流动注射化学发光法测定头孢克洛

流动注射化学发光法测定头孢克洛 李世凤� , 魏先文, 陆晓晶, 张莉, 刘文永 (安徽师范大学 化学与材料科学学院 安徽省功能性分子固体重点实验室, 芜湖 241000) 摘 � 要:研究发现在碱性条件下, 头孢克洛对 Luminol�H2O2 体系的化学发光有 较强的增敏作用, 据此建立了流动注射化学发光测定头孢克洛药物的新方法。 头孢克洛在 1. 0 � 10- 8~ 2. 0 � 10- 5 g�mL 范围内与发光信号的增强值( �I )呈良 好的线性关系; 检出限( 3�)为 6. 0 � 10- 9 g�mL; 对于 1. 0 � 10- 6 g�mL 头孢克洛 进行11次测定, 相对标准偏差为 2. 2%。应用于希刻劳颗粒中头孢克洛的测 定。 关键词:化学发光; 鲁米诺; 头孢克洛 中图分类号: O657. 32� � 文献标识码: A � � � 文章编号: 1000�0720( 2006) 06�009�03 � � 头孢克洛( cefaclor)是一种新型的半合成头孢 菌类抗生素。临床已广泛用于呼吸道、尿路、皮肤 软组织感染以及中耳炎等 [ 1] 。目前对其测定的方 法主要有碘量法[ 2]、紫外分光光度法[ 3]、荧光 法[ 4]、毛细管电泳法[ 5]、高效液相色谱法[ 6, 7]。利 用化学发光法测定头孢克洛尚未见报道。本文基 于在碱性介质中, 头孢克洛可显著增敏 Luminol� H2O2 体系的发光强度, 结合流动注射分析技术建 立了一种快速、简单、灵敏测定头孢克洛的新方 法。该法用于希刻劳颗粒中头孢克洛的测定。 1 � 实验部分 1. 1 � 仪器与试剂 IFFL�D型流动注射化学发光分析仪(西安瑞 迈电子有限公司) ; PHS- 3B 型酸度计(上海雷磁 仪器厂)。 Luminol 储备液 ( 1�0 � 10- 2 mol�L ) : 称取 0�4429 g 鲁米诺 ( Fluka 公司 ) , 用 0. 1 mol�L 的 NaOH 溶液溶解定容至250mL, 避光保存; H2O2溶 液( 2. 0 � 10- 2 mol�L) : 当天配制; 头孢克洛标准溶 液( 1. 0 � 10- 3 g/ mL) : 准确称取 50 mg 头孢克洛对 照品(中国药品生物制品鉴定所) , 用 pH 3. 5的 H2SO4 溶解定容至 50 mL, 冰箱贮存。所用试剂均 为分析纯, 水为二次亚沸蒸馏水。 1. 2 � 实验方法 流动注射化学发光如图 1 所示, 当未注 入样品时的信号为发光体系的空白信号( I 0 ) , 使 用进样阀( 100 L)注入样品后, 出现增强的样品信 号( I s)。分别记录空白信号强度 I 0 和样品信号强 度 I s, 用峰高的增强值( I= I s- I 0 )定量。 2 � 结果与讨论 2. 1 � 化学发光曲线 头孢克洛对碱性 Luminol�H2O2 体系的化学发 光信号有较强的增强作用, 其动力学曲线如图 2 所示。当从进样阀注入样品时, 体系的发光强度 迅速增强, 在一定浓度范围内增强的峰高( �I )与 待测物质量浓度成正比。 2. 2 � 反应条件的选择 2. 2. 1 � 反应介质及酸度 � 头孢克洛对 Luminol� H2O2 体系的增敏作用与采用的介质及其 pH 有关。 试验了 Na2CO3、NaHCO3、NaOH、Na2CO3�NaHCO3、 Na2HPO4�NaOH 介质, 发现 Na2HPO4�NaOH 效果最 好, 当体系的 pH为 12. 5时, 信噪比最大且发光信 9 第 25 卷第 6期 2006 年 6月 � � � � � � � � � � � � 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory � � � � � � � � � � � � Vol. 25. No. 62006- 6 � 收稿日期: 2005�07�25; 修订日期: 2005�09�15 基金项目: 安徽省高校教师青年基金 ( 2002JQ128) ; 安徽省教育厅自然科学基金 ( 2003kj146) ; 国家自然科学基金 ( 20271002, 20490210)资助项目 作者简介: 李世凤 ( 1975- ) , 女, 博士 图 1� FI�CL 测定头孢克洛的流程示意图 Fig. 1� Schemaic diagram of FI�CL for determination of cefaclor 图 2 � 头孢克洛对 Luminol�H2O2 化学发光体系的增强作用 Fig. 2 � The enhancement of cefaclor on the chemilumines� cence of Luminol�H2O2 system 鲁米诺: 1� 0� 10- 4 mol�L , pH 12�5; H2O2 : 2�0 � 10- 2mol�L; 头孢克洛质量浓度: a- 5�0 � 10- 7 g�mL; b - 1�0 � 10- 6 g�mL; c- 2. 0� 10- 6 g�mL 号稳定。故选择 pH 12. 5的Na2HPO4�NaOH 为反应 介质。 2. 2. 2 � 鲁米诺浓度的影响 � 在 1. 0 � 10- 5~ 5. 0 � 10 - 3 mol�L 范围内, 实验了鲁米诺的浓度对发光强 度的影响, 实验表明: 当鲁米诺的浓度为 1. 0 � 10 - 4 mol�L 时, 化学发光强度增强值( �I )最大, 故 实验选用鲁米诺浓度为 1. 0 � 10- 4 mol�L。 2. 2. 3 � H2O2 浓度的选择 � 固定其它条件, 改变 H2O2 的浓度, 实验表明, 当H2O2 的浓度为 2. 0 � 10 - 2 mol�L 时, 头孢克洛对 Luminol�H2O2 体系的增 强作用最佳, 故实验中选择用浓度为 2. 0 � 10- 2 mol�L 的H2O2 溶液。 2. 3 � 工作曲线、精密度和检出限 在选定的最佳实验条件下, 头孢克洛的质量 浓度与发光强度的增强值 �I 在1. 0 � 10- 8~ 2. 0 � 10 - 5 g�mL 范围内呈良好线性关系。其线性回归方 程为: log�I = 5�47+ 0�51log!, 相关系数 ( r ) 为 0�9948。对 1. 0 � 10- 6 g�mL的头孢克洛标准溶液平 行测定 11次, 相对标准偏差为2. 2%; 根据 IUPAC 建议, 以 3倍空白标准偏差计算的检出限为 6. 0 � 10 - 9 g�mL ( n= 6)。 2. 4 � 干扰实验 对于 1. 0 � 10- 6 g�mL 的头孢克洛, 在相对误 差< ! 5%时, 考察了样品中可能的共存物对头孢 克洛测定的影响。实验表明, 200倍的 K+ 、Na+ 、 CO3 2- , 100倍的乙醇、甘油、淀粉、糊精, 50倍的 麦芽糖、葡萄糖、山梨糖、蔗糖、乳糖、柠檬酸、 硬脂酸镁、Zn2+ 、Ca2+ , 1 倍 Pb2+ 、Cd2+ 、Fe3+ 、 Ni 2+ , 0. 5倍的 Cu2+ 、Fe2+ 、Co2+ 、Cr3+ 等不干扰测 定。而希刻劳颗粒中这些物质的实际量均低于允 许量, 因此可不经分离, 直接测定。 2. 5 � 样品分析 分别取 3袋不同批号的希刻劳颗粒(礼来苏州 制药有限公司) , 用 pH 3. 5的 H2SO4 溶解定容至 100 mL, 过滤, 使用时逐步稀释至所需浓度。用上 述所拟定的最佳条件, 对希刻劳中头孢克洛进行 测定, 获得了较为满意的结果(见表 1)。 10 第 25卷第 6 期 2006年 6 月 � � � � � � � � � � � � 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory � � � � � � � � � � � � Vol. 25. No . 62006- 6 表 1 � 头孢克洛的测定 ( n= 6) Tab. 1� Determination results of cefaclor ( n= 6) 样品 测定值!�( 10- 6 g�mL) RSD �% 加入量 !�( 10- 6 g�mL) 回收率 �% 标示量 �( mg�袋) 本法结果 �( mg�袋) 1 1. 03 2. 5 2. 0 104 125 121 2 1. 96 1. 9 2. 0 102 125 127 3 4. 09 2. 3 2. 0 97. 2 125 118 参考文献 [ 1] � Mathew M, Guota V D, Bethea C. Drug Dev Ind Pham, 1993, 19( 4) : 1723 [ 2] � 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和 国药典(二部) , 北京: 人民卫生出版社, 1995, 178 [ 3] � 易文淋. 中国抗生素杂志, 2000, 25( 2) : 153 [ 4] � Hefnawy M, El�Shabrawy Y, Belal F. J Chromatogr A, 2000, 871( 1- 2) : 439 [ 5] � 贾 � 利, 周 � 维 . 分析测试学报, 2003, 22( 4) : 55 [ 6] � 欧阳卫, 付 � 建, 廖昀懋. 中国抗生素杂志, 1999, 24( 3) : 226 [ 7] � Pehourcq F, Jarry C. J Chromatogr A , 1998, 812( 1- 2) : 159 Flow injection analysis of cefaclor with enhanced chemiluminescent detection LI Shi�f eng* , WEI Xian�wen, LUXiao�jing , ZHANGLi and LIUWen�yong ( School of Chemistry andMaterials Sci� ence, Anhui Key Laboratory of Funct ional Molecular Solids, Anhui Normal University, Wuhu 241000) , Fenxi Shiyan� shi, 2006, 25( 6) : 9~ 11 Abstract:A novel flow injection method was developed for the determination of cefaclor based on the enhancement of cefaclor on the chemiluminescence of Luminol�H2O2 system. The method is simple, select ive and sensitive with a de� tection limit of 6. 0 � 10- 9 g�mL. It is effective to determine cefaclor in the range of 1. 0 � 10- 8 ~ 2. 0 � 10- 5 g�mL. The relative standard deviation is 2. 2% for the determination of 1. 0 � 10- 6 g�mL cefaclor ( n = 11) . The proposed method has been successfully applied to determinat ion of cefaclor in Xikelao granules with satisfactory results. Keywords: Chemiluminescence; Luminol; Cefaclor 11 第 25 卷第 6期 2006 年 6月 � � � � � � � � � � � � 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory � � � � � � � � � � � � Vol. 25. No. 62006- 6