乙酰水杨酸对醋酸扭痛模型的镇痛效果和福尔马林实验模拟慢性疼痛(小鼠)
目的:
本实验旨在估计小鼠醋酸扭体模型的药物镇痛效力以及福尔马林模拟临床慢性模型的构造。
原理:
1. 扭痛模型:各种伤害,如醋酸引起的疼痛刺激通过感觉神经纤维传送到脊髓,然后到达大脑皮质产生疼痛感觉。中央和外周镇痛剂舒缓疼痛通过感觉中枢的一体化和抑制或减少疼痛感觉的进入。中枢的止痛很容易通过动物实验证实效果,但一些周边止痛药,如水杨酸的影响不容易确定。
2. 福尔马林实验:甲醛实验能较好的模拟临床慢性疼痛,是一种重要的慢性疼痛模型。文献报道小鼠甲醛实验可分为两个时相,分别是注射甲醛后0-5min内和20-30min,这两个时相引起的疼痛机制不同。第1时相,是刺激伤害性感受器引起的直接效应,能被中枢性镇痛药如吗啡抑制。第2时相,是由前列腺素部分介导的炎症反应,能被非类固醇类抗炎剂、类固醇和中枢性镇痛药抑制
试剂和仪器:
1. 注射器,注射器,电子天平,观察管,计数器,解剖小鼠其他基本器材
2. 乙酰水杨酸,镇痛新,醋酸,福尔马林,生理盐水
3. 18-22g小鼠 9只(在实验室养3天并在试验前12小时不喂食)
实验过程:
1. 把9只小鼠随机分成3组,每组3只,不喂食10小时。所有的小鼠用黄色染料标记。(三组分别为测试组,阳性对照组,阴性对照组)
2. 向测试组的三只小鼠中,按照100mg/kg比例注射乙酰水杨酸,阳性对照组的小鼠中,按照15mg/kg的比例注射,阴性对照组,按照0.2mg/10g的比例注射生理盐水。
3. 上步反应30Min后,向每只小鼠通过腹腔注射1.1%的醋酸,每只0.2ml。
4. 用计数器记下每只小鼠在10min的摆尾次数。
5. 福尔马林测试:参照醋酸扭体实验步骤(1)和(2)给药,给药后30分钟,自小鼠右后爪足背皮下注射1% 福尔马林( 0. 9% 生理盐水配置) 20ml。将小鼠舔、咬右爪的时间长度作为疼痛反应的指示。记录注射福尔马林后0 ~ 5min(第1时相)和15~ 30min(第2时相)反应时间。注射福尔马林1h后, 将小鼠断头处死, 自膝关节切脚,称重, 比较左右足重量差异。
注意事项:
(1)醋酸扭体实验中,为便于记录,腹部和后肢因刺激而伸长一次定义为一次扭体反应。
(2)疼痛抑制百分率用下述公式计算:
抑制百分率=(对照组平均扭体数-给药组平均扭体数)/对照组平均扭体数*100%。
其中,抑制率最大的时间确定为峰时间。
(3)据文献报道,抑制率超过70%的待测化合物认为有效,抑制率低于70%则被认为无效。
(4)据报道,醋酸扭体实验疼痛反应潜伏期为5分钟,可按情况适当调整计时时间。
(5)若无盐酸吗啡或镇痛新,可取消阳性对照组,小鼠数量12只即可。
参考文献
(1)刘和莉, 李月玲, 薛永志, 不同温度和醋酸浓度对小鼠扭体疼痛模型的影响, 包头医学院学报,2006.2
(2) 刘渝, 俞岚, 张兵,原花青素对醋酸所致小鼠疼痛模型的影响, 医药导报,2007.11