石榴叶鞣质对高血脂小鼠糖代谢影响及其机制

也界科学技术—中医药现代化★中药研究 摘要：目的：探讨石榴叶鞣质对高脂小鼠糖代谢的影响以及降糖的作甩机制。方汝：通过高脂饮 食建立离糙并高血耱小鼠，灌嚣石榴时鞣壤，观察小鼠焱清糖嚣鳇雯纯，择糖元含量；遵遗俸外HepG2 懿照卖验麓察磊稳叶鞣虞对菱莓糖麓霸翅及冀憨内耱元含量变纯。结暴：灌霉石接叶鞣壤8薅君，高 腊小鼠外周血总胆网醇、甘油三酯和彘糖均有明显降低，肝糖元升高；体外实验石榴叶鞣质可以明显 促进HepG2细胞对黼萄糖的利用。增加胞内糖元含谶。结论：石榴叶糕质对高脂合并的离血糖有明显 的除低作用，其作用机制可能与增加肝fll糖元转化有奖。 关建运：石樱叶赣震 高血鹈蠢血耱舞糖元 籍榴叶是石榴科植物石榴(Panwa妙anatumL．) 的叶，寓含鞣花鞣质和没食子酸型多酚类物质fl罐。研 究表磺，蠢籀§}‘求浸涮疆凝缭芬能显著增强大鼠嚣 蛋鑫黪溪性，袭透疆汁分泌，热强夺鼠，l、瀚蠕动，有 一定的促消化作用¨1；石榴叶提取物静脉注射可显 著提商大鼠脑微循环皿流量，改善脑循环嗍；石榴叶 水浸液谢晟著降低离脂瞧癍大鼠Tc和TG，舟裹矗 鬻疫貉蛋匀含量，俸外实验表骥萁姥够拳籍掇超氧瓣 离子囊豳基抻裁过氧纯产物的生成翻。石榴时鞣瑗律 内外实验口有明显的降脂作用【s1。石榴叶鞯质中的主 要成分鞣花酸可以转运礅HepG2肝细胞内并能够促 进露拜隧酵的臆农转运19|。石橙时鞣羼诱萤趣脂穗斑糖 骛效用提示我熟，石榴时鞣覆毒莓麓避避澜节糖籍 牧稿日期：2009—06删 谬岈H期：2009-08删 代谢紊乱来防治以高眈脂和高皿糖为发病背景的代 谢练合症。 本文逶过俸浓铃囊骚，针对石接卧鞣凌谣节盎 糖酌{睾焉，对其在漏节耱l誓我澍紊魏的药效透行瀚 察，以进一步探讨逸一病理条件下该药调节糖代谢 的作用特点及其机制。 一，耱辩 1．买辇叠耪 ICR小鼠，体煎18．229。雌雄各半。购自北京维 涌利华实验动物技术有限公司，动物合格证号： SCXK《京)2005—0001。动物饲养在塑温25℃，裰对漫 震国露，12h／12h昼夜竞黧交替循酶翦标整实验动 物房。高脂饲料：每1009小鬣慕料中加入109猪澜、 109植物油、109奶粉、25咄新鲜烂棼菜、1个鸡蛋及 女 莲家鑫然辞擎基金资齄撷薅f90713043)：建数学横登砖石撂-t总辕震震蒜主要活缝成分砖脂肪细建捧蘑砖综合辩徐，受贵人：壮力攀；袋 謇自然祷学基垒蠢秘磺岛(3080t523}：石格砖慈酚蒇夸辞籍疑血过程申PPA麓转囊活拽媳影囔覆葵驻器妒霹趣耕完，螽麦凡；雷穰；中 璃溥击岳辞学基金磺靖(2(辩80440418；；昊装楚漪萼吴篆菱砖血管庭胃肠平滑蕊辞竭磅比较研究，突责人；王秀．垮。 ★舟联系人：杜力军，本刊缡卷，教授。主要研究方向j筠理学研究，％1：010-62796270，E-mail：lijur，du@amil．tsinghua．edu．_(311。 (WorldScienceandTechMlogy,rbtodemizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica)545 万方数据 2009第十一卷第四期★V01．11 No．4 逶量维耋素，盘中器医学辩学院实验凄饕鹱突浙营 养部翎备。 2．药黾和试荆 石榴叶采自山东枣庄。由本燃向兰博士鉴定为 嚣揍辩整魏石樱Punicagranatumk瓣于漂砖。磊缓 时鞣震《磷碧；，趣本搴蘸往缓裁餐，含总鞣囊科％，冀 中鞣花酸含量lO％fHPLC测定)。桃号：040818。粥时 以蒸馏水配制成所需浓度。总月H删醇(TC)，甘油鼍脂 (TG)，葡萄糖(Glu)和高密度脂鬣囱(HDL—C)试剂窳 筠魏囊j芝豪孛堡垒物褰技零公霹。慈鬻，鍪药集浸纯 学试亵舂陵公蔼。所有{芑学试裁均炎分橱缝。中髓骧 船索注射液：40U／mI。，江苏徐州万郫生化制药有限公 词。碱性晶红，过碘酸，偏重亚硫酸钠，醋酸钠，盐酸 朔乙醇均为国产纯。 3，实验邈噩 550塑酶挺彼(Bio—Rad，USA)，HPll0台式赢迷 离心机。Olympus倒置可见光一荧光显微镜。 二、方法 l。鬻戎篱紊筑奎蔑筷鲞簿黼备 取雄小鼠汹只、雌，j、鼠嬲袋。随税选取其中瓣 雄小鼠18只、雌小鼠15只，喂饲粥脂饲料，制做高 脂模型。其余6只雄小鼠和5只雌小鼠喂普通饲料， 作为普通饲料对照组。2嗣后，各缀枣鼠象血，测 TC，TG，Glu，并将其隧撬势力3纽《雄6哭蘧，嘏5 只髓)。即：商腾饲料模型组(生璨盐水缱)；高脂镧辩 石榴叶鞣质小剂掇组(400rag·kg州)；高脂饲料石榴叶 鞣质大剂量组(81)orag·kg。1)。普通饲料对照组给予镣 体积攀理盐瘩，共给药8囊。纂8蠲小鼠蘩食过夜， 黻淹静辣丛采巍。处死小鼠，致肝，一80'：C糅存，待测 肝糖原含量。烈清分离测TC、TG、Giu。给药期间，商 脂饲料小鼠继续饲喂高脂料，正常对照组小鼠继续 饲隈普通饲料。 2．对FIepG2细跑拖盼甍蓠耱摄取渍耗嚣试验 HepG2缨黧参文献il。{寄援墙养。蕺缨缝谗浓度 l×10’6个·ml。～，每孔IOOtLL接种刘96孔板，48h待 细胞彼此相连铺满每个孔后，尉撤新鲜培养液，同时 添加下列药物；荫榴时鞣质(终浓度5xlO-O、鞣施酸 瞪滚囊IxlO≮·mLq)，胰鑫素(终浓度0。25U·娥。)， 空囊对照热等体积PBS，继续臻器48h，捡溅照羚鬻 萄糖浓度，计算胞外葡萄糖消耗率。每次试验每个浓 度平行4复孔。燕验重复3次(n=12)。各受试药物均 曩无菌磷酸盐缓律滚(pss)配制并褥释成耩器滚囊， 零O．22ttm滤糗过滤除蘸。 3．石榴叶鞣质对正盥． 细胞胞处赶菊糖摄．HepG2 取消耗的动力学试验 &西2细胞培养嗣上。接戳缨慈48h矮换漩嚣 对热大下獭药物：磊戆靖鞣震f终浓度5x10-5，lx10。 g·mL一)、胰岛索(终浓度0．25U·mL。)，空自对照搬 等体积PBS，分别于加药餍12、20、36、44h缚孔吸取 21xL胞外液检测胞外葡萄糖浓度，计算胞外葡萄糖 溃巍率，箨骢外蘩萄夔溱耗率与霹霾≤囊)瓣关系蘧 线。每次试验每拿浓度乎行4复毳，实验震笺3次 (n=12)。 4．石榴叶鞣质对胰岛蒲监用下的HepG2麴胞胞 外葡萄糖摄取消耗的影响 HepG2缨腱溃笾磊，静檀剿鳐菰援，48h感更换 薪簿壤养滚，弱时添艇下列药物：石稽时赣瀵+胰鑫 素组(终浓成为5xlO。5，lxl0一，5xlO“，1×10矗，lxl0。 g·mL’1石榴叶鞣质+0．25u-mL_胰岛素)，胰岛素蚶 照组(终浓度0。25U·mL一’)，空白对照组加等体积 PBS，莹葬48h曩检测藤豁葡甓糖浓度，诗冀施外蔫 萄耱渍糕攀。每次斌验每个浓度平行4复稳，宾验重 复3次(n=12o 5．多榴吐篷质对垦堂成臆垒盘作盟工韵雌业盟 细胞胞内肝糖艨含量的影响 HepG2缡臆溃范蜃，种辅弼鏊磊摄，24h詹缵藏 完全黏壁并开始分裂隼长。熏换薪鲜培养滚，问时添 加下列药物：石榴叶鞣质组(终浓度为lxl0《g-mL川)、 胰岛素对照组(终浓度O，25U·mL。)、石榴叶鞣质+ 簇岛素缀(终浓度隽1×10“Sg·mL。吾攫时鞣囊÷ 0。25U-mLq麟岛素≥，空是对照缓热等薄积PBS，培 养48h，更摸新鲜培养液，网时荐次添搬翡裼，继续 培养48h。小心吸走胞外液，PBS洗3遍，用PAS法 (过碘酸Schiff反应)显示胞内糖原。实验结果用显 鼗藐接联。 6。安骚观测捃标鳃溺定方法毒数撩酶统事}楚理 斑清键化指标的测定按试剂盒进行。J扦糖原的 测定采用暾良蒽酮法，蛋内定量采用Lowrys法。实验 数据以均意数差表示。通过单因素方差分析 《矗箨9v矗)，P