RE_HPLC测定积雪草中积雪草甙_羟基积雪草甙的含量

Kissinger 方程测得 PAA 的热降解活化能较高相一 致 ,当有 PG 存在时 , PAA 的热降解活化能略有降 低。 3. 2 　本实验的处方为中西药复方 ,不仅有利于 PAA 用药安全 ,而且在中西药结合、开发利用方面 进行有益的尝试 ,同时为研究此类复方药物的相互 作用提供了快速简便、准确性高的实验方法。 参考文献 : [ 1 ] 　陈重阳 ,等. 中国药理学通报[J ] . 1988 ,4 :1242126. [ 2 ] 　中科院上海药物研究所编. 中草药有效成分的提取与分离[ M ] . 上海 :上海科技出版社 ,1983 ,393.[ 3 ] 　邵伟 ,等. 中国医药工业杂志[J ] . 1993 ,24 (7) :3062308.[4 ] 　北京医学院 ,等. 中草药成分化学[ M ] . 北京 :人民卫生出版社 ,1981 ,459.[ 5 ] 　何　平 ,等. 药学学报[J ] . 1992 ,27 (8) :6182623.[6 ] 　刘振海 ,等. 化学. 第五分册. 热分析 [ M ] . 北京 :化学工业出版社 ,1994 ,44. 收稿日期 :1999210230 基金项目 :上海联合—利华资助研究项目 (No. 9802) 。 作者简介 :陈　瑶 (1974～) ,女 ,山东淄博士市人 ,在读硕士研究生 ,主要从事积雪草的生药及药理研究。 RE2HPLC测定积雪草中积雪草甙、羟基积雪草甙的含量 陈 　瑶1 , 　蒋 　毅1 , 　秦路平2 , 　郑汉臣2 , 　翁志龙2 (1. 第二军医大学药学院 , 上海 200433 ; 2. 上海医药工业研究院 , 上海 200040) 摘要 :目的 :测定不同产地的中药积雪草甙和羟基积雪草甙的含量。方法 :采有 RE2HPLC 法进行测定。结果 :不同产地 的积雪草中积雪草甙和羟基积雪草甙的含量有很大差异。结论 :方法简便 ,准确灵敏。 关键词 :积雪草 ;积雪草甙 ;羟基积雪草甙 ; HPLC 中图分类号 :R284. 1 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :100121528 (2000) 0320227202 Determination of Assiticoside and Madecassoside in Centella asiatica ( L. ) Urban by RE2HPLC CHEN Yao1 , 　Q IN Lu2ping1 , 　ZHEN G Han2chen1 , 　J IAN G Yi2 , 　WEN G Zhi2long2 ( 1 . College of Pharmacy , Second Military Medical U niversity , S hanghai 200433 , China ; 2 . S hanghai Instit ute of Pharmaceutical Indust ry , S hanghai 200040 , China) Abstract : 　Objective : To determine the contents of asiaticoside and madecassoside in Centella asiatica (L . ) Urban collected from various areas in China. Methods : The method of RE2HPLC was adopted. Results : The experemental results show that the contents of asiaticoside and madecassoside in Centella asiatica (L . ) Urban are different . Conclusion : RE2HPLC as an alternative technique will be most useful in the quality control of Centella asiatica (L . ) Urban. Key words : Centella asiatica ; asiaticoside ; madecassoside ; RE2HPLC 　　积雪草为伞形科植物积雪草 Centella asiatica L . Urban 的干燥全草。广泛分布于我国华南、华 东、中南及西南地区 ,具有清热利湿 ,解毒消肿之功 效 ;用于下肢静脉功能不全、溃疡等症。研究表明 , 积雪草甙、羟基积雪草甙为积雪草中主要活性成分。 本文应用反相高效液相色谱法对不同产地的积雪草 中的上述两种活性成分进行了测定。此法快速简 便 ,精密度高 ,回收率均满足定量要求。 1 　仪器、药材样品 1. 1 　仪器 722 2000 年 3 月 第 22 卷 　第 3 期 中 成 药 Chinese Traditional Patent Medicine Mar. , 2000 Vol. 22 　No. 3 美 国 惠 普 HP21100A 高 效 液 相 系 统 ( HPG1322A 脱 气 机、HPG1311A 四 元 泵、 HPG1316A 柱温箱、HPG1314AVWD 紫外检测器) 。 1. 2 　试药 积雪草甙、羟基积雪草甙对照品由上海医药工 业研究院提供。试剂甲醇为色谱纯和分析纯、水为 超纯水。药材样品 :系野外采集 ,经作者鉴定确认为 伞形科植物积雪草 Centella asiatica L . Urban。 2 　方法与结果 2. 1 　色谱条件 色谱柱为μ Bondapak C18 (3. 9 mm ×300 cm Water’s 公司) ;流动相为甲醇2水 (55∶45) ;流速为 1. 3 ml/ min ;检测波长为 204 nm ;柱温 30 ℃微孔滤 膜为 0. 45μm。 2. 2 　标准曲线的制备 精密称取积雪草甙、羟基积雪草甙对照品 4. 0 mg ,6. 0 mg ,以 50 %甲醇溶解并定容于 2 ml 量瓶 中 ,配制成浓度分别为 2. 0 mg/ ml ,1. 0 mg/ ml ,0. 5 mg/ ml ,0. 25 mg/ ml ,0. 12 mg/ ml 的积雪草甙标准 品溶液 ;浓度分别为 3. 0 mg/ ml ,1. 5 mg/ ml ,0. 75 mg/ ml ,0. 38 mg/ ml ,0. 19 mg/ ml 的羟基积雪草甙 标准品溶液 ,进样 20μl。按上述色谱条件测定 ,以 标准品溶液的进样浓度 (C)为横坐标 ,峰面积 (A) 为 纵坐标 ,绘制标准曲线。 积雪草甙 :A = 3. 06775 ×103C + 112. 6790 , r = 0. 99973 羟基积雪草甙 :A = 3. 28462 ×103C + 48. 27131 , r = 0. 99992 积雪草甙 ,羟基积雪草甙的线性范围分别为 2. 5～ 40. 5μg ,3. 8～60. 2μg。 2. 3 　样品的测定 积雪草药材粉碎 ,置真空恒温干燥箱干燥 4 h , 取样品各约 0. 5 g ,加入 5 ml 甲醇 ,超声波提取 2 h , 提取液减压回收溶剂至干 ,残渣用 4 ml 50 %甲醇超 声波溶解 ,微孔滤膜过滤 ,分别吸取对照品溶液和样 品溶液进样。按 C 样/ A 样 = C 标/ A 标 ,计算各样 品中积雪草甙和羟基积雪草甙的含量 ,结果见表 1。 2. 4 　精密度实验 在上述色谱条件下 ,对同一浓度的对照品连续 进样 6 次 ,峰面积 : A = 1713. 45 , 　　RS D = 0. 579 %。 表 1 　 不同产地的积雪草中积雪草甙、 羟基积雪草甙的含量比较( %) No 产地 来源 积雪草甙 羟基积雪草甙 1 海南尖峰岭 野外采集 0. 684 0. 693 2 广东同和 野外采集 1. 138 1. 586 3 江西九江 野外采集 0. 343 0. 356 4 湖南溆浦 野外采集 0. 651 0. 737 5 浙江金华 野外采集 0. 245 0. 330 6 浙江东阳 野外采集 0. 530 0. 568 7 湖北武汉 野外采集 1. 092 0. 986 8 四川 (陈品) 购自上海市药材公司 0. 172 0. 172 9 浙江 (陈品) 购自浙江省药材公司 痕量 痕量 2. 5 　加样回收率实验 精密称取 4 份积雪草样品 2 约 0. 5000 g ,按样 品测定下方法操作 ,测定积雪草甙和羟基积雪草甙 的含量。另精密称取样品 0. 5000 g ,分别准确加入 积雪草甙和羟基积雪草甙标准溶液 (0. 701 mg/ ml、 0. 804 mg/ ml) 1. 0 ml ,按样品测定项下方法操作。 计算回收率 ,结果为 :积雪草甙 : 102. 75 % , RS D = 4. 818 % ;羟基积雪草甙 :99. 64 % , RS D = 1. 824 %。 3 　讨论 3. 1 　样品用超声波提取 2 h ,若时间短则提取不完 全 ;若时间过长 ,则部分积雪草甙被破坏。 3. 2 　积雪草甙、羟基积雪草甙在紫外区基本无吸 收 ,仅在近紫外区 200 nm 左右有末端吸收。实验 表明 ,波长越长 ,噪音越小 ,灵敏度越低 ,故选择 204 nm 为测定波长。 3. 3 　实验结果表明 ,同年不同产地的积雪草中积雪 草甙、羟基积雪草甙的含量相差较大 ,可能与药材生 长的地理位置、环境有关 ;新鲜药材与陈年药材的含 量也相差较大 ,可能是由于放置药材中的有效化学 成分发生降解。此结果不仅可作为药材道地性的依 据 ,也可供药材和药品生产、医疗单位等作参考。 参考文献 : [ 1 ] 　秦路平 ,郑汉臣 ,丁如贤 ,等. 中药积雪草的原植物考证 [J ] . 中 国野生植物资源 ,1997 , (1) :19. [ 2 ] 　Montever A , P. Ouhipinti , F. Rossi et al [J ] . Acta Ther , 1987 , 13 (6) :629. [3 ] 　乐锦茂 ,浦培英 ,雷　颖 ,等. 复方积雪草浸膏对大白鼠慢性实 验性胃溃疡及微循环的影响[J ] . 江苏中医 ,1992 ,13 (3) :42. 822 2000 年 3 月 第 22 卷 　第 3 期 中 成 药 Chinese Traditional Patent Medicine Mar. , 2000 Vol. 22 　No. 3