中国行为医学科学2006年8月第l5卷第8期 ChinJofBehavioralbledSci.AuRust2006,Vol15.No.8 实验结束后,向大鼠脊髓蛛网膜下腔内注射等量 的氨基黑B..,解剖定位.凡位点偏离者,其结果均弃 之不用.各组数据以均值?标准差表示,2组间差异 用t检验进行统计学处理. 结果 一 ,脊髓蛛网膜下腔内注射AMEKS对OT镇痛作 用的影响 大鼠测定基础痛阈后,向脊髓蛛网膜下腔内注入 6AMEKS和ACSF(AMEKS—ACSF组),在注药后 60min内,大鼠痛阈与注药前相比变化(一23.32 ?2.81)%一(一12.11?2.13)%,与注入6IXlNRS后 立即再注入ACSF(NRS—ACSF组)相比,痛阈明显降 低(P<0.01).大鼠测定基础痛阈后,向脊髓蛛网膜 下腔内注入6IXlAMEKS和100ng/4ixlOT (AMEKS—OT组),在注药后60min内,大鼠痛阈较注药 前增力?(8.96?3.02)%一(70.22?6.16)%,与 AMEKS.ACSF~F[相比,痛阈有显着增加(P<0.01),见表1. 二,脊髓蛛网膜下腔内注射ADYNS对OT镇痛作 用的影响 大鼠测定基础痛阈后,向脊髓蛛网膜下腔内注入 6IXlADYNS和ACSF(ADYNS.ACSF组),在注药后 60min内,大鼠痛阈与注药前相比变化(一26.33 ?5.42)%一(一l3.21?2.32)%,与注入6IXlNRS后 立即再注入ACSF(NRS—ACSF组)相比,痛阈明显降 低(P<0.01).大鼠测定基础痛阈后,向脊髓蛛网膜 下腔内注入6IXlADYNS和100ng/4ixlOT(ADYNS—OT 组),在注药后60rain内,大鼠痛阈较注药前增加 (5.56?2.63)%一(61.21?5.21)%,与ADYNS—ACSF 组相比,痛阈有显着增加(P<0.01),见表2. 讨论 催产素(oxytocin,OT)是在下丘脑视上核和室旁 核的大细胞神经元中合成的一种9肽激素,除了使妊 娠末期子宫收缩和促进授乳期排乳的经典作用外,还 具有多种生物学作用,如参与动物的行为记忆,应激反 应等,尤其是在电针(针刺)镇痛和防治手术后疼痛中 的作用,日益引人关注.国内外的研究表明,OT神经 末梢及OT受体广泛分布于中枢神经系统内许多与痛 和镇痛有关的区域,不同的动物(家兔,猫,小鼠,大鼠 等)侧脑室注射OT有明确的镇痛作用j.作者以往 的工作也表明,侧脑室,中脑导水管周围灰质注射OT 能提高动物痛阈和电针镇痛效应,注射抗OT血清则 降低电针镇痛效应_24..提示,脑内OT在镇痛和电针 镇痛的复杂过程中发挥着重要作用.有资料显示,刺 激视上核或室旁核后,动物痛阈和电针镇痛效应明显 增加;而损毁后,动物痛阈和电针镇痛效应则明显降 低;且脑内参与痛觉调制的内源性OT主要是来源于 视上核.众所周知,下丘脑视上核与脑内参与痛觉调 制的有关核团,如蓝斑,中缝大核,中脑导水管周围灰 质,脊髓背角等均有着极为密切的联系,当刺激视上核 或同时给予电针时,这些核团内OT的含量发生显着 变化J.提示,视上核释放的OT可能是通过这些核 团的某些成分而发挥痛觉调制作用的. 脊髓是内源性痛觉调制系统的重要结构,其内含 有多种与痛觉调制有关的生物活性物质,与其他参与 痛觉调制的中枢结构也有着极为密切的联系.脊髓内 存在OT,OT神经末梢和OT受体,痛刺激时脊髓内OT 的含量明显增加剖.作者以往的工作也显示,大鼠脊 髓蛛网膜下腔内注射OT后,大鼠的痛阈和电针镇痛 效应显着增加,并有明确的剂量.效应关系;而注射抗 催产素血清后,大鼠电针镇痛的效应显着降低?J.提 示,脊髓内的OT在痛觉调制中发挥着重要的作用. 有资料显示,脊髓内的内源性阿片肽在痛觉调制中也 发挥着重要的作用,向脊髓蛛网膜下腔微量注射吗啡 能提高动物的痛阈,并增强电针镇痛的效应;而注射纳 络酮(Nx)则降低动物的痛阈和电针镇痛效应;脊髓内 含有多种阿片肽和多种阿片肽受体,目前认为,K参 与脊髓以上水平的痛觉调制,而K和8型受体共同 表1脊髓内注射AMEKS后痛阈变化的比较(%,?s) 注:与NRS—ACSF组比较一P<O.Ol;与AMEKS—ACSF组比较一P<0.Ol 表2脊髓内注射ADYNS后痛阈变化的比较(%,?s) 注:与NRS—ACSF组比较,P<O.Ol;与ADYNS—ACSF组比较一P<O.Ol (下转706页) ? 706?中国行为医学科学2006年8月第l5卷第8期 ChinJofBehavioralMedSci,August2006.Vdl5.,o.8 究结果显示,帕罗西汀加银杏叶提取物治疗抑郁症患 者,值得推广.银杏叶提取物具有多种药理学活性. 对中枢神经系统的作用不但有抗脑缺血,缺氧,抗脑水 肿,提高脑血液流变学和增加能量代谢作用,而且还有 俘获自由基,改变中枢神经递质和受体的功能:其次, 可使脑中的乙酰胆碱周转率上升,对老年记忆及抑郁 情绪均能起到很好的改善作用,银杏叶提取物还可以 通过增加大脑微循环,从而使5.HT自身合成增加. 抑郁症病人,体液中存在氧自由基浓度的升高,通过消 除患者体内异常增多的自由基起到对抑郁症的治疗作 用.在精神科临床上,银杏叶制剂主要用于治疗慢性 脑功能不全,轻中度的Alzheim'S病,近年来也有用于 治疗慢性精神分裂症及抑郁症等.以往研究发现,情 感障碍病人存在体液中自由基浓度升高,提示抗抑郁 剂治疗同时加银杏叶制剂可能提高疗效,与帕罗西汀 合用,可提高疗效,且见效快,副作用轻微,对于伴有严 重消极观念及年老体弱伴有躯体疾病的患者,尤为适 宜.而对于经典抗抑郁药物的难治性抑郁症病人,也 可加银杏叶提取物治疗. 抑郁症的治疗是一个综合治疗工程,,但从药物 治疗的角度,恰当的应用抗抑郁制剂,同时联合应用银 杏制剂,是一种比较好的治疗选择,可以大大提高抑郁 症的治理效果: 参考文献 1姜佐宁.现代精神病学.北京:科学出版社,1999.869~76. 2陈有福,李永强,韩磊,等.中药银杏叶提取物在精神科的应用.中国 民康医学.2004.16:94?96. 3张培琰,吉中孚.精神病诊断治疗学.北京:中国医药科技出版社, 1998.221.224. 4罗和春,刘平,孟凡强,等.舒血宁合并阿米替林治疗抑郁症多中心 双盲对照研究.中国心理卫生杂志,1996.13:167.169. 5杨坤,张中兴,王常虹,等.抑郁症患者帕罗西汀治疗前后血清细胞 因子C.反应蛋白和辛水平变化的研究.中国行为医学科学,2005, 14:792-794 6兰利明,吴绍长,吴素琴,等.抑郁症患者家庭功能和心理防御特征 研究.中国行为医学科学,2005,14:998.1000. 7郭春荣,房彩霞,景云亭.帕罗西汀并用氯氮平治疗抑郁症疗效观 察.临床精神医学杂志,2005,15:107. (收稿日期:2006—01—19) (本文编辑:戚厚兴) (上接684页) 参与脊髓水平的痛觉调制在痛觉调制过程中, 脊髓内OT与内源性阿片肽之间的关系怎样,极为引 人关注.笔者以往的工作表明,向脊髓内注射大剂量 纳络酮后,不能阻断OT在痛觉调制中的作用.提示, 脊髓内OT的镇痛效应可能与脊髓内的内源性阿片肽 关系不甚密切.值得注意的是,各种阿片肽虽然都具 有程度不同的镇痛作用,但其与阿片受体亚型的亲和 力则有着明确的选择性,在不同部位的作用机制也有 一 定差异.另外,大剂量的Nx有一定药理作用,如影 响细胞膜ca流动,cAMP代谢和潜在的抗GABA活 力等,,故用专一性更强的拮抗剂进一步脊髓 内OT与不同阿片肽之间的关系是十分必要的本研 究结果表明,向脊髓内注射大剂量AMEKS或ADYNS 以中和内源性的脑啡肽或强啡肽A后,使大鼠痛阈 明显降低,此与以往的文献报道相吻合'.而用 AMEKS或ADYNS预处理的动物给予OT后,大鼠的 痛阈仍有明显升高.提示,脊髓内OT的镇痛作用是 不完全依赖于脊髓内的内源性脑啡肽或强啡肽A 的,脊髓内OT的镇痛效应与脊髓内的内源性阿片肽 系统关系不甚密切.至于脊髓内的OT和其他与痛觉 调制有关的生物活性物质,如神经降压素,5.羟色 胺,P物质,加压素和生长抑素等之间的关系怎样,正 在探讨. 参考文献 1刘文彦,宋朝佑,杨俊,等.脊髓内催产素参与电针镇痛.针刺研 究,1990.15:24—29. 2宋朝佑,刘文彦,杨俊,等.中枢催产素在电针镇痛中的作用.生理 ,1990,42:169?174. 3刘文彦,白波,宋朝佑.中脑导水管周围灰质内催产素对痛阈和电针 镇痛效应的影响.中国疼痛医学杂志,1998,4:48?52. 4刘文彦,白波,刘玉红,等.抗阿片肽血清对大鼠中脑导水管周围灰 质内催产素镇痛作用的影响.中国疼痛医学杂志,2004,10:299. 291. 5韩济生.神经科学纲要.北京:北京医科大学,中国协和医科大学联 合出版社,1993535?55. 6翁恩琪.痛与镇痛.上海:上海科学技术出版社,1987.203-2334. 7ManningM.SawyerWH.Design.Synthesisandsomeusedofreceptor- specificagonistsandantagonistsofvasopressinandoxytocin.JRecept Res.1993.13:195-215. 8宋朝佑,杨俊.王成海,等.电针大鼠"足三里"时体内催产素含量的 变化.第二军医大学.1992.13:129-132. 9周跃,刘正津,梅芳瑞,等.NMDA受体和非NMDA受体在脊神经节 损伤介导痛觉过敏中的作用.中国行为医学科学,2005,14:603- 605. 10JabailyJ.DavisJN.Naloxoneadministrationtopatientswithacute stroke.Stroke,1984,15:36-39. 11DubucI.RemandeS.CostentinJ.Thepartialagonistprope~iesofle- vocabastineinneurotensin-inducedanalgesia.EurJPharmacol,1999, 381:9-12. (收稿日期:2006—03—10) (本文编辑:冯学泉)