双黄连注射液家兔直肠给药的药代动力学和相对生物利用度研究

2002207222 收稿　2002208213 修回 1 湖北省教育厅研究项目 ( №98C029) 黎烈荣 ,联系作者 ,女 ,硕士 ,主任医师 ,硕士生导师 ,湖北省中医药学 会妇产科专业委员会主任委员。 Tel : 027267813383 　E2mail :llr2 @163. com ◇研究原著 ◇ 中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办 CN 3421206/ R , ISSN 100922501 E2mail : editorys @mail. ahwhptt. net. cn 2002 Dec ; 7(6) :525 - 528 双黄连注射液家兔直肠给药的药代动力学 和相对生物利用度研究1 黎烈荣 ,谭异伦2 ,郑 颂3 湖北中医学院妇科教研室 ,武汉 　430061 ; 2武汉大学中南医院中医科 ,武汉 　430061 ; 　3 武汉市第一医院妇产科 ,武汉 　430061 摘要 　目的 :研究双黄连注射液家兔直肠给药的药 代动力学和相对生物利用度 ,对保留灌肠和口服给 药进行比较 ,为直肠给药的科学性提供理论依据。 方法 :将双黄连注射液中主药金银花的有效成分绿 原酸作为血药浓度定量的检测指标 ,根据药物 由用药部位进入体循环的速度 (即吸收速率 Ka) 和 药物进入体循环的相对量 ,即吸收程度 ,通常用血药 浓度 时间 (C T)曲线下面积作指标 ,观察直肠给药 的吸收动力学变化。结果 :药代动力学数据说明保 留灌肠组与口服组间的 AUC 存在显著性差异 ( P < 0. 05) 。灌肠剂的生物利用度为 100 % ,口服剂的相 对生物利用度则为 80. 78 % ;保留灌肠剂和口服剂 的达峰时间 ( Tp 值) 分别是 0. 75 和 2. 48 h ,有显著 的统计学意义 ( P < 0. 05) ,说明保留灌肠在吸收速 度方面优于口服 ; Cmax受吸收量和吸收时间的影响 , 保留灌肠剂的血清浓度峰值与口服剂的峰值间存在 显著性差异 ( P < 0. 05) ,说明保留灌肠剂的血药浓 度明显高于口服剂。结论 :双黄连注射液有效成分 的吸收 ,直肠比口服给药快 ,血药浓度高 ,其吸收总 量和生物利用度均高于口服给药。 关键词 　慢性盆腔炎 ;中医药疗法 ;药代动力学 ;直 肠给药 中图分类号 : R969. 1 文献标识码 : A 文 章 编 号 :100922501 (2002) 0620525204 慢性盆腔炎是妇科临床常见多发且难愈的一种 疾病 ,临床多采用中药口服或保留灌肠的方法治疗 , 均有不同程度的疗效。尤其是中药保留灌肠 ,既可 避免苦寒药物久服败胃 ,又可使药物直达病灶 ,更快 地促进局部炎症吸收消失 ,使粘连的盆腔组织软化 分离 ,疗效满意。我们临床观察使用双黄连注射液 保留灌肠治疗慢性盆腔炎 68 例 ,有效率达 97 % ,明 显高于口服治疗组。为了验证临床疗效 ,为直肠给 药的科学性提供理论依据 ,我们将双黄连注射液中 的主要药物金银花的有效成分绿原酸作为血药浓度 定量分析的检测指标 ,对保留灌肠组和口服组进行 直肠吸收的药物动力学的比较研究。 1 　材料与方法 1. 1 　仪器 　Waters 高效液相色谱系统 ,994 陈列检 测器 ,600E泵 ,U6K进样器 ,均由美国 Waters 公司生 产。振荡器 ,LD 5210 型离心机 ,北京医用离心机厂 生产。 1. 2 　药品和对照品 　双黄连注射剂 (冻干剂) ,哈尔 滨中药二厂生产 ,批号 : d980532 ,600 mg/ 支。绿原 酸品 ,武汉市药检所提供。甲醇 ,醋酸 ,乙腈均 为分析纯。 1. 3 　实验动物 　家兔 ,2 kg 左右 ,雌雄兼用 ,本院动 物室提供。 1. 4 　方法 1. 4. 1 　样品、标准品液的配制 　精密称取双黄连注 射剂粉末 20 mg ,置 10 ml 容量瓶。加甲醇至 4/ 5 体 积 ,超声震荡 30 min ,冷置 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,配 得浓度为 2 g·L - 1的样品供试液。精密称取绿原酸 标准品 10 mg ,置于 100 ml 容量瓶 ,如样本溶液的配 置方法 ,得浓度为 0. 1 g·L - 1的标准品供试液。 1. 4. 2 　色谱条件 　色谱柱 ResolvTM , C18 ,3. 9 mm × ·525· Administrator 打字机 学习特色疗法请登陆特色疗法学习网：http://www.tslfxxw.com/ 150 mm ,流动相为水 甲醇。 1. 4. 3 　标准曲线绘制 　精密称取绿原酸标准品 10 mg ,置于 100 ml 容量瓶中 ,用甲醇定容 ,即得浓度为 100 mg·L - 1的标准品溶液。精密吸取标准品溶液 10 ,100 ,200 ,300 ,400μl ,分别加 0. 2 ml 空白血浆 ,再 加入 1. 5 ml 乙腈 ,混合摇匀 10 min 沉淀蛋白 ,以 3 000 r·min - 1的速度离心 10 min ,取上清液 ,挥去溶 剂 ,残渣用 0. 5 ml 甲醇溶解 ,进样 50μl 行 HPLC测 定。其色谱图见图 1 ,以进样浓度作横坐标 ,以所测 峰面积作纵坐标作标准曲线 ,其回归方程为 Y = 24. 9609 X + 0. 005739 , r = 0. 9998。绿原酸标准品溶 液在 0. 002～0. 08 g·L - 1之间与峰面积有良好线性 关系。 1. 4. 4 　样品测定 　精密吸取样品供试液 20μl ,按 色谱条件进样测定 (见图 1) 。 图 1 　绿原酸标准品、样品及含药血清色谱图 A :绿原酸标准品 ; B :双黄连注射剂 ; C :给药后的血清 ; 1 :绿原酸 　　根据所测样品溶液峰面积和对照品峰面积之 比 ,用外标法公式计算双黄连注射剂中绿原酸的含 量[1 ] ,为 : C = A样/ A对 ×M对 ×1000 (g·L - 1) V样 ×1000 C为双黄连注射剂中的绿原酸含量 , A样 为双 黄连注射剂样品峰面积 , A对 为绿原酸对照品峰面 积 ,M对 为绿原酸对照品进样量 (μg) ,V样 为双黄连 注射剂样品进样量 (μl) 。 1. 4. 5 　回收率实验 　取 1 ml 样品溶液 5 份 ,各加入 血浆 0. 2 ml ,分别加 0. 25 ml 绿原酸标准品溶液 (C = 0. 1 g·L - 1) ,按标准曲线项下的方法进行处理 ,所 得供试液分别进行 HPLC 测定 ,测得加样回收率为 (96. 5 ±1. 0) % , CV = 1. 08 %( n = 5) 。 1. 4. 6 　稳定性试验 　取 1 ml 样品溶液 ,加入血浆 0. 2 ml ,再加入 0. 25 ml 绿原酸标准品溶液 ,按标准 曲线项下的方法进行处理 ,所得供试液按即时、1、2、 3、4、5、6、7 h 分别进样 ,分析峰面积的平均值 ,变异 系数 CV = 1. 8 %。 1. 4. 7 　精密度实验 　对同一样品同时进样 6 次 ,分 析峰面积的平均值 ,变异系数 CV = 2. 3 %。 1. 4. 8 　操作方法 　实验兔 10 只 ,随机分为两组 ,每 组 5 只 ,雌雄兼用。均禁食 12 h ,每只分别给予双黄 连注射剂粉末 1. 8 克 ,用 37 ℃生理盐水溶解 ,溶于 10 ml 容量瓶 ,按组分别行口服灌胃或直肠给药 ,给 药前心脏穿刺抽血 2 ml 作为空白对照 ,给药后各于 0. 5、1、2、3、4、5、6、8 h 共 8 个时间点心脏穿刺取血 , 每次 2 ml。直肠给药方法 :取灌肠用的导尿管 ,管 头涂凡士林 ,使兔跨卧于桌上 ,轻按住兔头及前肢 , 拉住兔尾 ,露出肛门 ,轻握后肢。将导尿管缓慢插入 家兔肛门内 ,深度 7～9 cm。与注射器套紧 ,灌注含 双黄连 1. 8 g 的药液 10 ml ,再吸取一定量生理盐水 缓慢灌入 ,保留导管 3 min。灌药前后 ,保持管口向 上 ,并高于肛门水平 ,以免药液漏出。灌胃方法 :将 兔夹于两腿间 ,固定头部 ,抓住两前肢。将开口器横 放于兔口中 ,压在舌头上面 ,用导尿管从开口器中央 孔慢慢插入食道和胃。导管外口端放入清水中 ,如 无气泡出现 ,证明在胃内 ,再灌入同等剂量的双黄连 药液。心脏穿刺取血方法 :将兔仰卧固定于手术台 , 左侧胸部相当心脏处的被毛剪去 ,碘酒、酒精消毒皮 肤 ,左手触摸胸骨左侧第 3～4 肋间 ,选择心跳最明 ·625· Chin J Clin Pharmacol Ther 2002 Dec ; 7(6) 显处穿刺。将注射器针头扎入心室内 ,每次采血 2 ml。 1. 4. 9 　血药浓度的测定 　血样品在室温静置 30 min 后 ,离心分离血浆 (3 000 r·min - 1 ,10 min) 后 ,取 血清 0. 5 ml ,加入乙腈 4. 5 ml ,充分振摇 10 min ,离 心 10 min (4 000 r·min - 1) 。转移上清液 ,挥干溶剂 , 加甲醇 0. 5 ml ,溶解溶质 ,每次取 25μl 进样。以绿 原酸做为控制指标 ,用 HPLC 法测出家兔灌肠及灌 胃给药后不同时间的血药浓度。根据直肠给药组和 灌胃给药组每组 5 只家兔的血药浓度平均数值 ,分 别描点 ,绘制两种不同途径给药的血药浓度及时间 曲线 (见图 2) 。 图 2 　两种途经给药血药浓度及时间曲线( ○2○:灌肠给药 , ◆2◆:灌胃给药) 　　采用梯形法计算出曲线下面积 AUC[2 ] 。药时 曲线经计算机模拟 ,根据血药浓度的吸收曲线计算 各项药代动力学参数 ,求出达峰时间 Tp 和峰值 Cmax ,并作 t 检验。以灌肠剂的生物利用度为 100 % 求出灌胃给药的相对生物利用度。 2 　结果 在剂量相同 ,体清除率不变的条件下 C2T 曲线 下面积 AUC反映药物进入人体的量 ,从表 1 药代动 力学数据得出保留灌肠组与口服组间的 AUC ,存在 显著性差异 ( P < 0. 05) 。以灌肠剂的生物利用度为 100 % ,口服剂的相对生物利用度则为 80. 78 %。 Tp 值反映药物吸收速度的快慢 ,从表 1 中看 出 ,保留灌肠剂和口服剂的 Tp 值分别是 0. 75 和 2. 48 ,统计学上有显著差异 ( P < 0. 05) , 说明保留灌 肠在吸收速度方面优于口服。 表 1 　双黄连灌胃及灌肠的药动学参数( x ±s , n = 5) 参 　数 灌肠组 灌胃组 AUC / mg·h·L - 1 131. 56 ±24. 77 105. 13 ±34. 59b Cmax/ mg·L - 1 63. 63 ±6. 17 33. 8 ±8. 24b Tp/ h 0. 74 ±0. 18 2. 26 ±0. 37b F / % 100 80. 7 两组比较b P < 0. 05 　　Cmax受吸收量和吸收时间的影响 ,保留灌肠剂 的血清浓度峰值与口服剂的峰值间存在现著差异 ( P < 0. 05) ,说明保留灌肠剂的血药浓度明显高于 口服剂。 3 　讨论 衡量药物吸收一般有两个指标 ,一是药物由用 药部位进入体循环的速度 ,即吸收速率 Ka ,二是药 物进入体循环的相对量 ,即吸收程度 ,通常用血药浓 度 时间 (C2T)曲线下面积作指标。本研究围绕上述 两个指标探讨直肠给药的吸收动力学变化 ,目的在 于将临床用药与现代药理学研究相结合 ,通过实验 验证药物的治疗作用 ,为直肠给药的科学性提供理 论依据。绿原酸是金银花中的主要成分 ,据《中药 志》第五册记载 :具有抗炎、抗病毒、抑制溃疡、增强 免疫功能的作用。本实验将金银花的有效成分绿原 酸作为血药浓度定量分析的检测指标 ,进行直肠吸 收的药物动力学研究 ,结果证明 ,直肠对中药有效成 分的吸收比口服给药快 ,血药浓度高 ,其吸收总量和 生物利用度均高于口服给药 ,这是由于直肠静脉直 接与下腔静脉相连 ,有效成分吸收后可直接进入大 循环 ,避免了“肝首过消除效应”,防止或减少药物在 肝脏被破坏 ,也能防止胃肠消化液对药物的破坏 ,使 药物的生物利用度得到充分发挥。亦证明直肠给药 不失为中医临床一种速捷高效的给药途径。 参 考 文 献 1 　纪晓多. 高效液相色谱法在药物动力学中的应用 [J ] . 药 物分析杂志 ,1986 ;6 :236 - 7 2 　孙瑞元. 定量药理学 [M] . 第 1 版 ,北京 :人民卫生出版 社 ,1987 :371 - 4 3 　赵淑杰. HPLC在中成药分析中的应用 [J ] . 中成药 ,1994 ; 16 :45 - 6 ·725·中国临床药理学与治疗学 2002 Dec ; 7(6) Pharmacokinetics and relative bioavailability of shuanghuanglian injection in rabbits by rectal medication1 LI Lie2Rong , TAN Yi2Lun2 , ZHENG Song3 Department of Gynecology , Hubei College of Traditional Chinese Medicine , Wuhan 430061 ; 2Department of Traditional Chinese Medicine , Wuhan University , Wuhan 430061 ; 3First People Hospital of Wuhan City , Wuhan 430061 ABSTRACT　AIM : To investigate the pharmacokinetics and relative bioavailability of shuanghuanglian injection in rabbits by rectal medication in comparison with oral medi2 cation. METHODS : Chlorogenic aci from flos lonicerae d , a main component in shuanghuanglian injection , was used as a detection marker in blood drug. According to the velocity of drug entering into systemic circulation from medication site (that is , absorption rate Ka) and the rela2 tive quantity of drug entering into systemic circulation from medication site (that is , absorption degree) , AUC was usually used as a marker to observe absorption dy2 namic changes of rectal medication. RESULTS : There was significant difference of AUC between clusis group and oral group ( P < 0. 05) . Bioavailability of enema was 100 % , and oral dose 80. 87 % ; The values of Tp of ene2 ma and oral dose were 0. 75 h and 2. 48 h , respectively( P < 0. 05) , showing that clusis was superior to oralmedication ; Cmax was affected by absorption quantity andtime. There was significant difference of Cmax betweenenema and oral dose ( P < 0. 05) , showing that the blooddrug concentration of enema was obviously higher thanthat of oral dose. CONCL USION: For the chlorogenicacid from shuanghuanglian injection , the absorption inrectal medication is faster than that in oral medication ,and the blood concentration , total absorption quantity andbioavailability of rectal medication are higher than ones oforal medication.KEY WORDS 　chronic pelvic inflammatory disease ;traditional Chinese medicine ; pharmacokinetics ; rectalmedication 本 刊 重 要 启 事 本刊自 2003 年起每期页码增至 120 页 (双月刊) ,内容约增加 30 %。同时已申请加入中国科技论文统计 源期刊。这样 ,本刊将进入国内所有大型科技文献检索系统 ,以及大型期刊数据库系统。目前本刊发行量已 攀升至每期 6000 余册 ;发行地域覆盖全国各地。本刊正在向精品和名牌刊物努力 ,着力成为从事药物治疗 学和临床药理学工作者不可或缺的工具。 ·825· Chin J Clin Pharmacol Ther 2002 Dec ; 7(6)