兽用狂犬病疫苗免疫犬的效果评价

兽用狂犬病疫苗免疫犬的效果评价 周桂兰1, 赵德明2, 祝俊杰1, 赵景义1, 林德贵2, 施振声2, 凌凤俊3, 张永振4, 徐葛林5, 祝玉桃5, 郑新雄5, 吴小红6, 刘景华6, 李　佳6 (1. 北京市畜牧兽医总站, 北京 朝阳 100107; 2. 中国农业大学动物医学院, 北京 海淀 100094; 3. 北京观赏动物医院, 北京 西城 100029; 4. 中国疾病预防控制中心控制所, 北京 昌平 102206; 5. 武汉生物制品研究所, 湖北 武昌 430060; 6. 中国药品生物制品检定所, 北京 崇文天坛西里 100050) 中图分类号: S858. 292　　　文献标识码: B　　　文章编号: 052926005 (2007) 0420050204 　　据世界卫生组织 (W HO ) 2004 年, 狂犬病已 广泛流行于世界各地。目前约有90 多个国家流行此 病, 而以亚、非、拉地区最为严重。自 1997 年至今, 我 国狂犬病对人的危害持续上升, 其病死率和死亡人数 均居人类各种法定报告传染病前2 位之内, 中国狂犬 病病人约93% 由家犬引起, 6% 由猫引起, 另外还有为 数不多的猪和老鼠引起。目前, 狂犬病疫区呈由南向 北扩展趋势。为了探索有效的预防和控制狂犬病发生 的重要措施, 本项目对 2 种兽用狂犬病 (ERA 株) 活 疫苗和 3 种进口兽用狂犬病灭活疫苗进行了免疫效 果评价。 1　材料与方法 1. 1　实验动物 1. 1. 1　小鼠　SPF 实验小鼠 (中国药品生物制品检 定所、武汉生物制品研究所提供)。 1. 1. 2　实验犬　共分5 组: 第1 组35 只, 为A 兽用狂 犬病 (ERA 株)活疫苗检测组; 第2 组28 只, 为B 兽用 狂犬病 (ERA 株)活疫苗检测组; 第3 组21 只, 为C 兽 用狂犬病灭活疫苗检测组; 第4 组86 只, 为北京市居 民的家犬在2003- 2005 年间免疫注射常用的进口狂 犬病灭活疫苗检测组; 第5 组10 只, 为注射法国维克 狂犬病灭活疫苗对外观健康唾液中狂犬病病毒抗原 阳性犬的影响检测组。第1 组、第2 组、第3 组均为金 民养犬场提供的6 月龄至5 岁的成年健康家犬, 饲养 方式、营养配餐、饲养环境、饲养员均相同。第1 组、第 2 组实验犬在试验前均未曾注射过任何狂犬病疫苗。 第 3 组中的 1 号、2 号、3 号、4 号、5 号、6 号、7 号、8 号、9 号、10 号、11 号、12 号、18 号实验犬, 在本试验 前 1 年均有过 1 次兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗的接 种史。第4 组为随机抽样的北京市民家庭养犬, 其中 81 只均有狂犬病灭活疫苗的注射历史, 另外5 只未曾 注 射 过 狂 犬 病 疫 苗 作 为 对 照。 第 5 组 , 外观健康 , 行为、精神、食欲均正常; 经过4次 收稿日期: 2007201212 基金项目: 北京市狂犬病化防制技术研究与推广 (200424) ; 2005 年北京市优秀人才资助项目 通讯作者: 赵德明, E2m ail: zhaodm @cau. edu. cn EL ISA 试验反复检测唾液, 狂犬病病毒抗原阳性犬。 1. 2　被检疫苗　 (1)A 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫 苗, 批号为 020909, 有效期 1 年。 (2)B 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗, 批号为 030618, 有效期 1 年。 (3) “英特威”兽用狂犬病灭活疫苗, 批号为73127A , 有效 期4 年。 (4)北京市居民的家犬在2003- 2005 年间免 疫注射常用的“英特威”、“维克”等进口狂犬病灭活疫 苗。 (5)“维克”兽用狂犬病灭活疫苗, EXP: 10ö2005, BN : A H 2Z。 1. 3　快速荧光斑点抑制试验 (R FF IT ) 1. 3. 1　细胞、病毒和血清　BH K21öBSR 细胞, 已适 应该细胞系的 RV 攻击病毒 CV S 株 (A TCC V R 959) , 以及已知中和滴度 ( IU öm l) 的抗RV 血清 ( 批号 I21995210211) 由法国巴斯德研究所 H erry T siang 博士惠赠。 1. 3. 2　快速荧光斑点抑制试验　将固定量的CV S 病毒与系列稀释的待测血清 (包括已知滴度的参考血 清) 一起温育 (体外中和反应) , 然后加入敏感细胞 (BSR )悬液。经24 h 温育后, 细胞单层用丙酮固定, 用 荧光标记的抗N P 抗体染色, 以检测未被中和的病毒 的存在 (荧光灶)。与病毒对照组比较, 计算每种待测 血清使用固定量CV S 病毒的FFU öm l 减少50% 的稀 释度, 然后与已知滴度的参考血清比较, 计算每种待 测血清的中和抗体滴度。 1. 4　小鼠中和试验 (M N T ) 　用变量的被测血清在 体外中和恒量狂犬病病毒 [ 50LD 50 (50% 致死量) ö 0. 03 m l攻毒标准株CV S ], 37℃作用90 m in。将每一 个稀释度的病毒- 血清混合液脑内接种5 只3 周龄小 鼠, 0. 03 m lö只。接种后观察到第21 天, 记录死亡率, 接种后4 天内死亡的为非特异性死亡。血清滴度的计 算按血清 - 病毒混合液使 50% 的小鼠 (不中和时 100% 致死)获保护的血清最高稀释度, 与国际标准血 清相比较, 以国际单位 ( IU öm l)表示。 1. 5　狂犬病病毒抗原诊断试验 (EL ISA ) 　EL ISA 试剂盒为武汉生物制品研究所研制, 包括: 已包被的 酶标可拆板条、阳性病毒对照 (冻干, 已灭活)、样品 稀释液、酶结合物、洗涤液、底物A、底物B、终止液、牛 05 中国兽医杂志 2007 年 (第43 卷)第4 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Ch inese Journal of V eterinary M edicine　　 白 (试验步骤详见使用说明)。 1. 6　病毒RNA 的提取　参照G IBCO öBRL 公司的 TR Izo l RNA 提取试剂使用说明书进行。取0. 1 g 阳 性脑组织, 加入 1 000 Λl TR Izo l 试剂, 充分研磨后 - 70℃过夜。取出后加氯仿 200 Λl, 混匀静置 5 m in, 4℃15 000 röm in 离心5 m in。取上清, 加等体积的异 丙醇, 于- 20℃放置10 m in, 4℃15 000 röm in 离心10 m in, 弃上清, 加 80% 乙醇 1 000 Λl, 4℃15 000 röm in 离心10 m in, 弃上清, 用 20 Λl 无RNA 酶的去离子水 溶解, - 70℃保存备用。 1. 7　R T 2PCR 及其产物的纯化和回收　用RHN 1 引 物反转录N 基因片段的cDNA , 用两对引物扩增全N 基 因片段。引物由大连宝生物技术有限公司合成。 使用RHN 1 引物及AM V 逆转录酶于 42℃ 90 m in 逆转录合成cDNA。用T aq 酶与RHN 1 与N 8 为 外引物及N 7 与RHN 3 为内引物扩增N 基因片段。 PCR 的反应条件: 94℃变性 5 m in, 然后进入循环 94℃、1 m in, 37℃、1 m in, 72℃、3 m in, 扩增 10 个循 环, 然后是 94℃、1 m in, 52℃、1 m in, 72℃、3 m in, 20 个循环。第二次PCR 的反应条件是: 94℃变性5 m in, 然后进入循环 94℃、1 m in, 52℃、1 m in, 72℃、1. 5 m in, 共扩增20 个循环。 2　结果 2. 1　A 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫效果监测 结果　见表1。 　　表1 表明,A 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗首免6 个月后, 免疫达标率28. 57% , 达保护标准犬的平均血 清抗体滴度 1. 36±0. 96 ( IU öm l) , 8 个月免疫达标率 5. 71% , 达保护标准犬的平均血清抗体滴度3. 25±2. 47 ( IU öm l)。间隔6 个月第2 次免疫, 2 免2 个月后, 免 疫达标率 81. 82% , 达保护标准犬的平均血清抗体滴 度2. 65±2. 29 ( IU öm l)。 2. 2　B 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫效果监测 结果　见表2。 表 1　A 疫苗免疫效果监测 检测时间 1 次免疫后 首免6 个月后 首免8 个月后 2 免2 个月后 (免疫间隔6 个月) 血清抗体达标率 (% ) 28. 57 5. 71 81. 82 免疫达标犬平均血清抗体滴度 ( IU öm l) 1. 36±0. 96 3. 25±2. 47 2. 65±2. 29 表 2　B 疫苗免疫效果监测 检测时间 1 免后3 周 2 免后3 周 3 免后3 周 3 免后2 个月 3 免后7 个月 血清抗体达标率 (% ) 46. 43 71. 43 43. 75 100 25 免疫达标犬平均血清抗体滴度±sd ( IU öM l) 4. 49±4. 55 3. 025±2. 01 1. 04±0. 65 2. 375±2. 01 3. 73±2. 48 　　表2 表明,B 厂生产的兽用狂犬病 (ERA 株)活疫 苗免疫接种犬, 1 免3 周后, 免疫达标率为46. 43% , 达 标犬平均血清抗体滴度为4. 49±4. 55 ( IU öm l) ; 2 免 3 周后, 免疫达标率为71. 43% , 达标犬平均血清抗体 滴度为3. 025±2. 01 ( IU öm l) ; 3 免3 周后, 免疫达标 率为43. 75% , 达标犬平均血清抗体滴度为 1. 04±0. 65 ( IU öm l) , 3 免 2 个月后, 免疫达标率为 100% , 获 保护犬平均血清抗体滴度为2. 375±2. 01 ( IU öm l) , 3 免7 个月后, 免疫达标率为25% , 达标犬平均血清抗 体滴度为3. 73±2. 48 ( IU öm l)。连续3 次免疫后的血 清抗体滴度仍然不理想, 个体差异不显著。 2. 3　C 兽用狂犬病灭活疫苗免疫效果监测结果　见 表3。 表 3　C 疫苗免疫效果监测 检测时间 注射疫苗前 注射疫苗21 天后 注射疫苗 6 个月后 血清抗体达标率 (% ) 0 95. 24 57. 14 免疫犬平均血清抗体 滴度±sd ( IU öm l) 0±0 8. 055±3. 72 1. 833±2. 53 　　表3 表明, C 兽用狂犬病灭活疫苗首次免疫注射 21 天后, 免疫达标率为 95. 24% , 平均血清抗体滴度 为8. 055±3. 72 ( IU ömL )。注射疫苗6 个月后, 免疫 达标率为57. 14% , 平均血清抗体滴度为1. 833±2. 53 ( IU ömL )。个体差异显著。 2. 4　北京市民家狗注射“英特威”、“维克”等狂犬病 灭活疫苗免疫效果 2. 4. 1　取样与最近1 次注射狂犬病灭活疫苗间隔时 间对血清抗体滴度的影响　见表4。 　　表4 表明, 取样与最近1 次疫苗注射间隔时间对 血清抗体滴度的影响呈负相关, 间隔时间越短, 血清 抗体滴度越高。3～ 9 次免疫后2～ 4 个月平均抗体滴 度39. 4 IU öm l, 至免疫后3 年平均抗体滴度下降至0. 7 IU öm l; 经过2 次免疫的家犬, 2 免后2～ 4 个月平均 血清抗体滴度为3. 7 IU öm l, 至免疫后3 年平均抗体滴 度下降至0. 42 IU öm l; 经过1 次免疫的家犬抗体保护 期不到9 个月。 2. 4. 2　狂犬病灭活疫苗免疫次数与血清抗体滴度的 关系　见表5。 表5 表明, 狂犬病灭活疫苗连续注射0～ 9 次的北 京市家犬, 平均血清抗体滴度 ( IU öm l) 分别为: 0、1. 75、2. 91、25. 06、8. 55、7. 03、5. 05、5. 2、6. 7。经过第3 次免疫的家犬, 平均血清抗体滴度明显高于其他次数 免疫的家犬, 经过 4、5、6、8、9 次连续免疫注射的家 犬, 平均血清抗体滴度趋于平稳。 2. 5　注射法国维克狂犬病灭活疫苗对外观健康犬唾 液中狂犬病病毒抗原阳性的影响　见表6。 15　　Ch inese Journal of V eterinary M edicine　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 中国兽医杂志 2007 年 (第43 卷)第4 期 表 4　取样与最近 1 次注射狂犬病灭活疫苗间隔时间对血清抗体滴度的影响 取样与疫苗注射间隔时间 (月) 免疫3～ 9 次平均血清抗体滴度 ( IU öm l) 免疫2 次平均血清抗体滴度( IU öm l) 免疫1 次平均血清抗体滴度( IU öm l) 2～ 4 39. 40 3. 70 3. 8 5～ 6 30. 50 3. 53 2. 45 7～ 8 8. 08 2. 97 2. 58 9～ 10 5. 80 2. 94 0 12 3. 70 2. 90 0 27 1. 80 0. 93 0 36 0. 70 0. 42 0 表 5　免疫次数与血清抗体浓度的关系 免疫次数 0 1 2 3 4 5 6 8 9 平均血清抗体滴度 ( IU öm l) 0 1. 75 2. 91 25. 06 8. 55 7. 03 5. 05 5. 2 6. 7 表 6　疫苗对健康犬唾液中狂犬病病毒抗原阳性的影响 编号 血清抗体滴度 ( IU öm l)和唾液中狂犬病病毒抗原 (OD 值) 注射疫苗前1 天 抗体滴度 抗原 注射疫苗前15 天 抗体滴度 抗原 注射疫苗前30 天 抗体滴度 抗原 注射疫苗后111 天 抗原 1 0. 9 0. 66 未测 0. 44 9. 8 0. 419 唾液和脑均阴性 2 2. 3 ≥1 未测 阴性 9. 4 阴性 3 1. 8 ≥1 未测 0. 71 13. 8 阴性 唾液和脑均阴性 4 1. 7 ≥0. 5 未测 0. 42 2. 7 阴性 5 1. 6 ≥0. 5 未测 阴性 5. 0 阴性 6 0 ≥0. 5 未测 阴性 5. 6 阴性 7 1. 6 ≥0. 5 未测 阴性 4. 9 阴性 8 1. 8 ≥0. 5 未测 阴性 5. 8 阴性 9 1. 6 ≥0. 5 未测 阴性 1. 1 阴性 10 1. 8 ≥0. 5 未测 阴性 4. 9 阴性 平均数 1. 51 6. 3 　　表6 表明, 对10 只外观健康唾液中狂犬病病毒抗 原阳性犬注射法国维克狂犬病灭活疫苗后的检测结 果, 注射疫苗15 天后阳性犬减少7 只, 注射疫苗30 天 后阳性犬减少9 只。注射疫苗后第111 天, 未检测出狂 犬病病毒阳性犬。 3　讨论与 3. 1　兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫犬血清抗体 滴度偏低　6 个月至5 岁的成年健康犬对疫苗的免疫 应 答 能 力 是 比 较 好 的 适 龄 犬 ( T rom B ioBest, Pen t lands Science Park, Edinbu rgh) , 本项试验检测 发现B 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗首免 21 天后, 仅 有46. 43% 的犬血清抗体滴度达保护标准, 免疫犬平 均血清抗体滴度为 2. 18 IU öm l; 然而C 狂犬病灭活 疫苗首免 21 天后血清抗体滴度达标率 95. 24% , 平 均血清抗体滴度为 8. 06±3. 72 IU öm l, 两种狂犬病 疫苗首免后 21 天, 血清抗体滴度达标率相差 48. 81 个百分点, 平均血清抗体滴度相差5. 88 IU öm l。A 兽 用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗首免 6 个月后, 仅有 28. 57% 的犬血清抗体滴度达标, 平均血清抗体滴度为 0. 54 IU öm l, 而C 狂犬病灭活疫苗首免 6 个月后, 有 57. 14% 的犬血清抗体滴度达标, 平均血清抗体滴度 为1. 83 IU öm l, 两种狂犬病疫苗首免6 个月后, 血清 抗体滴度达标率相差 28. 57 个百分点, 平均血清抗 体滴度相差1. 29 IU öm l。由此可见: 两种疫苗在免疫 注射后所产生的血清抗体滴度相差悬殊, 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫犬血清抗体滴度偏低。据对两种疫苗的抗原效价检测结果分析, C 进口狂犬病灭活疫苗抗原效价大于兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗抗原效价1 IU öm l。两种疫苗免疫效果的显著差别与疫苗本身的免疫源性有关, 可能还与疫苗的含量以及疫苗的佐剂有关。3. 2　兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫犬血清抗体滴度持久性差　兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫犬, 连续免疫3 次 (每次间隔1 个月) , 3 免2 个月后血清抗体滴度达标率 100% , 7 个月后血清抗体滴度达标率下降至25% , 而进口狂犬病灭活疫苗连续免疫 3次 (免疫间隔1 年) , 3 免后1～ 3 年血清抗体滴度达标率100%。相对而言, 兽用狂犬病 (ERA 株)活疫苗免疫犬血清抗体滴度下降快, 持久力差。3. 3　狂犬病活疫苗免疫犬唾液中狂犬病病毒抗原阳性率高　抽检B 兽用狂犬病 (ERA 株) 活疫苗免疫接种后8～ 11 个月的犬群, 监测20 只, 其中8 只唾液中狂犬病病毒抗原呈阳性, 带毒率 40%。抽检 20只免疫注射C 狂犬病灭活疫苗 1 次后 9～ 11 个月的犬群, 其中 2 只有狂犬病活疫苗接种史的犬唾液中检测到狂犬病病毒抗原阳性。另外, 对检出的 10 只阳性犬注射狂犬病灭活疫苗, 检测发现: 注射疫苗15天后阳性犬减少7 只, 注射疫苗30 天后阳性犬减少9 25 中国兽医杂志 2007 年 (第43 卷)第4 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Ch inese Journal of V eterinary M edicine　　 比格犬埃立克体病实验模型研究及治疗试验 顾为望1, 刘世忠1, 2, 马玉海2, 袁　进1, 张建明1, 李金泽1, 唐博恒2 (1. 南方医科大学实验动物中心, 广东 广州 510515; 2. 广州军区疾病预防控制中心, 广东 广州 510507; ) 中图分类号: S858. 91　　　文献标识码: B　　　文章编号: 052926005 (2007) 0420053201 　　犬埃立克体病是由严格细胞内 (白细胞或血小 板)寄生的革兰氏阴性球杆菌- 埃立克体引起的犬的 急 (慢) 性传染病, 也是一种人兽共患自然疫源性疾 病。由于埃立克体主要对白细胞和脾脏等造成损伤, 病犬表现为免疫力低下、极度消瘦, 犬埃立克体病也 被称为犬的艾滋病。犬埃立克体病是全球分布性疾 病, 蜱为其主要传播媒介[1 ]。到目前为止, 已从 收稿日期: 2006208218 通讯作者: 唐博恒 自然感染病犬体内分离到4 种埃立克体, 即犬埃立克 体、尤因埃立克体、血小板埃立克体和立氏埃立克体 。犬埃立克体和血小板埃立克体已被证实是引起我国 犬埃立克体病的病原体[2, 3 ]。 　　本实验用犬埃立克体病病犬白细胞静脉注射比 格犬, 建立了犬埃立克体病的实验模型, 对其临床症 状、病原学、血液生理生化指标变化、病理学变化进行 了观察, 并应用盐酸强力霉素进行疗效试验, 以治疗 后临床症状和血液生理生化指标的恢复及单核细胞 内的病原体消失为依据, 判断治疗效果。 只, 注射疫苗111 天后未检出阳性犬。经过对氨基酸 变异分析发现, 目前我国狂犬病流行株, 一部分与兽 用ERA 活疫苗同源性较高 (99. 1%～ 99. 6% ) , 另一 个群与CTN 株狂犬病疫苗同源性较高。出现如此的 监测结果令人担忧, 我国长期给动物接种狂犬病活疫 苗, 非但不出现控制狂犬病发生的局面, 反而狂犬病 发生持续上升, 犬类狂犬病带毒率出现 2. 3%～ 30% 的情况, 不能说与使用狂犬病活疫苗无关。世界卫生 组织反对家养动物使用狂犬病减毒活疫苗, 而且在狂 犬病已控制多年的法国、英国等国家已禁止家养动物 接种狂犬病减毒活疫苗。 3. 4　伤口及时处理与免疫注射狂犬病灭活疫苗是预 防和控制狂犬病发生的关键　在检测中发现, 经过免 疫注射狂犬病疫苗的犬仍有携带狂犬病病毒的可能 性, 而且有注射狂犬病活疫苗史的犬唾液中带毒率偏 高 (40% ) , 经过免疫注射狂犬病灭活疫苗后, 随着血 清抗体滴度的升高唾液中带毒率下降, 当血清抗体滴 度达到一定的高度后, 可以通过血脑屏障中和狂犬病 病毒。但是, 当血清抗体下降到一定程度时, 唾液中狂 犬病病毒阳性率又有升高的可能性。狂犬病发病机理 是: 被动物咬伤而感染病毒后, 病毒通过肌肉周围神 经末梢进入神经系统, 在神经系统中向心性移动, 进 入大脑细胞引起全脑炎, 在唾液中排出病毒。因而, 对 伤口及时彻底清理消毒, 对受威胁的人和动物紧急注 射狂犬病灭活疫苗和对家养动物定期免疫注射狂犬 病灭活疫苗, 逐步淘汰狂犬病病毒阳性犬, 是预防狂 犬病发生的关键。 根据上述对狂犬病灭活疫苗免疫家犬的检测结 果和国外的有关研究报告以及英国爱丁堡科学院 T rom B ioBest 提供的检测数据, 推荐家犬 (猫类可以 参照本程序免疫)狂犬病灭活疫苗免疫程序: (1)新生 犬 (猫) 3 个月龄第1 次免疫, 间隔3～ 4 个月后2 免, 1 年后必须加强免疫1 次, 再以后几年免疫1 次根据当 地主管兽医部门管理 (注意参考疫苗产品规定的 几年用疫苗)。(2)大于12 岁的老年犬 (猫) , 未曾注射 过狂犬病疫苗, 首次疫苗注射后, 间隔 3～ 4 个月后 2 免, 以后每年免疫 1 次。 (3) 6 个月龄至 12 岁的犬 ( 猫) , 初次注射狂犬病疫苗 1 年后, 必须加强免疫 1 次, 再以后几年免疫1 次根据当地主管兽医部门管理 规定 (注意参考疫苗产品规定的几年用疫苗)。 (4)所 有的犬 (猫)都必须按照要求注射狂犬病疫苗。如果以 前注射过狂犬病疫苗, 现在已经过期了, 应当尽快补 免一次。补完后该动物可以认为是已经免疫过的, 然 后按照正常程序免疫。 3. 5　实现兽用狂犬病灭活疫苗的国产化和家养动物 定期注射狂犬病灭活疫苗是我国控制与消灭狂犬病 的重要途径。 目前国内注册的“维克”、“英特英”等几家进口狂 犬病灭活疫苗免疫犬血清抗体滴度达标率高、保护期 长、安全。但是, 我国目前没有兽用狂犬病灭活疫苗的 生产, 所有兽用狂犬病灭活疫苗完全依赖进口, 价格 高、费用大, 农村和经济落后地区难以推广使用, 不利 于动物狂犬病的预防与控制。如果我国使用狂犬病灭 活疫苗全靠从外国引进, 将是我国一项长期的、巨大的 经济、贸易损失。为此, 我国的科研单位和疫苗生产企 业应尽快研发安全、高效的兽用狂犬病灭活疫苗, 尽早 实现兽用狂犬病灭活疫苗的国产化, 降低疫苗成本, 为 我国狂犬病的消灭与控制做贡献。 35　　Ch inese Journal of V eterinary M edicine　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 中国兽医杂志 2007 年 (第43 卷)第4 期