血库丙肝抗体测定SOP12

宁波市北仑区 柴桥医院血库 操作程序 文件名 丙肝抗体测定 文件编号 CQXK-012 版本号 2006版 1. 适用仪器：ELX-800型酶标仪 2. 方法原理：采用丙型肝炎病毒重组嵌合抗原作为包被抗原，加入的样品中若含有特异性的丙肝抗体则与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附在固相上，再加入酶标记的第二抗体，最终形成抗原-抗体-第二抗体复合物。使底物显色，若样品中无特异性丙肝抗体则底物不显色。 3. 试剂来源及组成：试剂由上海科华公司产生，有三证；质控品由卫生部临检中心生产。 4. 操作步骤：标本先作10稀释，前三孔分别设空白，阴性，阳性对照，空白孔不加，阴阳性对照孔各加入不用稀释的阴性及阳性对照液100ul，从第四孔起各加入待测稀释样本或质控品100ul→放入有盖合子中放于37度水浴箱中孵育30分钟→用洗板机洗板5次（或用手工洗板5次）→洗完后在卫生纸上拍干→除空白外每孔加入酶标二抗100ul混匀→放入合子中再在37度水浴箱中孵育30分钟→取出后用手工或洗板机洗涤5次→在卫生纸上拍干→每孔加入显色剂A液50ul后再加B液50ul混匀→放于37度水浴箱中孵育10分钟→每孔加终止液50ul后混匀→用酶标仪测定（取波长450nm读取各孔的吸光度值）。 5. 结果判断：（1）空白调零后阴性对照OD值小于0.1阳性对照OD值大于0.6以上方可认为试剂合格；（2）阀值计算： COV=0.1×阳性对照平均OD值＋阴性对照OD值。（3）判定：测定标本OD值大于或等于阀值为阳性，反之为阴性。 6. 注意事项： 1．判断结果须与肉眼判断结合起来，否则易引起假阴性或假阳性。对特殊模式标本应作双份标本再复检。 2．从冰箱取出试剂合后应恢复室温后再操作。 3．结果判断须在加终止液10分钟内完成。 4．不同批号试剂不能混用。 7. 参考范围：正常人阴性 8. 临床意义：血清中抗HCV-IgM及抗HCV-IgG抗体均为非保护性抗体，急性期多为IgM型，慢性期多为IgG型，抗HCV-IgM测定是判定急慢性丙肝的重要指标，恢复期患者抗HCV多为IgG型，且滴度也低。 9. 引用文件：《上海科华公司丙肝抗体测定使用说明》、《ELX-800型全自动酶标仪定性操作程序》、《MULTIWASH全自动洗板机操作程序》。 编写人 审核人 批准人 生效日期 李永新 史苗年 史苗年 2006年6月1日