不同工艺提取的龙血竭中龙血素A、B的含量的测定

2002年12月 ee成药Dec．，2002 第24卷第12期 ChineseTraditionalPatentMedicine V01．24No．12 酚、酯、醇及烷烃类化合物。 参考文献 [2] [3] [4] 中华人民共和国卫生部药政管理局．中国药品生物制品检定 所．中药材手册[M]．北京：人民卫生出版社，1989．9．450． Hiroshi，Hikino荆芥和连翘的化学及药理研究[J]．国外医学 中医中药分册．1991，13(4)：28． 杨智蕴，闫吉昌，张殊佳，等荆芥穗挥发油化学成分的研究 [J]．中草药1996，27(7)：396． 洪筱坤，王智华．气相色谱法在中草药及其成药中的应用 [J]．药物分析杂志．1986，6(6)：371， [5] [6] [7] [8] ’t 9] [10] 凌大奎，朱永新，王维，等．气相色谱保留指数谱用于中药材鉴 别的研究[J]．药物分析杂志．1995，15(4)：17 丛浦珠．质谱学在天然有机化学中的应用[M]．北京：科学出 版社．1987． MasadaY．AnalysisofEssentialoilsbyGasChromatographyand MassSpectrometry[M]．NewYork：JohnWileyandsons．Inc． 1976． 中国质谱学会有机专业委员会．香料质谱图集[M]1992 HellerSR，etal GWA．EPA／NIHmassspectraldatabese [M]．Washington，US：GovemmentPrintingoffice，1978． 林启寿．中草药成分化学[M]．北京：科学出版社．1997．573． 不同工艺提取的龙血竭中龙血素A、B的含量的测定 胡迎庆， 张庆云， 胡孝国， 邓昌沪+ (中国人民武装警察部队医学院 天津300162) 关键词：龙血竭；龙血素A；龙血素B；HPLC；免加热工艺 摘要：目的：测定不同提取工艺提取的龙血竭中龙素A和龙血素B的含量。方法：采用HPLC法，以C18反相键合硅胶为 固定相，乙腈一1％冰醋酸(34：66)为流动相，检测波长为280nm，用外标法定量。结果：龙血素A在98～490ng范围有良 好线性关系，r=0．9996，方法平均回收率为97．45％，RSD为1．82％。龙血素B在43．2～259．2ng范围有良好线性关 系，r=0．9993，方法平均回收率为96．92％，RSD为1．57％。免加热工艺提取的龙血竭中龙血素A和龙血素B含量匀高 于传统工艺提取的血竭。结论：免加热工艺为～种独创的、提取率高的新技术，具有推广价值。 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1001．1528(2002)12—0962—03 DeterminationofloureirinAandBextractedfromSanguisDraxonisintwoex- tractprocessedbyRP-HPLC HUYing—qing，ZHANGQing—yun，HUXiao—guo，DENGChang_hu“ ‘ (MedicalCollegeofChinesePeople’5ArmedPoliceForces，Tianjin300162，China) 11 Keywords：SanguisDraxonis；loureirinA；loureirinB；HPLC；heating—freetechnologyj Abstract：Objective·ToestablishHPLCmethodforthedeterminationofloureirinAandloureirinBinSanguis DraxonisCapsules．Methods：HPLCsystemincludedC18reversephasecolumnandacetonitrile一1％aceticacid (34：66)asmobilephase，detectionat280nmandexternalstandardmethod．Results：Thestandardcurvesof loureirinAWaSlinearintheconcentrationrangeof98490ng．r=0．9996．Theaveragerecoverywas97．45％， RSDwas1．82％．ThestandardcurvesofloureirinBwaslinearintheconcentrationrangeof43．2～259．2，r5 0．9993．Theaveragerecoverywas96．92％．RSDwas1．57％．ThecontentsofloureirinAandloureirinBin SanguisDraxonisfromheating—freetechnologywerehigherthantraditionaltechnology．Conclusion：Thisheat— ing—freetechnologyisanewtechniquethatisacreationwithhigherextractrate，thismethodisworthpopularig— i翌＆ 收稿日期：2002—04—17 基金项目：国家自然科学基金资助项目(30070088) 作者简介：胡迎庆(1964～)，女，江西上饶人，理学硕士。从事天然药物的研究与开发，电话：022．60578198。 *夏门含润丰华医药科学有限公司。 962 万方数据 2002年12月 第24卷第12期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine Dec．，2002 V01．24NO．12 “龙血竭”系采用传统的乙醇提取工艺，自剑叶 龙血树Dracaenacochinchinensis(Lout．)S．C．Chen 提取的树脂一类新药材，收载于1999年国家药品监 督管理局颁布的国家中[1]。厦门今润丰华医 药科学有限公司采用一种新型免加热提取工艺提取 剑叶龙血树D．cochinchinensis提取的树脂，我们研 究发现，该新工艺提取的血竭中所含的化合物比传 统工艺提取化合物要多，含量差异较大旧J，我们采 用反相HPLC法对两种不同工艺提取的龙血竭中 的主要成分龙血素A(LoureirinA)和龙血素B (LoureirinB)的含量进行测定。 1仪器与药品’ 1．1 仪器：日本岛津LC．10AT高效液相色谱仪， SPD一10A紫外检测仅，C—R8A记录仪，CTO一10AS柱 箱。 1．2药品：免加热工艺提取血竭(厦门今润丰华医 药科学有限公司提供，批号010601)；柬龙牌血竭 (中国医学科学院版纳华胜制药厂生产，批号 960515；)；芒果牌广西血竭(广西中医学院药厂生 产，批号990505)；龙血素A、龙血素B对照品(自 制，归一化法含量>98．7％)；乙腈(色谱纯，特级品， 天津市康科得科技有限公司，批号010405)，冰醋酸 (分析纯，天津市化学试剂一厂)。 2方法 2．1 紫外光谱 精密称取样品各15．0mg，置 25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为备用 液。吸取备用液滤过，精密吸取滤液1mL，置25ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，置紫外分光光度仪中在 220～400nm范围内进行扫描，记录紫外吸收光谱， 结果见图1。 2．2对照品溶液的制备 精密称取60℃干燥恒重的龙血素A、龙血素B 对照品各10mg，置50raL量瓶中，甲醇超声溶解定 容，摇匀，作为各自的对照品溶液。 2．3供试品溶液的制备 分别精密称取600C干燥恒重的血竭样品40rag 于25mL量瓶中甲醇超声溶解定容，经微孔滤膜 (0．45肚m)滤过，滤液作为供试品溶液。 2．4 色谱条件 色谱注：phenomenexC18(250mm ×4．6mm，5,urn)，北京先明乐施科技发展有限公司； 流动相：乙腈一1％冰醋酸(34：66)；流速为1．8mL· ml’n～；龙血素A，B的最大紫外吸收为278～ 280nm，设置检测波长为280nm；灵敏度：0．02 AuFS；柱温：40。C；上述色谱条件下，龙血素A的保 图1 2种血竭和龙血素A、B的紫外光谱图 1．免加热工艺提取血竭2．芒果牌血竭 3．龙血素B 4．龙血素A 留时间为23rain左右；柱效以龙血素A计算，理论 塔板数为3100。龙血素B的保留时间为26min左 右，龙血素A和龙血素B及与其他峰的分离度大于 1．75。 3 结果 3．1 线性关系：将龙血素A对照品储备溶液分别 配置成浓度4．9，9．80，14．7，19．6，25．5和29．4弘g· mL叫的对照品溶液，经微孔滤膜过滤器(0．45肚m) 滤过，在上述色谱条件下，进样20且L，记录色谱图， 进样量(X)与峰面积(Y)的回归方程为：Y= 1006．7X一5770．7；，-=0．9996；线形范围为98～ 490ng。 将龙血素B对照品储备溶液分别配置成浓度 为2．16，4．32，6．48，10．80和12．9肚g·mL。1的对照 品溶液，经微孔滤膜过滤器(0．4跆m)滤过，在上述 色谱条件下，进样20raL，记录色谱图，进样量(X)与 峰面积(y)的回归方程为：Y=708001X+6570．5； r=0．9993；线形范围为43．2～259．2ng。 3．2精密度：精密吸取同一对照品溶液，重复进样 5次，每次20raL，以龙血素A的峰面积计，RSD为 963 万方数据 2002年12月 第24卷第12期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedieine Dec．，2002 V01．24NO．12 2．21％。以龙血素B的峰面积计，RSD为2．63％。 3．3 重复性：同一批号样品取5份，分别按2．2项 下操作测定，结果龙血素A的RSD为2．52％；龙血 素B的RSD为2．47％。 3．4稳定性：样品制成的供试品溶液，制成的当天 测1次，之后每隔24h测一次，共测3次样品稳定， 龙血素A的RSD为1．76％；龙血素B的RSD为 2．05％。 3．5 样品测定 精密吸取经微孔滤膜过滤器 (0．45弘m)过滤后的样品溶液20pL，在上述色谱条 件下进行分析，以外标法计算样品中龙血素A和龙 血素B含量，结果见表1。 表l 样品中龙血素A、B的含量测定结果(n=3) 样品来源 龙血素A含量 RSD龙血素B含量 RSD (”g·mg一1) (％) (肛g·mg一1)(％) “柬龙”牌 4．01 1．78 3．89 1．95 “芒果”牌4．29 1．33 4．11 1．38 新工艺提取血竭8．63 1．96 4．53 1．17 3．6加样回收率试验取已测含量的免加热工艺 龙血竭20mg，精密加入一定量的龙血素A、B对照 品溶液，按样品测定方法测定，龙血素A回收率在 95．73～100．44％，平均回收率为97．45％，RSD为 1．82％；龙血素B回收率在95．78～99．54％，平均 回收率为96．92％，RSD为1．57％。结果见表2。 表2 免加热工艺龙血竭中龙血素A、B的加样回收实验结果 龙血素A 龙血素B 样品含量 加样量 测得量 回收率 平均回收率 样品含量 加样量 测得量 回收率 平均回收率 (pg) (pg) (pg) (％) (％) (ug) (ug) (vg) (％) (％) 172．60 196 362．2 96．73 90．6 108 198．1 99．54 170．87 196 358．5 95．73 97．45 89．7 108 193．4 96．02 96．32 173．46 196 364．2 97．3l 91．1 108 194．5 95．78 RSD=1．82％ RSD=1．57％ 171．74 196 368．6 100．44 91．5 108 195．6 96．38 174．33 196 364．5 97．03 90．6 108 195．2 96．85 4讨论 紫外光谱图显示：免加热工艺提取的血竭在 285nm时的ABS值比两种传统工艺方法提取血竭 的高，270～285nm处主要为血竭中二氢查尔酮类、 黄烷成分，推测新工艺中龙血素类成分高于传统工 艺中的含量，本文测定了不同工艺提取的龙血竭中 二氢查耳酮类化合物龙血素A和B的含量，结果显 示免加热工艺提取的血竭中龙血素A和B (LoureirinA和LoureirinB)含量均高于传统工艺提 取的龙血竭(见图2～图5)，且免加热工艺提取的血 竭中龙血素A的含量比传统工艺提取的龙血竭高 圈2 LoureirinA 对照品 HPLC图谱 964 图3 LoureirinB 对照品 HPLC图谱 一倍，从而证实了对两种血竭的紫外光谱的推测。 由此可见采免加热提取工艺，使所提取的化学成分 及含量明显提高，药物的提取率大大提高，有利于药 材的充分利用和植物资源的保护，降低产品成本，提 高企业的效益。 图4 芒果牌血竭 图5免加热工艺 HPLC谱 龙 血 竭 HPLC图谱 参考文献： [1]国家药品监督管理局标准．wS3—082(Z一016)一99(Z)33(10) 755——758． [2]胡迎庆，张静泽，刘成行，等．不同提取工艺的龙血竭差异[J] 中草药2002，33(8)：604～606． 万方数据