猪传染性胸膜肺炎病原分离鉴定及防治试验
边传周, 王老七
(郑州牧业
高等专科学校生物工程系, 河南 郑州 450011)
中图分类号: S858. 285. 1 文献标识码: B 文章编号: 052926005 (2005) 0220025201
2003 年 11 月, 河南周口地区某猪场, 在育肥猪
中, 发生了以体温升高、呼吸困难、具有肺炎和胸膜炎
典型症状和病变的传染病, 笔者进行了病原分离鉴
定, 并在猪场进行了防治试验,
如下。
1 材料与方法
1. 1 病料来源 严重病变的猪肺脏、淋巴结。
1. 2 主要培养基 特制的牛心浸汁琼脂平板 (含
10% 灭能的马血清及 100 Λgöm l NAD )、特制的牛心
浸汁液体培养基 (含 10% 灭能的马血清及 100 Λgöm l
NAD )、微量生化发酵管等。
1. 3 标准金黄色葡萄球菌菌株 金黄色葡萄球菌
(A TCC25923)购自中国兽医药品监察所。
1. 4 细菌的分离培养 将病科接种于特制的牛心浸汁
琼脂平板, 置烛缸内, 37℃培养 24 h, 观察培养结果。
1. 5 分离菌株特性检查 (1)取纯培养的菌落, 涂片
作常规革兰氏染色镜检。 (2)在一系列生化培养基中
加入NAD , 接入浓厚待检菌, 37℃培养 18 h, 观察结
果。(3)用不加NAD 和马血清的牛心浸汁琼脂平板,
将待检物均匀涂布于琼脂面上, 用能够产生生长因子
的金黄色葡萄球菌A TCC25923 菌株培养物划线接
种, 37℃ 培养过夜, 观察卫星生长现象。 (4) 在加
NAD 的牛心浸汁琼脂培养基中加入 5% 脱纤绵羊血
制成平板, 接种培养物后经 37℃培养 18 h, 观察溶血
情况。(5)将分离菌株制成菌悬液, 给 3 只 18~ 20 g小
鼠分别腹腔注射 0. 3 m l(约含 5 亿活菌) , 另 2 只腹腔
注射生理盐水作对照, 观察发病情况 1 周, 并从死亡
鼠肝脏分离细菌并鉴定。
1. 6 药敏试验 将菌落用灭菌生理盐水洗脱, 取
0. 2 m l在特制的牛心浸汁琼脂平板上均匀涂布, 选用
氟苯尼考、强力霉素、恩诺沙星、青霉素、丁胺卡那霉
素、环丙沙星、泰乐菌素七种药敏纸片均匀贴在平板
上, 置 37℃培养 24 h, 观察抑菌环大小。
1. 7 疫苗研制 (1) 用分离菌种接种于特制的牛心
浸汁液体培养基, 37℃100 röm in 的摇床震荡培养过
夜, 使菌液的含菌量为 5. 0×109 个öm l, 加入0. 2% 的
福 尔 马 林 充 分 混 匀, 37℃灭 活 48 h, 加 适 量
Tw een80 成水相。 (2) 将 10 号白油, Span80、硬脂酸
铝按一定比例混合, 15 磅、30 m in 高压灭菌即为油
相, 将油相加入高速组织捣碎机, 然后缓慢加入一定
量的细菌液, 乳化 5 m in, 分装加塞、压铝盖, 并对该
油乳剂苗进行无菌检验、安全检验等。
1. 8 自家血清制备 用已康复的病猪, 屠宰时无菌
收稿日期: 2004203217
操作采集血清, 将血清进行灭活细菌、病毒脱毒处理,
并做无菌检验和动物试验。
1. 9 防治试验 (1) 取发病猪 40 头 (5 日龄) , 随机
分为 2 组, 第 1 组用氟苯尼考 20 m gökg 体重肌肉注
射, 1 天 1 次, 连用 5 天, 同时在发病时注射自家血清
30 m lö头, 第 2 组用氟苯尼考 20 m gökg 体重肌肉注
射, 1 天 1 次, 连用 5 天, 观察治疗效果 1 周。(2)取上
述发病猪场的 15 日龄乳猪 90 头, 随机分为 3 组, 第
1 组为油乳剂灭活苗免疫组, 在 15 日龄时 1 m lö头,
在 35 日龄时 2 m lö头, 颈部深部肌肉注射。第 2 组为
药物预防组, 25 日龄时用氟苯尼考 25 m gökg 饲料浓
度拌料, 连用 1 周, 第 3 组为空白对照组, 对试验猪按
常规进行猪瘟、猪链球菌病、猪伪狂犬病免疫, 25 日
龄断奶, 并定期消毒, 连续观察 60 天, 及时记录各组
发病情况和临床表现。
2 结果
2. 1 细菌的分离培养 见有 1~ 1. 5 mm , 圆形、中
间凸起、边缘整齐、灰白色半透明黏液型菌落。
2. 2 形态学检查 分离菌株 24 h 培养物为革兰氏
染色阴性, 两极着染略深的小球杆菌。
2. 3 生化试验结果 该分离菌株对葡萄糖、麦芽糖、
蔗糖和果糖发酵产酸, 尿素酶试验阳性反应呈粉红色,
可在浓厚菌接种后 8 m in 出现, 随后越来越明显。
2. 4 卫星生长现象 在A TCC 25923 生长线附近
生长较好, 离线越远生长越差。
2. 5 溶血试验 该分离菌株为典型的 Β溶血。
2. 6 小鼠致死试验 小鼠均在接种后 18 h 发病, 50
h 左右死亡 1 只, 从死鼠肝脏中分离到较纯的A PP,
余者观察结束后全部康复。
2. 7 药敏试验结果 高度敏感的有氟苯尼考、强力
霉素; 中度敏感的有丁胺卡那霉素、泰乐菌素; 低敏感
的有恩诺沙星、环丙沙星、青霉素。
2. 8 油乳剂灭活菌研制及自家血清制备 该油乳剂
灭活苗经无菌检验、安全检验均正常, 该自家血清经
无菌检验和动物试验均正常。
2. 9 防治试验 (1) 第 1 组同时使用氟苯尼考和高
免血清治疗, 1 周后还有 1 头猪有呼吸道症状, 剖检
见有肺炎和胸膜炎病变, 19 头猪痊愈 , 治愈率为
95% , 第 2 组使用氟苯尼考, 1 周后还有 4 头猪有呼
吸道症状, 剖检见有肺炎和胸膜炎病变, 16 头猪痊
愈, 治愈率为 80%。(2)预防试验: 第 1 组使用疫苗免
疫后 60 天, 猪只正常, 第 2 组使用药物预防后, 在 60
天内, 共有 3 头猪出现呼吸道症状, 剖检后可见肺炎
和胸膜炎病变, 发病率为 10% ; 第 3 组对照, 在 60 天
52 Ch inese Journal of V eterinary M edicine 中国兽医杂志 2005 年 (第 41 卷)第 2 期
乳胶凝集试验对猪弓形虫病的血清学调查
许应天1, 张国宏1, 宋建臣1, 李 兰1, 金洪范2
(11 延边大学农学院动物医学系, 吉林 龙井 133400; 21 吉林省龙井市动物卫生监督检验所, 吉林 龙井 133400)
中图分类号: S858128519 文献标识码: B 文章编号: 052926005 (2005) 0220026201
近年来该病在国内时有发生, 给养猪业带来了较
大的经济损失, 同时也给人类健康带来严重威胁, 据
报道, 人群的平均感染率约 25%~ 50%。近几年来,
我们在病例剖检过程中遇到了不少猪弓形虫病疑似
病例。本试验旨在摸清我地区猪弓形虫病的感染情
况, 为今后制定猪弓形虫病的防制
提供科学依
据。
1 材料与方法
111 被检血清 均由预防兽医学教研室提供, 分别
采自图们市 (40 份)、敦化市 (4 份)、和龙市 (12 份)、
延吉市 (6 份) 和龙井市 (6 份) 等部分猪场, 共 68 份,
保存在- 20℃。
112 弓形虫病乳胶凝集诊断试剂盒 由日本荣研化
学株式会社研制, 内含弓形虫乳胶凝集抗原、标准阳
性血清和缓冲液等。
113 乳胶凝集试验步骤及判定标准 按照诊断试剂
盒说明
进行被检血清的检测, 并记录结果。根据诊
断试剂盒说明书, 抗体滴度 (为半凝集的最高稀释倍
数)小于 1ö16, 判为阴性; 抗体滴度等于 1ö16, 判为可
疑; 抗体滴度大于 1ö16, 判为阳性。
2 结果
211 68 份被检血清的检测结果 对延边地区部分
猪场 68 份血清用乳胶凝集试验检测了弓形虫抗体。
结果表明, 弓形虫抗体阳性率为 1312% , 最高抗体效
价达 256 倍以上。
212 不同地区被检血清的检测结果 来自图们市、
敦化市、和龙市、延吉市和龙井市等不同地区被检血
清的乳胶凝集试验检测结果见表 1。
收稿日期: 2004201218
表 1 不同地区被检血清的乳胶凝集试验检测结果
地点 样本数 阳性数 阳性率 (% )
图们市 40 5 1215
敦化市 4 0 0
延吉市 6 1 1617
朝阳川 6 1 1617
和龙市 12 2 1617
合计 68 9 1312
213 不同年龄猪血清的乳胶凝集试验检测结果 将
68 份被检血清的乳胶凝集试验检测结果, 按不同年
龄分组制表, 见表 2。
表 2 不同年龄猪血清的乳胶凝集试验检测结果
样本数 阳性头数 阳性率 (% )
仔猪 60 5 813
成年猪 8 4 5010
合计 68 9 1312
3 小结与讨论
311 本试验用乳胶凝集试验对延边地区猪弓形虫病
进行了初步的血清学调查。试验结果表明, 弓形虫抗
体阳性率为 1312% , 证实了近年来我地区猪有弓形
虫感染, 望有关部门引起重视。
312 除敦化外 (样本少) , 其他地方的阳性率之间未
见显著差异, 而成年猪的感染率显著高于仔猪, 这可
能由于成年猪接触病原体的机会比仔猪多所致。
313 目前只发现猫科的山猫属和猫属动物为弓形虫
的终宿主, 而且众多报道表明该病的发生与猫、犬等
有直接关系。因此, 在养猪场禁养猫、犬以及禁止猫犬
等宠物进入养猪场, 是预防该病发生的一种重要措
施。
后, 共有 6 头猪出现呼吸道症状, 剖检后可见肺炎和
胸膜炎病变, 发病率为 20%。
3 讨论与小结
3. 1 该猪场此次发生的传染病, 根据流行病学、临床
症状、剖检变化结合病原分离、生化试验、卫星生长现
象、溶血试验、动物实验确诊为胸膜肺炎放线杆菌感
染。
3. 2 试验结果表明, 猪场发病后, 使用自家血清同时
配合敏感抗生素, 治疗效果良好, 在进行免疫预防时,
使用自家油乳剂灭活苗预防效果良好, 单纯采用抗生
素预防和治疗效果均不甚理想。
3. 3 该病主要通过空气传播, 合理调节饲养密度, 搞
好猪舍环境卫生, 保持良好的通风和适宜的温度, 也
是预防猪传染性胸膜肺炎发生的重要因素。
62 中国兽医杂志 2005 年 (第 41 卷)第 2 期 Ch inese Journal of V eterinary M edicine