弓形虫感染致BALB_c小鼠生殖毒性作用

�相酶活性明显增加 ,对吸烟者的临床用药有一定的影响。 参考文献 �1�� 享义平,王平,王亚文,等.香烟主流烟雾与侧流烟雾对小鼠致 突变作用的研究 [ J] .中国公共卫生, 2001, 17( 8 ): 707- 708. �2�� 徐淑云.药理实验方法学 [ M ] . 3版. 北京: 人民卫生出版社, 2002: 511- 521. �3�� 粱欣,海春旭,刘瑞,等.灵芝孢子粉对肝微粒体脂质过氧化模 型影响 [ J] .中国公共卫生, 2006, 22( 4 ): 465- 466. �4�� Ish ih ara K, Kussh ida H, Yu zu rihara M. In teractions of drugs and Ch inese herb s: pharm acok inetic changes of talbu tam ide and d iaze� pam caused by extract ofAng elica dahurica [ J] . J Pharm Pharma� co,l 2000, 52 ( 8) : 1023- 1029. �5�� 蒋玲,李玲,吴君,等.氧化应激致慢 - I生水砷暴露小鼠肝损伤 作用 [ J] .中国公共卫生, 2008, 24 ( 5) : 593- 595. �6�� 袁靖,赵军宁,李祖伦,等.虎杖苷对小鼠肝细胞色素 P450和 II 相酶的影响 [ J] .中药药理与临床, 2007, 23 ( 2) : 12- 14. �7�� Prakash C, Kam elA, Cu i D, et a.l Iden tif icat ion of th em a jor hum an liver cytochrom e P450 isoform ( s) respon sib le for th e form ation of the prim ary m etabolites of ziprasidone and p red ict ion of possib le d rug in teractions[ J]. Br JC lin Pharm aco, 2000, 49( 1 ) : 35- 42. �8�� 陈西敬.药物代谢动力学研究进展 [ M ] .北京:化学工业出版 社, 2008: 95- 100. 收稿日期: 2010�07�20 (解学魁编辑 � 孔繁学校对 ) * 基金项目: 山西省教育厅大学生创新基金 (晋教高函 [ 2009] 5 ) � 作者单位: 1.山西医科大学人体解剖学教研室,山西 太原 030001; 2.山西省煤炭中心医院妇产科 � 作者简介: 赵云鹤 ( 1981- ) ,女, 山西盂县人,讲师, 硕士,研究方 向:弓形虫感染与生殖毒理。 �实验研究� 弓形虫感染致 BALB /c小鼠生殖毒性作用* 赵云鹤 1,侯玉英 1,岳慧萍 1,赫燕侠 1,侯丽萍 2, 郜亮 1,李敏捷 1, 郭婧 1 � � 摘 � 要: 目的 � 探讨不同剂量弓形虫感染对 BALB / c小鼠的生殖毒性作用。方法 � 将 50只受精鼠随机分为 5 组, 每组 10只;孕 8 d,阴性对照组给予磷酸盐缓冲液, 低、中、高剂量组腹腔注射 50、100、200个 /只纯化 RH 株弓形虫 速殖子, 阳性对照组给予环磷酰胺 20 mg / kg; 孕 18 d观察孕鼠主要脏器及胚胎情况。结果 � 阳性对照组吸收胎率 ( 19�6% )、死胎率 ( 23�6% )、流产率 ( 4�6% )、畸胎率 ( 31� 4% )与阴性对照组比较明显升高, 差异均有统计学意义 (P < 0� 01)。弓形虫 100、200个 /只剂量组吸收胎率、死胎率、流产率分别为 15� 7%、8� 2%、5�8% 和 28�9%、12�5%、 15�1% ,高于阴性对照组 (P < 0�05 ); 200个 /只剂量组活胎畸形率与阴性对照组比较 ( 27� 3% , 0% )明显升高 (P < 0� 01)。结论 � 100、200个 /只纯化 RH株刚地弓形虫速殖子孕中期感染可致 BALB /c小鼠生殖毒性。 关键词: 弓形虫;生殖毒性; BALB /c小鼠 � � 中图分类号 : R 382�5� � � � � � 文献标志码: A � � 文章编号: 1001�0580( 2011) 05�0606�02 Reproductive tox icity ofToxoplasma gondii infection in pregnan t BALB / cm ice� ZHAO Yun�he, HOU Yu�y ing, YUE H ui�p ing, et a .l Depa r tm ent o f Anatom y, Shanx iM ed ica l Un iv ersity ( Ta iyuan 030001, Ch ina ) Abstract: Objective� To eva lua te the reproductiv e tox ic ity o f different degree Toxopla sm a gond ii infec tion on BALB / cm ice.M ethods� Fertilized BALB /c m ice w e re d iv ided into 5 group s random ly ( 10 in each g roup) . O n the 8th day o f pergnancy, the nega tive con tro l g roup w as g iven aseptic pho sphate buffer so lution; the low, m ode ra te, and h igh do se exper im ent g roup w ere expo sed to 50, 100, 200 Toxop la sm a gond ii tachyzo ite s; the po sitive contro l g roup w as expo sed to cyclopho spham ide a t 8 th and 10th day o f pregnancy. A ll the trea tm en ts w e re adm inistered w ith intrape ritoneal in jection. On the 18 th day o f pregnancy, the conditions o f pregnant m ice and fo etus w ere exam ined. Resu lts� Con trast w ith the negativ e con tro l g roup, po sitive contro l g roup show ed sign ificant h ighe r rate s o f fo etus abso rption ( 19�6% ), still b irth ( 23�6% ), abnorm al em bryo ( 4�6% ), and teratism ( 31�4% ) (P < 0�05 fo r a ll). In m ode ra te do se group, the ra te o f fo etus abso rption, still b irth, and abno rm a l em bryo w as 15�7% , 8�2% , 5�8% and tho se o f the high do se g roup w as 28�9% , 12�5%, and 15�1% , re spective ly, w ith sign ificant difference s com pared w ith tho se o f the negative contro l g roup ( P < 0� 05 for all). The teratism ra tew as obv iously h igher in h igh do se group than in the contro l ( 27� 3% vs 0, P < 0�01). Conclusion� Infec tion w ith 100 o r 200 RH Toxop la sm a tachy zo ite in them idd le o f g esta tiona l per iod induce reproductiv e tox ic ity in BALB /c m ice. K ey words: T oxopla sm a gondii; reproduc tive tox ic ity; BALB / cm ice � � 刚地弓形虫是一种感染率很高的机会性致病原虫, 研究 和探讨其对宿主的生殖毒性作用,对降低新生儿畸形率、预防 和控制先天性弓形虫病、提高人类的身体素质具有重要意义。 不同宿主对弓形虫的易感性、感染后症状及转归不同 �1- 2�, 本 实验选择孕 8d BALB / c小鼠腹腔接种弓形虫速殖子,观察孕 鼠体重、主要脏器病理切片及胚胎情况等指标, 探讨弓形虫感 染对孕鼠生殖功能影响,为建立弓形虫致生殖毒性动物模型 并进一步阐明其致病机制提供依据。 1� 与方法 1�1� 实验动物及虫株 � 清洁级 BALB / c小鼠 (中国医学科学 院实验动物研究所 ) ,雌雄鼠各 50只, 在本实验室内饲养、繁 殖,保持近交, 体重 ( 21�0 � 0�5 ) g, 9 ~ 10周龄。RH 株弓形 虫速殖子 (北京大学医学部寄生虫学教研室 ), 本室液氮保 存,常规复苏后无菌接种 BALB / c小鼠, 转种 3代, 胰酶消化、 洗涤、计数。 1�2� 主要试剂与仪器 � 环磷酰胺 (江苏恒瑞医药股份有限 公司 ); 胰蛋白酶 (美国 B io sharp公司 ) ; Bouins液: 苦味酸饱 和液 75份, 甲醛 20份, 冰醋酸 5份; 茜素红溶液: 冰醋酸 5 mL、纯甘油 10 mL、1%水合氯醛 60 mL, 将茜素红加入上液至 饱和,使用时用 1% KOH稀释成 1� 的应用液; 透明液 � : 甘 606 中国公共卫生 2011年 5月第 27卷第 5期 � � Chin J Public Hea lthMay 2011 Vol. 27 N o. 5 油 20份, 2% KOH 3份, 蒸馏水 77份; 透明液� : 甘油 50份, 2% KOH 3份,蒸馏水 47份。AR5120电子精密天平 (上海梅 特勒 -托利多仪器有限公司 ), 感量 0� 01 g; pH 211酸碱度离 子计 (意大利哈纳有限公司 ), BH�2型光学显微镜 (日本 O lym pus公司 )。 1� 3� 分组与处理 � 将 BALB /c雌鼠与雄鼠 1: 1合笼 ,次晨查 到阴栓者记为妊娠 0 d, 将受精鼠随机分为 5组,每组 10只。 孕 8 d 腹腔注射: 阴性对照组给予无菌磷酸盐缓冲液 0� 2 mL /只; 弓形虫低、中、高剂量组分别注射经胰酶纯化的 RH株弓形虫速殖子 50、100、200个 /只;阳性对照组孕 8、10 d 各注射环磷酰胺 20 m g /kg。 1� 4� 生殖毒性指标观察 � 孕 18 d颈椎脱臼处死母鼠,暴露 子宫, 观察胚胎颜色、外形 (粉红色为活胎; 黑色、紫色为死 胎; 未成形胚胎为早吸收胎、晚吸收胎 )。将胎盘与胎鼠剥 离, 称重。从头向肛门检查胎鼠外观有无畸形; 测量胎鼠身 长、尾长。从每个孕鼠的全部胎鼠中取 1 /2, 用 Bou ins液固定 10 d,检查胎仔内脏。将余下的 1/2胎鼠置于 95% 乙醇液固 定 48h,移入 1% KOH 溶液中, 2 d后去除内脏和脂肪, 移入 1% KOH溶液中透明 3~ 5 d,至骨骼清楚,将胎仔移入茜素红 溶液至桃红色, 移入透明液 I、II液中各 1 d, 显微镜下观察各 部位骨骼形态有无异常。 1� 5� 统计分析 � 采用 SPSS 13� 0软件进行分析, 组间比较采 用方差分析和 � 2检验,显著性水准 �= 0�05。 2� 结 � 果 2� 1� 弓形虫对胚胎形成的影响 ( 1) � 与阴性对照组比较, 弓形虫 50个 /只组胎盘重量下降 (P < 0� 05) ; 100, 200个 /只 组着床数降低, 活胎率、吸收胎、死胎率、流产率升高 (P < 0� 05), 200个 /只组胎盘重量明显降低 (P < 0� 01)。 表 1� 弓形虫感染对胚胎形成的影响 (n= 10) 组别 � (个 /只 ) 着床数 ( �x � s) 活胎率 (% ) 吸收胎率 (% ) 死胎率 (% ) 流产率 (% ) 胎盘重 [ ( �x � s) , g] 阴性对照 97 � 1. 43 98. 9 1. 1 0. 0 0. 0 0. 15 � 0. 01 弓形虫 � � � 50 93 � 1. 35 94. 8 3. 4 1. 8 0. 0 0. 14 � 0. 02a � � � � � � 100 82 � 1. 78 a 69. 8a 15. 7a 8. 7a 5. 8a 0. 13 � 0. 02b � � � � � � 200 77 � 1. 12 a 43. 5a 28. 9a 12. 5a 15. 1a 0. 09 � 0. 02b 阳性对照 66 � 1. 54 a 52. 2a 19. 8a 23. 6a 4. 6a 0. 08 � 0. 01b � � 注:与阴性对照组比较, aP < 0�05, b P < 0�01。 2� 2� 弓形虫对胎鼠外观的影响 (表 2) � 与阴性对照组比较, 弓形虫 50, 100个 /只组胎鼠体重下降 (P < 0� 05), 胎鼠尾长 较短 (P < 0� 01); 200个 /只组胎鼠体重、身长、尾长明显降低 (P < 0� 01)。弓形虫 50, 100, 200个 /只组和阳性对照组分别 有 1~ 3例并趾、短尾, 但差异无统计学意义 (P > 0�05)。 表 2� 弓形虫感染对胎鼠外观的影响 (�x � s) 组别 � (个 /只 ) n 体重 ( g) 体长 ( cm) 尾长 ( cm ) 阴性对照 95 0. 88 � 0. 04 1. 85 � 0. 08 0. 81 � 0. 11 弓形虫 � � 50 88 0. 81 � 0. 05 a 1. 77 � 0. 07 0. 78 � 0. 06 � � � � � 100 57 0. 73 � 0. 04 a 1. 76 � 0. 06a 0. 71 � 0. 04b � � � � � 200 33 0. 58 � 0. 05 b 1. 69 � 0. 11b 0. 59 � 0. 05b 阳性对照 34 0. 56 � 0. 02 b 1. 65 � 0. 04b 0. 56 � 0. 08b � � 注:与阴性对照组比较, aP < 0�05, b P < 0�01。 2� 3� 致畸作用观察 (表 3) � 阴性对照组比较, 弓形虫 200 个 /只组孕鼠畸胎发生率, 活胎畸形 胎率均明显增高 (P < 0� 01)。 表 3� 孕鼠畸胎发生率和活胎畸形率 组别 � 个 /只 孕鼠数 (个 ) 孕鼠畸胎发 生率 (% ) 活胎总数 (个 ) 活胎畸形率 (% ) 阴性对照 10 0. 0 95 0. 0 弓形虫 � 50 10 10. 0 88 4. 5 � � � � 100 10 10. 0 57 7. 0 � � � � 200 10 33. 3b 33 27. 3b 阳性对照 10 40. 0b 34 32. 4b � � 注:与阴性对照组比较, a P < 0. 05, bP < 0. 01。 3� 讨 � 论 人类妊娠早期 ( 3个月 )即器官发生期感染弓形虫所致的 先天性弓形虫病尤其严重, 因此,本实验选择在 BALB /c小鼠 孕 8d即其器官发生期接种弓形虫进行研究 �3�。若弓形虫致 母鼠毒性过大,可能导致母鼠损伤,从而对胚胎发育产生间接 不良影响,而观察不到弓形虫虫体对胚胎所致的生殖和发育 毒性作用,本实验中未观察到孕鼠的异常情况,表明染虫剂量 对母鼠造成的毒性不大 �4- 6�。100、200个 /只纯化 RH株弓形 虫速殖子腹腔注射感染 BALB / c孕鼠有抑制胚胎生长发育的 生殖毒性,可作为研究弓形虫生殖毒性作用较为理想的接种 方法和剂量选择 �7�。 在此基础上, 可采用凋亡检测、免疫荧光化学、分子生物 学等技术观察相关细胞因子在不同发育阶段胚胎损伤的表达 情况,用体外全胚胎培养技术排除干扰因素 �8- 10�, 探讨弓形 虫感染致生殖毒性的作用机制, 为进一步预防和治疗弓形虫 病提供科学依据。 参考文献 �1�� Pezerico SB, Langon iH, Da S ilva AV, et a.l E valu at ion ofT oxop la s� ma gond ii p lacental tran sm iss ion in BALB /c m ice m odel[ J] . 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