GB4789152010霉菌酵母菌检测
中华人民共和国国家标准
GB 4789.15—2010
食品安全国家标准
食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
National food safety standard
Food microbiological examination: Enumeration of moulds and yeasts
中华人民共和国卫生部 发布
2010-03-26 发布 2010-06-01 实施
GB 4789.15—2010
I
前 言
本标准自实施之日起代替 GB/...
中华人民共和国国家
GB 4789.15—2010
食品安全国家标准
食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
National food safety standard
Food microbiological examination: Enumeration of moulds and yeasts
中华人民共和国卫生部 发布
2010-03-26 发布 2010-06-01 实施
GB 4789.15—2010
I
前 言
本标准自实施之日起代替 GB/T 4789.15-2003《食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母计数》。
本标准与 GB/T 4789.15-2003 相比,主要修改如下:
——修改了范围;
——修改了检验程序和操作步骤;
——修改了培养基和试剂;
——修改了设备和材料;
——修改了附录。
本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B 为资料性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为:
——GB 4789.15-1984、GB 4789.15-1994、GB/T 4789.15-2003。
GB 4789.15—2010
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食品安全国家标准
食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
1 范围
本标准规定了食品中霉菌和酵母菌(moulds and yeasts)的计数方法。
本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1 冰箱:2 ℃~5 ℃。
2.2 恒温培养箱: 28 ℃±1 ℃。
2.3 均质器。
2.4 恒温振荡器。
2.5 显微镜:10×~100×。
2.6 电子天平:感量 0.1 g。
2.7 无菌锥形瓶:容量 500 mL、250 mL。
2.8 无菌广口瓶:500 mL。
2.9 无菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)。
2.10 无菌平皿:直径 90 mm。
2.11 无菌试管: 10 mm×75 mm。
2.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
3 培养基和试剂
3.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基:见附录 A 中 A.1。
3.2 孟加拉红培养基:见附录 A 中 A.2。
4 检验程序
霉菌和酵母计数的检验程序见图1。
GB 4789.15—2010
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图 1 霉菌和酵母计数的检验程序
5 操作步骤
5.1 样品的稀释
5.1.1 固体和半固体样品:称取 25 g 样品至盛有 225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇,即为 1:10
稀释液。或放入盛有 225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打 2min,制成 1:10 的样品匀
液。
5.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适
当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。
5.1.3 取 1 mL 1:10 稀释液注入含有 9 mL 无菌水的试管中, 另换一支 1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为
1:100 稀释液。
5.1.4 按 5.1.3 操作程序,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1 次 1 mL 无菌吸管。
5.1.5 根据对样品污染状况的估计,选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),
在进行 10 倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取 1 mL 样品匀液于 2 个无菌平皿内。同时分别取 1 mL
样品稀释液加入 2 个无菌平皿作空白对照。
5.1.6 及时将 15 mL~20 mL 冷却至 46 ℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于
46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
5.2 培养
检 样
25g(mL)样品+ 225mL 无菌蒸馏水,均质
10 倍系列稀释
选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液,各取 1mL 分别加入无菌培养皿内
每皿中加入 15mL~20mL 马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基
菌落计数
报 告
28℃±1℃ 5d
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待琼脂凝固后,将平板倒置,28℃±1℃培养 5d,观察并记录。
5.3 菌落计数
肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colony
forming units,CFU)
示。
选取菌落数在 10 CFU~150 CFU 的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆
盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。
6 结果与报告
6.1 计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数计算。
6.1.2 若所有平板上菌落数均大于 150 CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多
不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
6.1.3 若所有平板上菌落数均小于 10 CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
6.1.4 若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算;如为原液,则以小于 1
计数。
6.2 报告
6.2.1 菌落数在 100 以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。
6.2.2 菌落数大于或等于 100 时,前 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前 2 位数字,后面用
0 代替位数来表示结果;也可用 10 的指数形式来表示,此时也按“四舍五入”原则修约,采用两位有效
数字。
6.2.3 称重取样以 CFU/g 为单位报告,体积取样以 CFU/mL 为单位报告,报告或分别报告霉菌和/或
酵母数。
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附录 A
(规范性附录)
培养基和试剂
A.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂
A.1.1 成分
马铃薯(去皮切块) 300 g
葡萄糖 20.0 g
琼脂 20.0 g
氯霉素 0.1 g
蒸馏水 1000 mL
A.1.2 制法
将马铃薯去皮切块,加 1000mL 蒸馏水,煮沸 10 min~20 min。用纱布过滤,补加蒸馏水至 1000 mL。
加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装后,121 ℃灭菌 20 min。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入
培养基中
A.2 孟加拉红培养基
A.2.1 成分
蛋白胨 5.0 g
葡萄糖 10.0 g
磷酸二氢钾 1.0 g
硫酸镁(无水) 0.5 g
琼脂 20.0 g
孟加拉红 0.033 g
氯霉素 0.1 g
蒸馏水 1000 mL
A.2.2 制法
上述各成分加入蒸馏水中,加热溶化,补足蒸馏水至 1000 mL,分装后,121℃灭菌 20 min。倾注
平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。
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附录 B
(资料性附录)
霉菌直接镜检计数法
常用的为郝氏霉菌计测法,本方法适用于番茄酱罐头。
B.1 设备和材料
B.1.1 折光仪。
B.1.2 显微镜。
B.1.3 郝氏计测玻片:具有标准计测室的特制玻片。
B.1.4 盖玻片。
B.1.5 测微器:具标准刻度的玻片。
B.2 操作步骤
B.2.1 检样的制备:取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为 1.3447~1.3460(即浓度为 7.9%~8.8%),
备用。
B.2.2 显微镜标准视野的校正:将显微镜按放大率 90~125 倍调节标准视野,使其直径为 1.382 mm。
B.2.3 涂片:洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察。
B.2.4 观测:将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样观察 50 个视野,同
一检样应由两人进行观察。
B.2.5 结果与计算:在标准视野下,发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野(1.382mm)的1/6或三根菌
丝总长度超过标准视野的1/6(即测微器的一格)时即为阳性(+),否则为阴性(-),按100个视野计,
其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数,即为霉菌的视野百分数。
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