5.5 反胶团萃取

null第五节 反胶团萃取第五节 反胶团萃取Reversed micellar extractionnull 1.有很高的萃取率和反萃取率并具有选择性。 2.分离、浓缩同时进行，过程简便。 3.能解决蛋白质在非细胞环境中易迅速失活的问题。 4.可直接从完整细胞中提取蛋白质和酶。 5.成本低，溶剂可反复使用。反胶团萃取法的优点nullnullnull反胶团的定义： 两性面活性剂在非极性有机溶剂中亲水基团自发地向内聚集而成的，内含微小水滴的，空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。 1 反胶团溶液形成的条件和特性null1.1 表面活性剂 表面活性剂可分为阴离子、阳离子和非离子型。null在反胶团萃取蛋白质的研究中，用得最多的是阴离子表面活性剂AOT(AerosolOT)，其化学名为丁二酸－2－乙基己基磺酸钠，结构式见图nullnull(1) CTAB(cetyl-methyl-ammonium bromide) 溴化十六烷基三甲胺/十六烷基三甲基胺溴(2) DDAB(didodecyldimethyl ammonium bromide) 溴化十二烷基二甲铵null(3) TOMAC (triomethyl-ammonium chloride) 氯化三辛基甲铵 null1.2 临界胶团浓度 (Critical Micelle Concentration, CMC) 临界胶团浓度,是胶团形成时所需表面活性剂的最低浓度，用CMC来表示，这是体系特性，与表面活性剂的化学结构、溶剂、温度和压力等因素有关。null1.3 胶团与反胶团的形成 将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶团浓度(CMC)时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，在通常情况下，这种聚集体是水溶液中的胶团，称为正常胶团(normal micelle)。null胶团： 表面活性剂的极性头朝外，疏水的尾部朝内，中间形成非极性的“核”水非极性的“核”极性“头”非极性“尾”null 若将表面活性剂溶于非极性的有机溶剂中，并使其浓度超过临界胶团浓度(CMC)，便会在有机溶剂内形成聚集体，这种聚集体称为反胶团。null反胶团： 表面活性剂的极性头朝内，疏水的尾部向外，中间形成极性的“核”有机溶剂极性“头”极性的“核”非极性“尾”nullnull 形状：通常为球形，也有的为椭圆形或棒形。 大小：半径一般为10nm，取决于反胶团的含水量W0。 W0≌[H2O]/[Surf] 1.4 反胶团的形状和大小null1.5 反胶团的溶解作用null1.6 反胶团的制备2 反胶团萃取蛋白质的基本原理2 反胶团萃取蛋白质的基本原理 null 蛋白质溶入反胶团溶液的推动力主要包括表面活性剂与蛋白质的静电作用力和位阻效应。3 影响反胶团萃取蛋白质的主要因素3 影响反胶团萃取蛋白质的主要因素null 对于阳离子表面活性剂、溶液的pH值需高于蛋白质的pI值，反胶团萃取才能进行；对于阴离子表面活性剂，当pH＞pI时，萃取率几乎为零。3.1 水相pH值nullpH对蛋白质萃取率的影响 null3.2 离子强度 a.离子强度增大后，反胶团内表面的双电层变薄，减弱了蛋白质与反胶团内表面之间的静电吸引，从而减少蛋白质的溶解度；nullb. 盐浓度的增大，反胶团产生脱水效应，反胶团直径减小，空间排阻作用增大，蛋白质的溶解率下降；null盐浓度对反胶团含水率的影响 AOT（mmol／L）＝（○）50 （△）100，（□）200，（◇）300 nullc.离子强度增加时，增大了离子向反胶团内“水池”的迁移并取代其中蛋白质的倾向，使蛋白质从反胶团内被盐析出来；nulld. 盐的浓度越高，在表面活性剂中溶解越好，则蛋白质在表面活性剂中溶解性能越差，故萃取率越低。 盐与蛋白质或表面活性剂的相互作用，可以改变溶解性能， null 盐浓度对蛋白质溶解率的影响 null 选用有利于增强蛋白质与反胶团间的静电作用和增加反胶团大小的表面活性剂。 通过在单一表面活性剂中加入另一种助表面活性剂的方法来改善萃取性能。3.3 表面活性剂种类和浓度null 增大表面活性剂的浓度可增加反胶团的数量，从而增大对蛋白质的溶解能力。null3.4 其他因素有机溶剂: 有机溶剂的种类影响反胶团的大小。 2.温度: 增加温度能够增加蛋白质在有机相的溶解度。 null1.分离蛋白质混合物 2.浓缩α-淀粉酶 3.从发酵液中提取胞外酶 4.直接提取胞内酶 5.反胶团萃取用于蛋白质的复性4 反胶团萃取蛋白质的应用nullnullnull反胶团萃取分离蛋白质的过程null反胶团液膜萃取null思考题