HPLC测定不同产地和不同时间的积雪草中的积雪草苷和羟基积雪草苷

© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 华西药学杂志 W C J· P S　2009, 24 (2) ζ 186～187 　　 作者简介 :梁李广 (1965 - ) ,男 ,广西南宁 ,副教授 ,从事药物分析的教学与科研工作。Email: gxllg@126. com HPLC测定不同产地和不同时间的积雪草中的积雪草苷和羟基 积雪草苷 梁李广 1 ,马 　维 2 (1. 广西卫生管理干部学院药学系 ,广西 南宁 530021; 2. 广西昌洲天然产物开发有限公司 ,广西 南宁 530031) 摘要 : 目的 　测定不同产地及不同采收季节的积雪草中积雪草苷、羟基积雪草苷的含量。方法 　采用 Agilent C18色谱柱 ,流 动相为乙腈 -水 ,梯度洗脱 ,流速 1. 0 m l·m in - 1 ,检测波长 205 nm,柱温 30℃。结果 　积雪草苷和羟基积雪草苷平均的回收率 分别为 99. 5%、100. 3% , RSD分别为 1. 06%、1. 21% ( n = 6)。结论 　不同产地中的积雪草苷、羟基积雪草苷的含量有差异。 广西南宁地区产积雪草中 , 6～10月采收的积雪草中积雪草苷、羟基积雪草苷含量较高。 关键词 : 积雪草 ;积雪草苷 ;羟基积雪草苷 ;高效液相色谱法 ;采收季节 ;产地 中图分类号 : R917　 文献标识码 : A　 　文章编号 : 1006 - 0103 (2009) 02 - 0186 - 02 D eterm ina tion of a sia ticoside and madeca ssoside in C en te lla as ia tica urban collected from d if2 feren t sea son s and d ifferen t hab ita ts by HPLC L IANG L i - guang 1 ,MA - wei2 (1. D epartm en t of Pharm acy, Guangxi Health A dm inistra tors College, N ann ing, Guangxi, 530021 P. R. China; 2. Guangxi Changzhou N atura l Products D evelopm ent CoL td, N ann ing, Guangxi, 530021 P. R. China) Abstract: O BJECT IVE　To determ ine the contents of asiaticoside and madecassoside in Centella asia tica urban collected from differ2 ent seasons and p roducing areas. M ETHOD S　Agilent C18 column was used with acetonitrile - water asmobile phase with gradient elu2 tion and the detection wavelength was at 205 nm. Flow rate was at 1. 0 m l·m in - 1 and column temperature was 30℃. RESUL TS　The average recovery of assiaticoside was 100. 6% with RSD of 1. 21% ( n = 6). The average recovery of madecassoside was 99. 3% with RSD of 0. 94% ( n = 6). CO NCL US IO N　The experimental results show that the contents of asiaticoside and madecasm side in Centel2 la asia tica U rban collected from different seasons and p roducing areas. are different. The content is higher of the asiaticoside and made2 cassoside in Centella asiatica urban collected from june to october in Nanning in Guangxi p rovince. Key words:Centella asiatica urban; A siaticoside;Madecassoside; HPLC; Seasons; Habitats CLC num ber: R917　　　 D ocum en t code: A　 　Article ID :1006 - 0103 (2009) 02 - 0186 - 02 　　积雪草为伞形科植物积雪草 Centella asia tica (L ) U rb的干燥全草 ,味苦、辛 ,性寒 ,可清热利湿、 解毒消肿。全草含积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草 酸等化学成分 ,研究表明 ,积雪草苷、羟基积雪草苷 有促进创伤愈合的作用。现采用 HPLC法测定不同 采收季节及不同产地积雪草中积雪草苷、羟基积雪 草苷的含量 ,探索不同积雪草中积雪草苷和羟基积 雪草苷的含量规律 ,为进一步开发利用积雪草提供 科学依据。 1　实验部分 1. 1　仪器与试药 1100型高效液相色谱仪系统 (美国 Agilent)。 积雪草苷、羟基积雪草苷对照品及积雪草样品 (广 西昌洲天然产物开发有限公司 ) ;乙腈为色谱纯 ;水 为娃哈哈纯净水。 1. 2　方法与结果 1. 2. 1　色谱条件 　采用 Agilent C18色谱柱 (150 mm × 4. 6 mm, 5μm ) ,流动相 A为水 , B为乙腈 ,梯度洗 脱 ; 0～3 m in, A由 80% ～71% , B由 20% ～29% , 3 m in后保持乙腈 - 水 ( 29 ν 71 ) ,流速 1. 0 m l· m in - 1 ,检测波长 205 nm ,柱温 30℃。进样量 20μl。 在上述条件下 ,各成分无干扰且完全分离 (图 1)。 图 1　对照品 ( A)和积雪草样品 ( B)溶液的色谱图 F ig 1　HPLC chroma togram s of con trol solution ( A ) and sam ple solution( B) © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 1. 2. 5　溶液的制备 　各取 20 mg积雪草苷、羟基积 雪草苷对照品 ,精密称定 ,置 25 m l量瓶中 ,加 30% 的乙腈定容 ,即得对照贮备液 ;精密吸取 5 m l,加 30%的乙腈稀释至 10 m l,即得对照品溶液。取积雪 草样品粉碎成粗粉 ,精密称取 1 g,加 25 m l 75%乙 醇 ,超声提取 1 h,过滤 ,取续滤液作为供试品溶液。 1. 2. 3　线性范围的考察 　分别精密吸取 2、4、6、8 m l积雪草苷、羟基积雪草苷对照贮备液 ,置 10 m l量 瓶中 ,加 30%乙腈定容 ,分别吸取上述稀释液及贮 备液进样 20μl,记录峰面积。以进样量 (μg)为横 坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归 ,回归方程分别 为 : A积雪草苷 = 342. 1C - 15. 80 ( r = 0. 9999 ) , A羟基积雪草苷 = 362. 3C + 19. 36 ( r = 0. 9999) ,结果表 明 ,积雪草苷和羟基积雪草苷进样量 3. 2～16μg与 峰面积线性关系良好。 1. 2. 4　精密度考察 　取积雪草苷、羟基积雪草苷对 照液 ,重复进样 6次 ,计算 ,积雪草苷和羟基积雪草 苷的 RSD分别为 0. 71%、0. 63%。 1. 2. 5　重复性试验 　分别吸取积雪草苷、羟基积雪 草苷对照品溶液 ,进样 20μl,另吸取供试品溶液 ,进 样 20μl,按外标法计算含量 ,积雪草苷和羟基积雪 草苷的 RSD分别为 0. 70%、0. 65% ( n = 6)。 1. 2. 6　稳定性试验 　分别取放置 3、6、8、24 h的供 试品溶液 ,进样 20μl,积雪草苷攻羟基积草苷雪峰 面积的 RSD 分别为 0. 76%和 0. 80% ,表明供试品 溶液在 24 h内稳定。 1. 2. 7　加样回收试验 　精密称取积雪草样品 6份 , 依次精密加入不同量的积雪草苷和羟基积雪草苷对 照品 ,按“1. 2. 2”项下方法制备供试品溶液 ,取对照 品溶液和供试品溶液 ,依次进样 20μl,记录峰面积 , 按外标法计算含量 ,并计算两种成分的回收率。积 雪草苷的平均回收率为 100. 6% , RSD = 1. 21% ( n = 6) ,羟基积雪草苷的平均回收率为 99. 3% , RSD = 0. 94% (n =6)。 1. 2. 8　样品的测定　分别吸取对照品溶液和供试品溶 液进样 20μl,记录峰面积 ,按外标法计算含量。测定 结果见表 1、表 2。 表 1　不同产地积雪草的测定 Table 1 　Con ten ts of a sia ticoside and madeca ssoside in Cen tella asia tica urban collected from d ifferen t Hab ita ts Habitats A siaticoside /% Madecassoside /% Guangxi nanning 0. 82 1. 12 Yunnan wenshan 0. 56 1. 08 Guizhou shunyi 0. 38 1. 04 Hainan sanya 0. 50 0. 86 Hubei wuhan 0. 36 0. 69 表 2　广西南宁地区产不同月份积雪草的测定 Table 2 　Con ten ts of a sia ticoside and madeca ssoside in Cen tella asia tica urban collected from d ifferen t sea son s in Nann ing of Guangx i Month A siaticoside /% Madecassoside /% 1 0. 23 0. 34 2 0. 25 0. 34 3 0. 28 0. 38 4 0. 45 0. 63 5 0. 56 0. 76 6 0. 65 0. 84 7 0. 73 0. 92 8 0. 75 0. 96 9 0. 82 1. 12 10 0. 74 0. 96 10 0. 74 1. 12 11 0. 54 0. 86 12 0. 50 0. 81 2　讨论 实验结果表明 ,不同采收季节及不同产地积雪 草中积雪草苷、羟基积雪草苷的含量有差异 ,其中广 西南宁地区 6～10月采收的积雪草中积雪草苷、羟 基积雪草苷的含量较高 ,这段时间较合适采收。国 内其他地区不同采收季节的积雪草中积雪草苷、羟 基积雪草苷的含量有待进一步研究。曾经比较了乙 腈 -水系统和甲醇 -水系统 ,由于甲醇在 205 nm处 干扰较大 ,故采用了末端吸收较小的乙腈 - 水系统 作为流动相。 参考文献 : [ 1 ]　张蕾磊 ,王海生 , 姚庆强 ,等. RP - HPLC法测定积雪草中积 雪草苷和羟基积雪草苷 [ J ]. 中草药 2007, 38 (3) : 455 - 456. 收稿日期 : 2008 - 04 781第 2期 梁李广 ,等。HPLC测定不同采收季节及不同产地积雪草中的积雪草苷、羟基积雪草苷