HLPC-ELSD在抗生素药品检验中的应用

‘ 二 · 。 综述 中国药品 。。 年第 卷第 期 总 一 在抗生素药品检验中的应用 李 汉 汕头 市药品检验所 人 , , “ , 、一 , 。 , 一 、 一 , , , , , , “ 蒸发光散射检测器 一 , 是一种通用 型检测 器 , 最早 由 澳大利亚 的 实验室研制成功 , 并在 世纪 年代初转化为商品 年代后期在 国外 已广泛用于与 、 超临界流体色谱 及 质 谱 联用 。 世纪 年代后 , 随着 的不 断改进完善及其操作性能的提高 , 可 以填补紫外和 差 示 折 光 检 测 器 的 不 足 , 美 国 和 法 国 公 司正式作为商品生产 , 使 作为一 种新型的通用检测器开始广泛应用于医药 、化工 、 食 品等行业 , 主要用 于无紫外 吸收的类醋 、 面 活性 剂 、糖 、氨基酸 、 季钱盐 、 高聚物以及 街体化合物等的 检测 。 用 检测 , 流动相在漂移管便气化蒸发 , 不影响样品检测 , 其 的响应与被测物的质量 成正 比 , 且不依赖于被测物的光学特性及官能团 , 理 论上可用于挥发性低于流动相 的任何组分的检测 , 而且灵敏度高 , 检 出限可达 , 不受溶剂成分及 温度波动的影响 , 亦可用于梯度洗脱 , 因此 , 年 一 作为法定检测器被列人美 国联邦法规 , 用于 农业部植物脂类分析及海关总署食品油分析等川 。 随着蒸发光散射检测技术的发展 , 在药物检测 方面的应用越来越多 。 年邓海根等川首次在我 国介绍 了该仪器的基本 结构 、 工作原理及 优点等 年冯埃生等川考察 了一些操作条件对 』 检测器检测性能 的影响 , 有助于该项技术在 我 国的推广应用 。 自 年瑞典 大学 的 ‘ 等报道 了“ 检测器在药品分 析中的应用 ”后 , 相继报道有 仁 」的 “ 在病人用药监控水平对 四种抗癫痛药的同时分离 和定 量研 究 ” , 等 的 “ 应 用 矛 检测真菌毒素 、 、 及 ”和 仁, 」 等的“ 用 矛 一 检测硫酸庆大霉素及相关组 成 ” 。 近几年 , 在抗生素药品检验上 , 一 联 用技术 , 在解决抗生素原料及其制剂多组分 , 多杂质 的同时检测问题上的报导快速上升 。 现将近 年来 一 技术在抗生素检验方面的应用情况作 一概述 。 抗生素类药物在治疗感染性疾病方面发挥着极 其重要的作用 , 其质量的优劣直接关系着该类药品 在临床上使用的安全和有效 。 目前临床应用的抗生 素主要来 自生物合成 发酵 , 少数利用化学全合成 和半合成制得 , 存在多组分及相关杂质多的问 题 , 故此 , 抗生素药品中有效成分的含量及相关杂质 的控 制 , 成 为该 类 药 品质 量 控 制 的瓶 颈 。 目前 , 碑 一 , 联用技术为解决这一难题提供了一个 有效的方法 。 一 、应用实例 氨基糖昔类抗生素 氨基糖昔类抗生素是 由微生物产生或经半合成 制取的一类由氨基糖 或中性糖 与氨基环醇以昔键 相结合的易溶于水的碱性抗生素 , 主要有硫酸庆大 霉素 、 丁胺卡那霉素 、 阿米卡星 、 妥布霉素 、 西索米 星 、 奈替米星 、依替米星及一类新药威替米星等 。 该 类抗生素多具有耳毒性及肾毒性 , 其有效成分为多 组分共同起作用 , 各组分无特征紫外吸收 , 用通用的 尤 法无法有效地进行检测 , 而用 一 另 联用 , 有效地解决了这一问题 。 杨亚莉等阁就最近 国内采用 尤 蒸发 光 散射检 测法 , 一 对单组 分 的小诺霉 素 、 阿米卡星 、 奈替米星 、依替米星和多组分的庆大 霉素进行 了质量研究 , 发现个别生产厂家的硫酸阿 米卡星注射液中含有一个含量较多的未知杂质 , 经 尤 生物显影法证明其有生物活性 , 此活性物质的 结构尚待进一步确证 在用 刀 另 法测定硫 酸小诺霉素 注射液时发现有些样品含有庆大 霉素 杂质 在分析庆大霉素 组分时发现有的 , 现药 铭标准 年第 卷第 期 总 样品在 与 峰之间有小诺霉素 杂质峰 。 由此看出 , 蒸发光散射检测器的应用 已为全面分析 无紫外吸收的氨基糖昔类抗生素的质量提供了一种 新的手段 。 王 明娟等川考察 了阿米卡星 、 西索米星 、 奈替米星 、 依替米星 、 威替米星五种氨基糖昔类抗生 素 在 检 测 器 中的响应 因子 。 仪器 八 另 天津蓝坷全 自动空气净化器 , 大连江 申 工作站 。 色谱条件 色谱柱 , , 拼 流动相 二 ’三 氟醋酸一 甲醇 , 流速 卜 一 ‘ 。 检测条件 漂移 管温度 , 气体流速 碑 · 一 ’。 只需 分 钟 即可将所选取的 种氨基糖 昔类抗生素完全分 离 。 且经实验证明 , 这 种氨基糖昔类抗生素在该条 件下 的响应因子基本一致 , 提示采用 , 一 另 联用 , 对该类药的杂质检查或纯度分析 , 多组分药物 分析及未知基准品的建立及含量测定方面应用的可 能性 。 王 明娟等 , ‘ 建立 了小诺霉素及其有关物 质 的分析方 法 。 仪器 型 液相 色谱仪 江 申工作站 。 色谱条件 , , 拌 流 动相 · ’三氟醋酸 一 甲醇 流速 · 一 ’ , 检 测 条 件 漂 移 管 温 度 , 气 体 流 速 』 · ’。 小诺霉素与庆大霉素复合组分 包括小诺霉 素产品中的主要杂质 在上述系统中能完全分 离 分离度均大于 , 有效地控制 了国产小诺霉 素生产过程 中中间体 的质量及庆大霉素 组分的 控制 。 灵敏度 , 重现性 , 准确度均能很好地满足质量 控制 , 是一种较理想的小诺霉素有关物质分析 方法 。 王明娟等 ” 」建立 了一种理想的庆大霉素 组分分析方法 。 仪器 型液相色谱仪 廿 江 申工作站 。 色谱条件 , 又 , , 拼 流动相 · 矛 一 ‘三氟醋酸一甲醇 , 流速 · 一 ’ , 检测 条件 漂移 管温度 , 气 体流 速 矛 · ’。 在本法中 , 庆大霉素不同组分在 检测 器中的响应因子基本一致 , 且分离效果好 , 庆大霉素 中各组分 , , , , 及其它一些未知的 杂质间的分离度均大于 , 减少 了衍生化反应带 来的误差 , 有效地克服现行药典方法的不足 , 保证庆 大霉素各组分的毒性和活性差异对 临床疗效的影 响 , 保证了药品质量 。 , , · 等 ‘ , 报道 了用 一 , 建 立一种分离和定量硫酸庆大霉素样品中存在的各组 分 , , , , 及 的快速且简单的方法 。 色谱条件 高纯度的 柱 , , 流动相 三氟醋酸一 甲醇 , 流 速 卜 一 ’ , 同时考察了气流和气压 , 检测器 的检测响应 因子 , 漂移管的温度 , 并用 的方法 学对该方法进行验证 。 于华生 」用 廿 一 法分析了由西 索米星半合成制备得来的氨基糖昔类抗生素奈替米 星 。 仪器 高效液相色谱仪 , 蒸发光散射检测器 。 色谱条件 一 , 拌 柱 , 以 · 一 ’三氟醋酸 一 甲醇 为流动相 , 流速 · 一 ’ 蒸发光散射检测器 漂移管温度 , 载 气流速为 , · 一‘ 。 目前各国药典中该药均用 微生物检定法测定含量 。 应用蒸发光散射检测器检 测 , 样品不需要处理及衍生化 , 测定结果与微生物检 定法基本一致 , 可以有效控制误差来源 , 提高分析精 度 。 王 明娟等田 」 一 法测定异帕米 星含量 。 在没有异帕米星对照品的情况下 , 本文利用 随行标准曲线法 , 以结构相似含量已知的阿米卡星 为对照 , 采用蒸发光散射检测器测定首批 国家异帕 米星标准品的含量 。 仪器 双泵高效液相色 谱系统 , 型 检测器 , 工作站 色谱条件 色谱柱 , 拌 , 流动相 五氟丙酸水溶液一 甲醇 , , 流速 · 一 ’ 漂移管温度 , 载气流速 · 才 · 一 ‘ 。 测定的结果与“ 日 抗基 ”中收载的微生物检定法的测定结果基本一致 。 不仅样品预处理简单 , 无须衍生就可以用其测定异 帕米星的含量 , 且还进一步验证了不同氨基糖昔类 抗生素在 检测器上 的响应 因子无显著性差 别这一特性 。使得采用结构相似 、 含量已知的另一种 物质为对照 , 测定新物质的含量成为可能 。为氨基糖 昔类抗生素的含量测定提供了新的途径 。 吴燕等 〕建立了用 一 测定盐 酸大观霉素含量的方法 。 盐酸大观霉素作为临床上 重要的抗菌药物 , 对其质量的控制直接关系到临床 的用药安全 。盐酸大观霉素易溶于水 , 在水中以药物 阳离子的形式存在 , 极性强 , 在通常的反相色谱系统 柱上保留差 , 而且盐酸大观霉素仅在紫外区末 端 附近有吸收 , 使用通常的紫外检测器测定 , 其含量较困难 , 《中国药典 》 年版采用微生物效 价法 , 《美 国药 典 版 、《欧 洲 药典 》 年版均采用衍生化气相色谱法 。 本文 , 引人蒸 发光散射检测器作为检测手段 , 同时在流动相 中添 加离子对试剂 , 建立了盐酸大观霉素含量的 法 。 仪器 岛津 一 高效液相色谱系统 型蒸发光 散射检 测 器 。 色谱条件 色谱 柱 柱 , 拼 流动相 · 子 一 ’三氟醋酸水溶液一 乙睛 检测器条件 漂移管温度 ‘ , 雾化气体 空气 压 力 为 , 灵 敏 度 流 速 · 一 ’。 测定的盐酸大观霉素样品含量 , 经与微生物 效价法 比较 , 两者相关性较好 , 方法 间无显著性 差 异 , 理论上 法可替代微生物效价法 , 用于样品的含量测定 , 克服了微生物法试验周期长 、 结果波动性大的不足 , 可有效地监控产品质量 。 哇诺酮类抗生素 哇诺酮类抗生素是一类合成的抗菌药 , 其发展 速度远远超过 了其它抗生素类药物 , 在该类新药的 研制过 程中通常使用 非水滴定法 和 一 法 测定含量 , 但非水滴定法专属性不强 , 且易受温度等 环境 因素的影响 , 而 廿 一 法虽然有较强的专 属性 , 但紫外检测器为浓度型检测器在无对照 品的 情况下 , 通常无法准确确定物质的含量 。 而 的应用有望解决该类药品工作对照品的制备 及含量测定方法的确立 。 洪建文等口 」报道 了哇诺酮类抗生素在蒸发光 散射检测器中响应 因子 的一致性考察 。 仪器 、 液相色谱仪 , 型 检测 器 , 天津蓝坷全 自动空气净化 器 , 一 色谱工作站 。 色谱条件 一 。 一 柱 · , 拌 , 流动相 · 三乙胺水溶 液 三氟醋酸调至 工乙睛 , , 流 速 · 一 ‘ 。 检测器条件 漂移管温度 , 载气流速 · 一 ’。 用 一 法测定依 诺沙星 , 左氧氟沙星 , 环丙沙星 , 洛美沙星和加替沙 星五种哇诺酮类抗生素 , 其在 中的响应 因子 一致 , 可尝试用该法建立该类药物的新药基准品 , 为 新的喳诺酮类抗生素纯度的分析提供方法学基础 。 其它抗生素 刘英田 」建立高效液相 色谱 一蒸发 光散射 检侧器分析雷帕霉素 , 异构体及有关物质的方法 。 由 于雷帕霉素在溶液中存在互变异构现象 , 使得分离 、 分析变得较为复杂 。 一 法可实现雷帕霉素 , 异构 中国药品标准 。。 年第 卷第 期 ‘总 体与有关物质的分离检测 。 仪器 高效液相色谱仪 色 谱 系 统 色 谱 仪 紫外检测器 色谱工作站 蒸发光散射检测器 江申色谱工作站 。 蒸发光 散射检测器与紫外检测器为串联使用 。 色谱柱 一 , 拜 流动相 乙 睛 水 流速 · 一 ’ 柱温 该流动 相同时适用于蒸发光散射检测器 , 紫外检测波长为 蒸发光散射检 测器 的飘移管温度为 ‘ 气体流速为 · 一 ‘ 。 本文建立的反相高效液 相色谱法分析雷帕霉素及其杂质 , 其流动相不仅能 适应普通的 检测 , 而且可直接用于蒸发光散射 检测 , 对进行药品的质量控制具有重要的意义 。 乐健等〔, ”」用 一蒸发光散射检测器检 测注射用头抱曲松钠 中钠离子的含量 。 仪器 沙 一 泵 , 柱 温 箱 。 检测器 法国 型蒸发光散射检测器 , 记录仪 一 。 色谱条件 又 , 拌 大连依利特公司 装填 , 柱温 流动相 乙精 一 · 一 ’醋酸 按 溶 液 用 冰醋酸 调 至 , , , 流 速 · 一 ’。 检测器条件 漂移管温度 ‘ , 灵敏度 , 雾化气体压力 。 针对金属 离子没有紫外吸收的特点 , 采用该法对注射用粉针 剂中钠离子的含量进行测定 , 简便准确 。 二 、 小结 , 蒸发光散射检测器在我 国经过近 十年的应 用 , 在药物质量检验方面发挥了越来越重要的作用 。 在抗生素质量分析中 , 泌 的应用能够有效地解 决药品检测 中 部分指标成分或有效成分仅有紫 外末端吸收或无紫外吸收 , 用 刃 法进行检测时 必需进行衍生化 无相应 的标准品和化合物结构 参数的情况下检测未知化合物 与 一 联用 能够适用于梯度洗脱的问题 , 并且 能够通过考察 一类抗生素在 , 一 检测器上 的响应因子 的一致性 , 利用其响应值与被测物的官能团和光学 性质无关的特点 , 建立一类药物的含量测定方法 利用随行标准曲线法 , 以结构相似含量已知的同 类抗生素对照品为对照 , 测定并确定同类抗生素的 新的国家标准品的含量 对于同时存在异构体的 抗生素类药品 , 用 另 法直接对色谱峰归一化处 理 , 无需复杂的校正因子 , 能够将抗生素及其互变异 构体同时进行有效分离 可用于测定注射用粉针 剂中无紫外特征吸收的金属离子的 下转第 页 中国药品标准 年第 卷第 期 总 叫卜 内内 乙乙 应应 月月 目目 口口 弓弓 一一川卜一 ︵碑︶旧泊块 图 溶 出曲 线图 批号 批号 批号 批号 批号 表 溶 出度测 定结 果 鲤 样品 平均值 ‘︵曰一匕月性乃甘︺︸内了,﹄︸一吕甘口口︺﹄匕‘乙︸以︸︺尸卜︸甘月了︸︸只︺﹄匕︷︸‘连甘︸︵匕 吕 吕 , 盐酸溶液 为溶出介质 。在此溶出介质下试 验 , 片剂及胶囊剂的溶出均较快 , 经试验 , 片剂在盐 酸 溶 液 、 胶 囊剂 在 盐 酸 溶 液 , 中溶出曲线 良好 , 溶出速率适中 , 故确定此条 件为六甲蜜胺片及胶囊的溶出度测定方法 。 经方法 学验证 , 其方法可行 , 滤膜 、辅料和胶囊壳均无干扰 。 在对照品溶液的制备过程 中 , 由于六 甲蜜胺 在较低浓度的酸性条件下较难溶解 , 故可先用较高 浓度的盐酸溶液溶解后再用溶出介质稀释 , 经试验 , 盐酸溶液酸度的不同对测定结果无影响 。 滤膜的影响 取六甲蜜胺对照品溶液适量 , 经 拌 滤膜滤过 , 弃去初滤液 , 取续滤液测 定 , 滤过前后溶液吸收度基本一致 , 结果表明滤膜对 测定结果无影响 。 测定溶液的稳定性试验 取六 甲蜜胺对照 品溶液 、 片剂及胶囊剂的供试 品溶液 , 分别在放置 、 、 、 、 与 小时后测定吸收度 , 结果表明 , 所 测溶液均在 小时 内稳定 , 对照品溶液吸光度的 为 , 片剂及胶囊的供试品溶液吸光度的 分别为 和 。 参考文献 【 」中国药典 。。 版 二部 〔 」美国药典 版 ‘咬自任甘曰︸八﹄‘‘︸‘怪乙叹 四 、讨论 版 、 版 、 版及 欧洲药典 版等均未收载六 甲蜜胺片的溶出度测定方法 , 版收载 了六 甲蜜胺胶囊的溶出度方法 , 以 上接第 页 含量 , 为临床应用提供参考 。 由抗生素的定义及来源决定 了该类药物通 常具有多组分 , 多杂质 , 同类药物具有相似的基本构 架的特点 。 对于多组分的品种 , 不同的组分构成 , 其 临床疗效不同 。 杂质成分的存在及其含量 , 直接关系 到临床用药的安全性问题 , 如 件内酞胺类抗生素中 高聚物的存在 , 是临床中引起过敏性反应的原凶 。从 氨基糖昔类抗生素的一系列含量测定方法的建立中 可 以 发 现 , 另 检 测 器 有 很 高 的通 用 性 。 利用 廿 一 技术 , 考察一类抗生素药物响应 因子 的一致性情况 , 进而对检测条件各影响因素的比对 , 使一类抗生素在杂质分析 纯度分析 多组分确定 , 基准物质的确定及含量测定等多方面实现简单 , 快 速和有效的检验成为可能 。 对药品标准的科学准确 和临床用药安全有效提供科学有效的支持 。 在抗生 素药品检验上具有广阔的发展前景 。 参考文献 口 〕黄永掉 , 王 宁生 在天然药物分析中的应用 。 中药 新药与临床药理 , , 一 〔幻 邓海根 , 曹雨霖 , 高效液相色谱仪的通用型质量检测器一燕发光 散射检侧器 。 药物分析杂志 , , 仁 〕冯埃生 , 邹汉法 , 汪 海林等 , 影响高效液相色谱 挥发激光散射检 测器性能基本因素的考察 。 药物分析杂志 , , 习 , , · 「习 一 卯 一 〕 , , , , , 一 卜 姐 汤 卯 一 · 〕 , , , , 一 一 【 〕杨亚莉 , 金少鸿 , 抗生素质量分析研究的新进展 。 中国杭生素杂 志 , , 【刃 王明娟 , 胡昌勤 , 金少鸿 , 氮基糖昔类抗生家在燕发光散射检测 器中响应 因子的一致性考察 药学学报 , , 〔 」王明娟 , 胡昌勤 , 金少鸿 , 采用 一 法分析小诺霉家及 有关物质 。 药物分析杂志 , , 〔 」王明娟 , 胡昌勤 , 金少鸿 , 高效液相色谱一燕发光散射检侧法分 析庆大霉素 组分 药物分析杂志 , , 仁 」于华生 , 高效液相色谱一蒸发光散射法侧定奈替米星 。 海峡药 学 , , 【 」王 明娟 , 成双红 , 张斗胜等 , 一 法侧定异帕米星 。 中 国抗生素杂志 , , 〔 」吴燕 , 郭成明 , 张胜强 , 高效液相色谱一燕发光散射检侧法测定 盐酸大观霉素的含量 。 天津药学 , , 【 〕洪建文 , 胡昌勤 , 盛龙生 , 咬诺酮类抗生索在燕发光散射检测器 中响应因子的一致性考察 。 药学学报 , , 【 」刘英 , 高效液相色谱一燕发光散射检侧器分析雷帕霉素 河南 医药信息 , 【 」乐建 , 陈桂良 , 一燕发光散射器检浏注射用头抱曲松钠中 钠离子的含量 。 中国新药杂志 , ,