TSH作业指导书

K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300·300 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称:第三代促甲状腺素检测作业指导书 表号: KM-MP03•02•02 已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 （I have understood the relevant content of the document. I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure） 阅读人签名表 姓名（NAME） 职务（POSITION） 签名（SIGNATURE） 签名日期（DATE） 文件修改记录页 （Procedure amendment form） 表号: KM-MP03•02•03 序号 NO. 页码(Page) 内容更改说明（Description of Modified contents） 审批人 （Approved by ） 批准生效日期 （Approved date） 1 换版 文件信息表 (Procedure information form) 表号: KM-MP03•02•04 文件名 Title of Doc.(Doc. Code) 第三代促甲状腺素检测作业指导书(KM-SOP0300.300) 版本号 (Edition No.) Edition 3.0 生效日期(Operative date) 2008-03-13 文控部门 (Doc. Control Dept.) 实验室文控室 回顾人签名/日期(Reviewed by : Signature/Review date) 回顾日期(Review date) 回顾人员签名( Signature ) 替代文件(Replaces) 第三代促甲状腺素检测作业指导书(Edition2.0) 存放地点(Location)/持有人（Holder） No. Location （Holder） No. Location （Holder） 1 实验室文控室（陈彬） 2 化学发光室（段学成） 作者签名/日期(Author signature/date) 袁意彬 审批人签名/日期(Authorized by : Signature/Date) 陈建波 接收人签名/日期 （Receiptor/Date） 副本数(copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝。 第三代促甲状腺素检测作业指导书 （Analysis of Thyroid Stim Hormone（TSH） by IMMULITE 2000) 1. 原理（Test principle）： 固相、夹心法化学发光免疫量度检测。 采用化学发光法：包括免疫反应和化学反应,利用在化学反应中释放大量自由能成为 激发态中间体,当其回到稳定的基态时,同时也发射出光子，利用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量 2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）: 标本收集（Specimen collection）:类型（Type）:血清(Serum);用量(Volume)0.4ml，仪器加样量(Sampling volume)75μL 拒收标本（Specimen rejection）：EDTA抗凝血样本应拒收。推荐使用超速离心清除脂血（lipoprotein）样本。溶血（hemolysis）样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。血清（serum）样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。 其他(Others)：其他(others)：推荐使用超速离心法清除脂血样本.溶血（hemolyzed sample）提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。 标本储存条件(Specimen storage conditions)：2-8℃5天； -20℃1个月；十天后处理标本 3. 试剂(Reagent)： 3.1美国DPC IMMULITE 2000 原装试剂。 3.1.1试剂内组份(Components)： TSH包被珠（L2TS12） 包被珠包装带有条码。一个包装200个。包被有单克隆鼠抗TSH抗体。2～8℃可稳定保存至失效期。(Stable at 2～8℃ until expiration date) L2KTS2：1个 L2KTS3M：15个 L2KTS6：3个 L2KTS6M：30个 TSH试剂楔（L2TSA2） 试剂楔带有条码。23mL碱性磷酸酶（小牛肠）标记的抗配基缓冲液。2～8℃可稳定保存至失效期。 L2KTS2：1个 L2KTS3M：15个 L2KTS6：3个 L2KTS6M：30个 使用前将试剂楔顶部穿孔部位的胶条撕开，注意不要损坏条码。揭掉试剂楔顶部的铝箔封条，将试剂楔滑盖的顶部搭扣在下方的斜坡上。 TSH校正（LTSL，LTSH） 两瓶（低、高）冻干的含TSH的经处理人血清。复溶每瓶加4.0mL蒸馏水或去离子水。复溶后2～8℃可稳定保存30天，-20℃可以保存（分装）6个月。 L2KTS2：1套 L2KTS3M：3套 L2KTS6：2套 L2KTS6M：4套 校正前将相应的分装标签（随试剂盒提供）贴于实验管上，以便仪上的读码器能够读取条码。 3.1.2未随试剂盒提供的组分 L2SUBM：化学发光底物 L2PWSM：探针清洗液 L2KPM：探针清洗试剂盒 L2RXT：反应管（一次性） CON6：三水平、多成分的质控 其它必需：蒸馏水或去离子水、实验试管、 3.2试剂准备(Reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigerator to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results. 4. 仪器（Instrument）：美国 DPC IMMULITE 2000. 仪器准备（Prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。然后运行仪器操作软件。而后排水及底物，防止内有残留气柱。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5. 安全防范（Safety Precautions）： 操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。 6. 校准（Calibration）： 6.1校准品储存和使用(Calibration material storage and usage)：美国IMMULITE 2000 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material. use it within expiration date, storage in 2-8℃ 配制（Calibration material redissolve）：用复溶专用加样枪准确吸取4mL去离子水于瓶中，溶解静置30分钟，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。Label confecting date, calibration lot, person who confected, expiration date. Then storage it at －20℃. 复溶后校准品成分的稳定性：保存于15~25℃，可稳定8小时 保存于2~8℃，可稳定30天 保存于-20℃，可稳定6个月（不可反复冻融）。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：(If one of the two happens, recalibration ) （3）试剂批号改变 (Reagent lot changes) （3）根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) （3）校准周期（Frequency of calibration）：4周(Four weeks)。 6.3步骤：将两个样本管中分别加入至少500ul的A，B校准品 ，并一一对应分别贴上校准条码，放入样本架上。将样品架推入样品槽中，点击RUN。然后在计算机屏幕上选择kits项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择worklist项，输入校正信息，输入是需在ADJUSTOR中的Kit lot一栏中输入校正信息，并申请TSH检测项目，开始校准。 校准结果判断: 仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。 7. 操作过程：(Procedural Steps) 7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。 7.2取出空样本架，将含有血清的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul。（样本用量100ul）交待清楚实验号与样本架号的对应关系，便于联机。 7.3点击RUN。在[WORKLIST]中输入实验号，在[Assign Tube Position]中指定样品位置，在TesTs中指定TSH项目。结果出来后，在菜单[tool]中的export按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 7.4数据联机入系统( Send data to LIS ) 数据审核(Data checkup)：联机是否正确？审查结果是否正确?实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。 8质量控制(Quality control)： 使用CON6质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，,并作好记录并分析质控结果，质控在控才能发报告。 TSH最大允许误差ALE为20%，室内质控CV为L:10.6%，H:8.15%,偏移为1.22%,过程稳定性<2%.根据公式:△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 13s/22s/R4s/41s N=2; 高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41s N=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理 9. 稀释（Dilution）： 9．1 分析测试范围（AMR）：0.04～60.25 µIU/ml（WHO 2nd IRP 80/558） 9．2病人结果报告范围（CRR）：：0.04-602.5µIU/ml 当结果超过AMR时，需要稀释，如果需要手工稀释，按以下标准 稀释材料（Dilution material）:TSH diluent 最大稀释倍数（Dilution times）:1:9(20ul sample: 180ul diluent) 混匀后放入样本架，之后同样本操作。但是要在Manual Dilution中指定手工稀释的稀释倍数。同样本一样处理，但要将稀释液加入样本管并贴上条码，这同样本操作相同。仪器自动稀释的样本在Dilution中指定稀释倍数。TSH最大稀释倍数10倍. 10. 计算(Calculations)：N/A 11. 参考范围（Expect Values）：0.4～4 µIU/ml 12. 结果解释（Interpretation of Results）： [1]对于确诊的甲状腺功能亢进，TSH浓度＜0.01µIU/ml。TSH值在0.01μIU/ml到0.4μIU/ml之间时，应作进一步评估，因其可能提示临界性甲亢，也可能是由严重的非甲状腺疾病(NTI)或敏感药物治疗所致. [2]IMMULITE 2000第三代TSH试验不能与血斑点试验同用于新生儿筛查。 [3]人血清中的嗜异性抗体可与试剂盒组份中的免疫球蛋白反应，对体外免疫检测产生影响。【见Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies：a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988：34：27-33】从经常接触动物或动物血清制品的病人采样检测，表明这种干扰潜在导致异常结果。这些试剂经过，干扰的风险已经最小化；但是，稀有血清和检测组份之间还是有可能产生交叉反应。此项测定结果应始终结合临床检查、病史和其它相关资料才能做出正确诊断. 13的局限性（Method Limitations）: 13.1精密度（Precision）: 13.1.1批间精密度： Mean SD CV(%) L： 0.271 0.026 9.59% H： 16.81 1.55 9.22% 13.1.2批内精密度： Mean SD CV(%) 8.723 0.386 4.43% 13.2灵敏度（Sensitivity）：0.04 µIU/ml 13.3特异性（Specificity）：使用高度特异性TSH抗体 13.4干扰物质（Interfering Substances）： [1]胆红素影响（Bilirubin）：样本中胆红素的浓度直至200 mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。 [2]溶血影响（Hemolysis）：样本中压积红细胞的浓度直至30 µL/ml，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 [3]脂血影响（Lipemia）：样本中甘油三酯的浓度直至5000 mg/dl，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 13.7注意事项（Notices）：仅供体外诊断使用(Use only for invitro diagnosis) · 试剂：2～8℃保存。其处理应遵守相应的法律。 · 对于所有组份都要将其视为传染原，按照全球传染病预防法来处理和防范。源自人血的原材料全部经过检验，与梅毒、HIV 1&2抗体、HBsAg和HCV抗体没有反应。 · 加入浓度小于0.1g/dL的叠氮钠作为防腐剂。其处理措施应采用在铅或铜质容器中以大量水冲洗，避免易爆的金属叠氮化合物聚集而产生潜在爆炸危险。 · 化学发光底物：避免污染和日光直射。（参见说明） · 水：使用蒸馏水或去离子水 14. 临床意义（Clinical Significance）： 降低： 1）甲亢时TSH降低，HTSH测定为甲亢诊断的重要和灵敏的指标。 2）肢端肥大症、库兴氏综合症以及应用多巴胺、糖皮质激素的患者。 增高： 1）甲减患者血清TSH明显升高，为血中T3、T4下降后对TSH的负反馈抑制减弱的结果，故在亚临床甲减患者，当T3、T4尚未发生变化时，血清TSH即可明显升高为诊断甲减，尤其是早期甲减和亚临床甲减最灵敏的指标。在应用甲状腺激素替代治疗的原发性甲减患者，血清TSH还是疗效判定的重要随访指标。 2）慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者可出现血清TSH升高，是因为甲状腺滤泡破坏，甲状腺激素分泌减少，对TSH的负反馈调节作用减弱的结果。其血中甲状腺激素可正常，而TSH较前升高。 3）血清TSH升高可见于地方性甲状腺肿、垂体分泌促甲状腺激素腺瘤、甲状腺激素应用过量等情况。 15. 参考文献（References）： 1 Boscato LM，Stuart MC. Heterophilic antibodies：a problem for all immunoassays. Clin Chen 1988：34：27-33 2 IMMULITE 2000 Thyroid Stim Hormone kit instruction 3 <<中华医学检验全书>> 4 IMMULITE 2000 operation instruction STANDARD OPERATION PROCEDURE page 4/10 第三代促甲状腺素检测作业指导书（2008-03-13）