单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

2 一 E用寄生虫病杂志 1995年第 3卷第 1 A 单克隆抗体双抗体夹心EL ISA检测 日本血吸虫病人循环抗原 ． 壅 堑 李雍龙 韩家俊 同济医科大学基础医学院寄生虫学教研室 武汉 430022 ．王 垄、／ 武汉市生物制品研兜所 ／ ／ - 25· ．R 2-21b 提要 本文用抗日本血嗳虫肠相关抗原的单克隆抗体s]116和SjlO~作双夹 ~-ELISA检测粪 检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达93．d 。正常人假阳性率为6．7 。与肺吸虫、 华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分别为3．2 、O、13．3 和 13．3 。 』1 关铺 目．堂墼雠 匙 在血吸虫病诊断中，粪检已越来越难以 适应当前的形势。常见血清学方法如COI：~、 1HA、ELISA等检出的抗体，也只能作为感 染存在的间接依据，不能区别现症感染和既 往感染，因此血吸虫病的确诊和疗效考核存 在许多困难 由于寄生在人体的血吸虫成虫 能不断释放其分泌物、排泄物及更新的膜 成分进^血流，成为循环抗原，故一般认为血 吸虫循环抗原的检测具有反映活动性感染、 估计虫负荷和考核药物疗效的优点。多年来， 一 些学者试用了各种方法来检澳I血清中的循 环抗原 ，获得一定的效果。本文采用抗日 本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体sj116作 包被抗体，SjlO~作酶标记抗体，检测循环抗 原，获得如下结果。 1 材料与方法 1．1 单克隆抗体的制备 用SEA按常规法 免疫BALB／e小鼠，然后取其脾细胞与小鼠 骨髓瘤细胞 Sp2／O进行融合嘲 经间接 ELISA、IFA、琼脂双扩散法筛选，最终获两 株与SEA和成虫可溶性抗原(SAA)均呈强 阳性反应的杂交瘤细胞Sill6及SjlOe，其靶 抗原定位于血吸虫肠道的衬细胞，与姜片虫、 华支睾吸虫、肺吸虫均无交叉反应，所分泌的 单克隆抗体属 IgM。 1．2 抗体配对 在双抗体交互配对中，采用 方阵滴定 单克隆抗体S]116作为包被抗体， 单克隆抗体Sjl0e作为辣根过氧化物酶标记 抗体，效果最佳 1．3 待检血清 血吸虫病人血清取自湖北 省疫区粪检阳性者，正常人血清取自非疫区 献血员，肺吸虫、华支睾吸虫 旋毛虫和囊虫 病人的血清均由本室提供 待检血清按 l；1 稀释。 1．4 双抗体夹心ELISA试验方法 单克隆 抗体Sill 6按每 L 0．1ml包被 96孔聚苯乙 烯酶标板， ℃过夜，次日洗板后，每孔先加入 单克隆抗体酶结合物Sjl0e—HRP 5om，再加 入待检血清50 1，37℃孵育1小时后洗板，再 加底物联苯二胺 0．1ml避光显色 2～10分 钟，加 2mol／L H2SO．0．OSml终止反应。于 492nm测定OD值，阳性判断标准为样品孔 OD值 ； 睦对照 LOD值≥2．1为阳性。 2 结果 见附表。 3 讨论 近年来，对血吸虫病进行免疫诊断 的方法做了多种探索，许多研究表明检测外 周血的循环抗原水平有助于明确诊断并具有 疗效考核的价值 但在实际应用中却往往出 现一些不尽人意的结果，较高的假阳性或假 阴性仍然是一个有待解决的诊断技术问题。 本文以抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗 体Sj116为包被抗体，Sjl0e为酶标记抗体， 维普资讯 http://www.cqvip.com · 26· 附表． 单克隆抗体双抗体奂 ELISA Tab Le．DH0d # E~nflgen 0|S Jnp州 I押 by doub Le am~ody smdwich ELISA h mottoclonal antibodk'~ 受检血清 阳性率 P∞it【 ta ro( ) 正常 凡 Norln inositive in this assay． rhe false positive rate of sera from normal DI：oNe was 5．7 ．Fhe rates of cross reaction with parago nimiasis．clonorchiaMs，trichiniasis and cvstieercosis patients were 3．2 ，0，】3．3 and 1 3．3 respectively． Key words：M onoclonal antibod y．Sch~qo．~ma ，{pu M q ，circulating antigen．EL[SA 维普资讯 http://www.cqvip.com