硫酸软骨素生产工艺

硫酸软骨素生产工艺硫酸软骨素生产工艺动物软骨中均含有酸软骨素，大家畜的鼻中隔及喉头骨中含量较多，据报道，猪鼻中隔含有41%左右。药物硫酸软骨素是从软骨中提取的硫梳软骨素A和硫酸软骨素C等各种硫酸软骨素的混合物。有的商品称康得灵。本品用于因链、霉素所引起的听觉障碍症的预防和冶疗，如偏头痛、神经痛、风湿痛、肝炎等症。性状：硫酸软骨素是一种白色粉末，吸水性强，易溶于水而成粘稠液体，不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂中，其盐类对热较稳定上。制法：硫酸软骨的制剂和片剂，它的生产工艺主要有稀碱和浓碱和浓碱提取两种，下面各介绍两种。一、稀碱提取工艺之一工艺：猪喉（鼻）软骨，浸出氢氧化钠过滤，浸出液，酶水解盐酸、胰酶53～54℃，水解液，吸附活性白土、活性炭，沉淀氯化钠、乙醇，PH值6.3～7，沉淀物，干燥无水乙醇60～65℃，干品，制剂氯化钠P值5.5，注射液。操作过程：浸出：将2%氢氧化钠250千克置浸泡罐内，加入洁白干燥软骨40千克，在室温下每隔半小时缓缓搅拌1次，待浸出液比重达波美5.0（20℃）度时出料。用纱布过滤。骨渣再用适量蒸镏水浸泡20分钟，过滤。二次过滤液合并，使滤液总体积为200升。酶解：将上述滤液置消化罐中，搅拌下缓缓加入1：1盐酸并调PH值8.8～9.0，用循环水浴加热。罐内温度达50℃时加入相当于1：25倍胰酶1300克（宜使用高倍的胰酶）继续升温，控制消化温度为53～54℃，不得超过50℃循环水浴温度55～57℃保持，水解7小时。在水解过程中，由于氨基酸的增加，PH值会有下降，需用10%的氢氧化钠随时调整PH值至8.8～9.0，在水解过程后期，取反应液少许，用滤纸自然过滤到比色管中，10毫升滤液滴加10%三氯醋酸1～2滴。若仅微显浑浊，说明消化情况良好，否则可酌情增加适量胰酶。吸附：使内温53～54℃保持，用1：2盐酸调节PH值至10%氢氧化风俗溶液调PH值至6.0，并加入与滤液体积等同的1%氯化钠溶液。溶解后过滤，滤液在搅拌下缓缓加入伍0%乙醇，使醇含量为75%，每隔30分钟搅拌一次，共搅拌4～6次，使细小颗粒增大而沉降。静置8小时以下，虹吸出上清液。硫酸软骨素沉淀用无水乙醇充分脱水，洗涤2次，抽干，60～65干燥或真空干燥。制剂：硫酸软骨素注射液配制配方：硫酸软骨素40克（以纯品计）氧化钠17克注射用水加至3000毫升按配方称取标示量107%的硫酸软骨素粉，撒入注射用水中，使其膨胀，搅拌溶解。再加入氯化钠，调整PH值5.5左右，加热煮沸，用布氏漏斗趁热过滤，滤液迅速冷却，于0～5处放置过夜。次日过，滤液加入0.3～0.5%活性炭迅速加热至微沸，保持15分钟，用砂滤包扎滤纸，乘药液微沸时真空抽滤，滤液迅速冷却至室温，补加水稀释至全量，过滤至澄明，灌封，常压灭菌。硫酸软骨素溶液易繁殖微生物，必要时可在处方中加入2%（V/V）的苯甲醇。说明与讨论：本品以含硫量计可达到5%以上，相当于硫酸软骨素或硫酸软骨素钠的百分含量，分别为71.64%及75.07%。用胰酶水解，可同时作用于蛋白质和糖元。为了避免水解反应局部过热而影响酶的活力，工艺中采用循环水浴加热装置。软骨浸泡时间长，蛋白质含量则相应增多，从而会影响到成品的纯度。为些规定浸出液比重的限度为波美5度。浸出的速度与室温有关。由于此工敢的酶水解不可能完全彻底，而胰酶本身即为一种蛋白质，使用活性白土作为吸附剂，除剩余的蛋白质和多肽是有效的。活性白土的面随着PH值的升高而增大，PH值5以上粒子显著变细，因而活性白土在中性时吸附性能较好。但由于中性时粒子过细无法通过滤器，所以在过滤前将PH值调至5.4，使过]比较顺利。活性白土尚可吸附组织胺，与活性炭配合应用还有脱色与去热原的作用。酶水解及吸附过程温度控制在53～54℃，不仞是酶反应的需要，且能阻止微生物生长，从过滤开始至乙醇沉淀以前，操作要迅速，避免腐败。本工艺所用活性白土的处理方法：取100千克活性白土，加常水70千克、盐酸10升搅匀，通入蒸汽煮沸1小时，冷却。用常水洗至PH值4.4，再用蒸镏水反复洗至PH值5.1。吊滤后压干，置盘中105℃烘干粉碎，200℃活化3小时后置密封容器内保存备用。二、稀碱提取工艺之二软骨（绞碎），提取2%氢氧化钠，碱性提取物，酶水解盐酸、胰酶PH值8.5～9.0、53～56℃。6～7小时，水解液，盐酸PH值7.0，浓缩液，沉淀乙醇，沉淀物，干燥，粗制粉，精制水，盐酸PH值3.0过滤，滤液，水解氢氧化钠、胰酶PH值8.5～9.0、53～56℃，4小时，二次水解液，盐酸，过滤PH值6.0～7.0、100℃滤液，乙醇，沉淀干燥。精制粉，制剂，成品。工艺过程：提取：将除净脂肪芨其他结缔组织的软骨绞碎，加入4倍量2%氢氧化钠溶液浸提24小时。过滤。弃去滤渣，滤液合并。酶水解：用1：1盐酸调PH值为8.5～9.0，加入0.4%量的胰酶，在53℃～56℃条件下不断搅拌消化6～7小时，速冷至30℃以下，再用1：1盐调PH值至7.0放置过夜(须防止腐)。虹吸上清液，沉淀用布袋吊滤。沉淀：所得滤液在60℃以下减雨衣缩至原体积的1/2。过滤。滤液加入95%乙醇，使醇浓度下降至65%～70%，放置过夜。过滤，沉淀物用95%乙醇洗涤3次，在60℃以下干燥，取得粗制粉。可供口剂用。精制取上述粗制粉，加入20倍量蒸镏水溶解，用1：1盐到调PH值至3.0，冷库内放置过夜。过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调PH值至8.5～9.0，加入0.4%量的胰酶，于53℃～56℃搅拌消化4小时，放冷至30℃以下，调PH值6.0～7.0，加热到100℃保持20分钟，立即冷却。过滤滤液加入95%乙醇，使乙醇浓度下降至70%左右，放置4小时以下。过滤。以乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀物。减压干燥，得精制粉。制剂：A康得灵注射液配方：硫酸软骨素粉撒入注射用水中，使之溶解，加入苯甲醇，最后补加注射用水足量，用盐酸或氢氧化钠溶液液调PH值6.0～7.0，过滤，灌封，常压灭菌即得。B康得灵糖衣片配方：硫酸软骨素粉0.12克淀粉0.125克硬脂酸镁0.005克片重0.25克取湿淀粉制粒，干燥后按配方混入乙过80～100目筛的硫酸软骨素粉和硬脂酸镁压片，包衣，即得。说明与讨论：有的工艺用稀碱提取后，滤液用盐酸调节PH值至2.8～3.0，加热至60℃，过滤的溶液用氢氧化钠溶液调PH值至7.0～7.5，加热至70℃，过滤后乙醇沉淀得粗品，精制时用A、R、3942霉菌蛋白酶进行水解，效果也好。提取前的确小时应间歇搅拌；消化后要立即冷却以防腐败；浓缩工序可浓缩至原体积的1/5左右，以减少乙醇用量；精制工序中在酶水解并调PH值6.0～7.0后。可加2～3%针剂炭再加热至100℃。本工艺制得的硫酸软骨素制粉，含量为65%左右。所以在注射液配方中所规定硫酸软骨素量并不是实际称量的值，而是应按精粉的实际百分含量进行折算。实际上要加30克左右。软骨每千克用2%氯化钠溶液4800毫升和2%氢氧化钠溶液1200毫升的混合液提取24小时，残渣再用2%氯化钠3200毫升和2%氢氧化钠800毫升的混合液提取1次，所得提取液经胰酶水解，加热除去蛋白质后，通过乙醇沉淀等工序，能得到较纯的硫酸软骨素。三、浓碱提工艺之一工艺路线：猪喉头软骨（绞碎），水解提取浓氢氧化钠40℃，2小时，碱性提取物，盐酸PH值7.0～7.2提取液，去糖元淀粉酶，甲苯PH值7.0～7.2、3.8～40℃，1小时，水解液，去酸性蛋白盐酸，滑石粉PH值2.8～3.0，65℃，滤液，去酸性蛋白质氢氧化钠，滑石粉PH值7.3～7.5℃清液，沉淀乙醇，沉淀物，干燥，成品（片剂原料）。工艺过程：原料处理：将猪头洗净，在80℃以下蒸煮约2小时，除去脂肪结缔组织，用水洗净，－10℃贮藏2周以上，备用。水解提取：将冷冻软骨解冻，绞碎。于水解锅加入333升波美20度氢氧化钠溶液。在搅拌下加入软骨100千克，加热至40℃，提取2小时。加盐酸调PH值至7.0～7.2，加淀粉酶8000单位（先用提取液调成粥状）和甲苯50毫升，38～40℃水解1小时，取小样过滤，将滤液装入5毫升试管中，滴入碘试液2滴，停止水解。去蛋白质：A、去酸性蛋白质：用盐酸调节上述水解液PH值至2.8～3.0，加滑石粉0.75千克，加热到65℃后，迅速冷却至室温（必要时锅内加冷水），静置4小时以上，用折迭帆布滤器反复过滤，至滤液澄清为止。B、去碱性蛋白质：将上述溶液用氢氧化钠溶液调PH值至7.0～7.5，加放0.75千克，加热到75℃后，迅速冷却至室温，静置4小时以上。用折迭帆布滤器过滤，滤液要求澄清。沉淀、干燥：将滤液加2.5倍体积90%以上的乙醇，边加边激烈搅拌，沉淀1～2小时，等上面乙醇液不浑浊后，将上清液吸出进行回收。沉淀物抽干后取出，放在65%～68%乙醇2022年0毫升中搅拌30分钟，放置过夜。次日，吸取上清液回收乙醇，沉淀物帛干手用95%乙醇2022年0毫升处理2次，每次1小时，抽干。然后摊于清洁的盘中，置烘箱中70℃烘干，为硫酸软骨素片原料。制剂：本品每片原料含量如下：硫酸软骨素钠盐0.125克滑分0.005克淀粉颗粒0.135克片得0.268克说明与讨论：加入淀粉酶的目的是除去糖元（即动物淀粉）。根据不同种类和不同效价的淀粉酶，应掌握其最适温度和最适PH值，并注意调整用量，但如果只作为片剂原料，可不必除去糖元。四、浓碱提取工艺之二工艺路线：软骨（绞碎），提取氢氧化钠40℃，3小时，提取液，盐酸PH值7.2滤液，酶水解，胰酶PH值7.2，40℃，3小时，水解液，乙醇沉淀，洗活70%乙醇，脱盐沉淀物，脱水90%乙醇脱水沉物，干燥70℃，成品（片剂原料）。工艺过程：提取：取除去脂肪及结缔组织的浆软骨，经解冻后绞碎，称重，置不锈钢夹层锅中，加入原料重量1/2的波美15～20度氢氧化钠溶液（即每100千克碎软骨加60千克），然后搅拌加入碎软骨。加热至液温40℃，保温经提取3小时后，冷却。缓缓加入工业盐酸调PH值至7.2，纱布过滤，滤渣挤干后废弃。去糖无限元和蛋白质：将过滤液置夹层锅中，保温40℃，调PH值至2，加入3942蛋白酶（每千克原料15万单位）和胰酶（适量），同时加入甲苯100毫升，搅拌水解3小时，水解结束时取小样过滤，滤液分别用碘试液及10%三氯醋酸测定合格后，加热至70℃，加入适量滑石粉（约为原料的1%），保温10分钟左右，然后迅速冷却至40℃以下，过夜。沉淀：次日，将冷却的液体用折布过滤，滤液必须澄清，对碘试液和三氯醋酸试液反应均显阴性。将滤液放于缸内，在激烈搅拌下加入约2.5倍量的90%以上乙醇，使滤液的醇浓度下降至65～70%，停止搅拌，静置沉淀。洗涤、干燥：待乙醇液加收。沉淀物用布氏漏斗抽干后取出，加入20升70%的乙醇，搅拌均匀，然后放置。待沉淀后，吸去上清液，沉淀物抽干，再加入20升95%乙醇，如上法洗涤2次。抽干后，摊于清洁的盘中，置烘箱中70℃以下烘干。即可作为制剂原料。说明和讨论：实践证明，本工艺与上面另一浓碱提取工艺对比，得率较高，但含量较低。有工艺用浓碱提取水化后，即缓缓用盐酸调PH值约为2.8过滤。滤液用氢氧化钠调PH值约为6.7，静置沉淀得品，再经胰酶水解，精制得精品。浓碱工艺所用氢氧化钠溶液浓度都在10%以上，有的甚至达40%以上。虽然较用稀氢氧化钠的工艺操作简便，提取时间短，但浓碱也有可能使硫酸软同h降解和影响疗效。无论哪种工艺，原料处理很重要。可将软骨在水是煮沸10分钟左右，除去脂肪和其他结束结缔组织，然后与带棱角的石子置一转筒中放置，以磨去残留肌肉，也可用胰酶处理，即每100千克原料，加入胰酶粉约8克，在温水（不超过50℃）中消化约20分钟，用水洗净后即可投料。如用生产药用胰酶后的粗酶，则每100千克原料加约1千克。用量不宜过多，时间不宜过长，否则会使有效成分损失。五、产品质量检验方法目前硫酸软骨素地方较多，尚统一。仅以上海、河南、湖南、山东、江西和四川等省、市药品标准来比较：分子式有按硫酸软骨素（C14H21O14NS）计算，也有按其钠盐（C14H20O14NSNa）计算的。因而，即使标示量彼此相同，但实际硫酸软骨素剂量并一一致。还有以含氨基葡萄糖的限量作为纯度标准的，但标示量并未规定按照什么标准计算。标准规定量方法因各地情况不同而分为重量法和比色法。前者是测定的精密度高，但专一性差，如果存在游离硫酸根与硫酸软骨素释出者无法区别。有的时间限制了游离硫酸根，从而使硫酸软骨素的质和量受到了有效的控制。在鉴别反应方面，有的规定了还原糖和氨基已糖的反应，灰化后又显硫酸根的反应，可表明本品为含氨基已糖和硫酸基的糖类。比色法首先用盐酸使硫酸软骨素水解，产生氨基已糖，在碱性条件下与乙醇、丙酮反应，再与对一二甲氨基苯甲醛反应，生成物呈红色。在其他原料标准中规定了含氮量的限度，硫酸软骨素本身含氮量为3.05%，而多余的氮则作为蛋白质、多肽及氨基酸等杂质的量。