水红花子品质相关因素及其他药用部位开发研究(可编辑)

水红花子品质相关因素及其他药用部位开发研究(可编辑) 水红花子品质相关因素及其他药用部位开发研究 辽宁中医药大学 硕士学位 水红花子品质相关因素及其他药用部位开发研究 姓名:宋捷 申请学位级别:硕士 专业:生药学 指导教师:翟延君 20100601辽宁中医药大学硕士 摘 要 目的: 本论文是国家自然基金项目“水红花子炮制前后功用的改变与物质基础变化相关性 研究项目编号:”课题的部分内容。水红花子为蓼科植物红蓼 .的干燥成熟果实,性寒、昧咸,归肝、胃经;具有散血消瘾,消积止痛功 能,主治癌瘕痞块、瘿瘤肿痛、食积不消,胃脘胀痛等症。现代药理研究表明,本品具 有抗肿瘤作用,对原发性肝癌有较好疗效。本研究内容主要包括:水红花子正丁醇部分 化学成分研究、/水红花子化学成分、水红花子品质相关因素分析、水红花 子其他药用部位的开发研究及水红花子剂型工艺研究。 通过对正丁醇部分化学成分研究,进一步完善了水红花子化学成分的研究内容,并: 建立了/分析水红花子化学成分的新方法。通过对水红花子炮制前后化学成分的 变化,来探讨炮制原理。通过考察不同储藏时间对药材质量的影响,为水红花子临床应 用的质量保证提供科学依据。通过对水红花子不同药用部位化学成分的比较及体外活性 研究,为本品的资源开发提供了科学参考。 与方法: 材料: 、药材: 含量测定所用药材购于各药材市场,详见各章。 其它药材均 .的干 自采于大连南关岭,经本校翟延君教授鉴定为蓼科植物红蓼 燥成熟果实。 、对照品:实验室自制或购买。 方法: .水红花子正丁醇部分化学成分研究:柱层析、重结晶、薄层分析、 制备液相等方法 分离,并结合光谱解析鉴定化合物结构。 ./分析水红花子化学成分:通过查阅国内外大量相关文献,收集水红花子中 分离得到的化合物数据,利用/中得到波谱数据与文献中收集得到数据进行 对比分析判断出水红花子中含有的化学成分。 .一辽宁中医药大学硕士毕业论文 .水红花子品质相关因素分析:通过高效液相色谱法分析得到的色谱图,分析水红花 子炮制前后化学成分的变化、储藏节律、..香豆酰酪胺的含量测定。 .水红花子其他药用部位开发研究:通过还原法对水红花子的根、茎、叶进行 了抗癌活性的药理分析,并用高效液相色谱法测定了指标性成分的含量。 .水红花子剂型工艺研究:通过文献收集,运用传统用药理论筛选出合理有效药物, 配伍成新的抗癌复方。通过正交试验,考察并建立最佳提取工艺与剂型。 结果: .水红花子正丁醇部分化学成分研究:从正丁醇部分共分离出个 化合物,分别为: .谷甾醇、正十六烷酸、,’.二甲氧基靴花酸、槲皮素、胡萝卜苷、对羟基.香豆 酸.对羟基一苯乙醇脂、花旗松素、.一香豆酰酪胺。 ./分析水红花子化学成分:利用/与文献对照分析出个化合物,分 别为:,,一三羟基色原酮、花旗松素、香豆酰酪胺、槲皮素、正十六烷酸、 对羟基一香豆酸一对羟基一苯乙醇脂、红草素、异红草素。 .水红花子品质相关因素分析:水红花子炮制后槲皮素的含量明显增加;花旗松素在 同样的炮制条件加热,结果产生多个副产物,槲皮素是其中之一,且含量比炮制前 含量增加。通过对储藏时间节律的考察结果表明:化学成分.一香豆酰酪胺随着储 藏时间的增加而缓慢减少,另有未知性成分也缓慢减少,花旗松素、槲皮素含量并 未发生明显的变化,故水红花子的储藏时间年内对其品质无相关。含量测定实验 结果:个商品药材水红花子中?一香豆酰酪胺含量差异明显,最高为.%,最 低为.%,平均含量为.%,其中个商品药材的含量在.%以上,仅一 个商品药材含量为.%。 .水红花子其他药用部位开发研究:通过对根、茎、叶个不同部位花旗松素、槲皮素 及..香豆酰酪胺化学成分的比较:仅叶中含有花旗松素。体外药理实验结果表明, 根、茎、叶粗提物对、.、一和细胞增殖均有不同程度的抑 制作用;对的为根茎叶,对.的为根茎叶,对一 的为根茎叶,对的为茎根叶。 .水红花子剂型工艺研究:通过文献参考结合传统用药理论筛选出最佳药物配伍制成复 方,利用正交试验确定复方最佳提取工艺为水煎煮次,加水量分别为、、 倍,煎煮时间小时。根据实际用药将复方做成片剂和胶囊方便服用。水红花子生药学研究 结论: .通过柱层析,液相等方法从水红花子正丁醇部分分离得到个化合物,经液相、、薄 层、光谱解析鉴其结构,证明实验方法有效可行。运用所分得的化合物进行活性筛 选及含量测定研究。 .首次运用/与文献对照分析水红花子化学成分,得到个化合物,证明实验方 法有效可行。由于目前/数据库还不完善,本研究深度还有待继 续。 .通过对水红花子炮制前后化学成分变化的考察,结果发现炮制后槲皮素的含量明显 增加,为释析水红花子的炮制原理提供一定的科学参考。通过对储藏时间节律的考 察,结果表明水红花子在储藏时间年内对其品质无明显影响,为临床安全用药提 供科学依据,首次为水红花子的保存时间提供参考数据。 .结合高效液相和药理活性实验结果,首次发现红蓼的叶对宫颈癌细胞具有明显的抗 癌效果,并且叶的抗癌活性强于果实,这为后续叶的开发研究提供了科学参考。 .通过对传统中药的分析结合现代药理研究筛选最佳配伍关系组成抗癌复方,考察复 方的最佳的提取工艺、最佳的服用剂型,为水红花子的新药开发提供前期基础。 关键词:水红花子;化学成分;储藏时间节律;/;其他药用部位;提取工艺辽宁中医药大学硕:匕毕业论文: ”:”. . . ; . . , , , ,?, , . : .,/,, . ?. / .. ?. . : : .一 , . . . : ?: . ? ,, . . . \ . . .: . ,. : . , . . :., .. . : : ? . , .,:, 一?.,,,。’。, ,. :一 .气.辽宁中医药大学硕士毕业论文 /:、、 . , ,??,, ,,一, .:,??. . : , ,.., .., , .. . . . . : .?, , 、、一, 一 , 曲 , . . :, ? . , ., , ,水红花予生药学研究 . :. : , . .. /、. . / . ., .. , . .? , ? . . . ? , . ; : ; ;/; ; ..辽宁中医药大学硕士毕业论文 苷士 刖 吾 水红花子自年版《冲国药典》开始收载,至年版仅有性状鉴别内容,缺 少内在质量控制方法。通过化学成分分离,筛选单体活性物质,为水红花子的质量控制 提供内在指标。水红花子多以制品入药,炮制的水红花子抗癌药效会增强,但具体的炮 制原理不明确,对炮制的作用没有内在的解释。在市场上所购买的商品水红花子都很难 明确的考证其采集时间,这样商品水红花子的质量就很不稳定。传统方剂水红花予都是 以合剂的形式入药,传统的剂型如:水煎剂、散剂、丸剂等在加工和服用的时候都很不 方便,这就需要开发新的剂型方便患者使用。在药物缺乏的现代 开发新的药源作为常用 药替代品能弥补药物的不足,而且可以开发新药用部位的新药效。 /是近代发展起来的高科技检测仪器,在西药的使用很广泛,但是很少在中药 中使用,通过实验把/和中药结合起来,考察未知化合物的结构,为中药与现代 化技术的结合提供依据。水红花子生药学研究 综述 水红花子及花旗松素药理学研究 .的干燥成熟果实,始载于《名医 水红花子为蓼科植物红蓼 别录》,原名荭草、荭草实,至《滇南本草》始命名为水红花子,是我国传统药物之一, 水红花子自年版《中国药典》开始收载【】;性寒、味咸,归肝、胃经;具有散血消 瘢,消积止痛功能,主治瘢瘕痞块、瘿瘤肿痛、食积不消,胃脘胀痛等症。现代药理研 究表明,本品具有抗肿瘤、抑菌、利尿作用【,对宫颈癌和胃癌肿瘤细胞有一定的抑制 作用【】 传统合剂临床应用 水红花子是我国传统药物之一, 《名医别录》谓“主消渴,去热,明目,益气”,未 做活血药使用。 《滇南本草》谓本品能“破血,治小儿痞块积聚,消年深坚积,疗妇人 石痛症”,指出了水红花子有活血消癖、软坚破积之功用。根据这一理论,在长期临床 实践中,老中医沈仲理用水红花子治疗子宫肌瘤、卵巢囊肿每获良效,但对血分无癖滞 及脾胃虚寒者,则又避而不用,凶其化癖力强,而又性寒【。 根据民间疗法,用水红花子茎的消食健胃、疗食积、除腹胀的作用,用于治疗胃柿 石症,竞收奇效‘卯。 近代临床应用 志贺氏痢疾杆菌和福氏痢疾杆菌抑制作用 水红花子传统用药经验较多,但对水红花子的现代药理作用研究较少,早在 年药学学报报道应用打洞法荭草果实水煎剂对志贺氏痢疾杆菌和福氏痢疾杆菌有抑制 作用】 利尿作用 用水红花子煎剂及流浸膏按/给大鼠灌胃,小时尿量显著多于对 照组 .,有实验报道水红花子是一种低毒./利尿药。其利尿机理可能是 给药后引起血液胶体渗透压的增加,使水分大量进入血液循环,导致肾小球滤过量增加,辽宁中医药大学硕士毕业论文 同时抑制了远端肾小管对水的重吸收所致【】 抗癌作用 水红花子煎剂、配剂或石油醚提取物对艾氏腹水癌腹水型及实体型和肉瘤一有 一定的抑制作用,但该项实验需进一步证樊。 水红花子的乙醇浸膏对细胞鼻咽癌上皮细胞小于.“/,为进一步 探讨水红花子抗肿瘤机理,作者以酪氨酸激酶和拓扑异构酶的抑制作用为检测指 。 标对该品部分馏分进行了抗肿瘤药理实验,发现其中部分馏分具有抑制作用【 现代临床应用报道用于治疗原发性肝癌,以水红花子配伍石见穿、三棱、莪术等组 成基础方,结合辨证论治,治疗例,年生存率为%,年生存率为耐 。水 红花子与其它药物配伍的临床新用还有:治疗肝硬化代偿期总有效率.%,阴 转率纠,治疗乙型肝炎总有效率.%【】。 抗凝血作用 另有文字记载水红花子有抗凝血作用【】。年杜可贤在贵州医药报道了用红蓼 注射液治疗冠心病,其症状有效率为.%,心电图有效率达.%,并初步发现红寥 有增加心肌营养性血流量及对抗急性心肌缺血的作用】。 水红花子致植物.日光性皮炎 植物.日光性皮炎在过去常见的有藜皮炎,是患者过多服食或接触藜灰菜或其它有 光感性的植物,并经受长期日晒后所引起的急性光毒性炎症反应,以暴露部位浮肿、瘀 斑为主要临床表现,尤其是患者有肝肾疾病、内分泌障碍、代谢异常、营养不良等病人 更易患此病?。据报道告有例因治疗慢性。肾炎”而水煎服用水红花子俗称狗尾巴花 后所致的植物一日光性皮炎【】。 水红花子茎治疗胃柿石证 胃柿石多由空腹进食大量柿子引起,因柿子中含有的柿涩粉在胃中与胃酸作用变成 粘胶状物,再与植物纤维凝结成块。这种团块既不能被吸收,又不能通过幽门进入肠道, 滞留于胃内而引起上腹部疼痛、胀满、食欲不振、恶心甚至呕吐 等症状。常见的并发症 为幽门梗阻,胃粘膜糜烂及溃疡。据报道在临床上运用水红花子茎治疗本病,收效甚佳 】 消积止痛作用 选用热板和醋酸造成锐性和炎性疼痛模型。水红花子的水提取物具有镇痛作用,尤 其是水提制品,与对照组有显著差异;醇提取物镇痛作用较差。水红花子生药学研究 在离体肠管法中,制品体现出明显的促进胃肠蠕动作用,水提制品兴奋胃肠平滑肌 作用时间持久,振幅基本一致,而醇提制品在极短时间内就回复;小肠炭末推进法亦能 证明制品具有促进胃肠蠕动的作用,而且均与对照组成显著差异。因此,水提制品在促 进胃肠蠕动方面效果更佳‘。 抗氧化作用 有相关报道研究水红花子具有抗氧化,抗衰老的作用,具体的药理作用可能是因为 水红花子里面含有花旗松素,花期松素具有明确的抗氧化作用,近代很多护肤品中都是 用了花期松素。 其他药理作用 对于红蓼地上部分药理作用的研究,除抗菌、增加心肌营养血流量外,还有抗急性 心肌缺血、扩张支气管的作用。荭草液腹腔注射可显著延长小鼠常压缺氧的存活时间, 同时能减慢小鼠的耗氧速度和提高机体在低氧状态下的用氧能力。荭草液灌流离体豚鼠 心脏和离体蛙心可使心肌收缩力减弱,心率减慢,静注荭草液可使大鼠下肢血管扩张, 血压轻度下降‘】。另有记载红蓼叶所含牡荆素有一定抗癌活一生】。 花旗松素药理作用研究 花旗松素为水红花子的主要活性成分,是一种二氢黄酮醇类化合物, 化学名为,,,一四羟基二氢黄酮醇。为一种葡萄糖苷的苷元。花旗松素具有许 多重要的生物学活性。能够抑制和激活多种酶,从而产生不同的生理效应。由于其含有 较多的酚羟基,具有抗氧化,抗辐射作用。工业上用做食品添加剂。此外,还具有抗病 毒和抗肿瘤活性。 花旗松素的生物活性及其潜在的临床价值 通过调节酶的活性,影响脂代谢:研究表明【,花旗松素能降低肝脏脂肪的合成, ?的分泌 这种作用与降低 和增加 ? ?合成和分泌的量;该细 有关。在研究中,研究者测定了 细胞中 和 胞用花旗松素初步处理后发现,能抑制细胞内胆固醇的合成,并且有剂量和时间依赖性; 还原酶的 在浓度/,观察,抑制士%。研究表明花旗松素使. 活性受到抑制土%。另外,细胞中胆固醇的酯化,三酯酰甘油和磷脂的合成也被有 分泌减少了士%,相反 效抑制。通过研究 和 ?合成和分泌发现, 一分泌增加了士%。而且证实对其分泌的影响并不在转录水平,而是影响了 降解的早期步骤,并对敏感,而对?? . .辽宁中医药大学硕士毕业论文 不敏感。设想,该蛋白分解包含~个敏感的蛋白酶,花旗松素对酶活性的影响, 可能使其成为一种有效的影响体内血脂水平的药物。另外,花旗松素还有激活磷酸二酯 酶的活性的作用【】。 对心血管的作用 花旗松素对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与药物的 抗氧化活性、抑制白细胞聚集、抑制心肌细胞凋亡和改善心功能等作用有关,且其作用 可能有一定的量效关系。此外,从本次实验中作者还认识到在临床实践中,对病人实施 溶栓、经皮介入和冠状动脉旁路移植术等治疗急性心肌梗死的过程中还需要考虑抗凋亡 处理以使再灌注引起的细胞损失减到最小,从而更有效地保护心肌免受再灌注引起的损 伤【。 对淋巴细胞的影响: 等人研究了几种天然植物黄酮类化合物对两种人类淋巴组织衍生细胞系一 和.生长的影响【。花旗松素等在~/对一和普通淋巴细胞的增 殖产生不同程度的抑制,但对非恶性细胞.无影响;且在细胞中,一水平 升高,但普通淋巴细胞中则被抑制,在.细胞中保持不变。.分泌的水平直接同 .细胞生长的抑制百分率相关。这一发现为花旗松素等天然多酚 类化合物用于治疗 恶性淋巴细胞病变提供可能。 对一细胞的影响: 等人通过 减少、非特异性酯酶、特异性酯酶、 噬细胞活性等指标,研究了种柠檬属植物黄酮诱导人类.细胞的最后分化情况, 发现种黄酮有诱导分化的特性。在/时,细胞减少%。但其中花旗 松素相比较活性最低。.细胞用这些黄酮处理治疗后分化成成熟的单核/巨噬 细胞【】。等研究还发现【,花旗松素能轻度抑制鳞状细胞癌的 生长/。在浓度/内和缓地抑制细胞生长。 对病毒酶的抑制作用: 等【研究了几种黄酮对鼠白血球增多症病毒 反转录酶活性的效应。发现花旗松素/对该病毒反转录 酶表现出极高的抑制效应。通过结构活性关系分析后发现:位和位自由羟基的存在 促进了反转录酶的抑制。年,等人采用培养的肝炎病毒, 研究了花旗松素等数种物质对感染和细胞抗体的效应,同时检测这些化合物对非感染细水红花予生药学研究 胞的毒性。在花旗松素等加入感染细胞内,引起浓度依赖的感染抗体的减少, 。 在/浓度时,花旗松素能使感染病毒的滴度减少. 对细胞内酶的影响: 等研究发现花旗松素能诱导培养的人类皮肤成纤维细胞全酶活性所有繁 殖相关的酶活性增加~倍,而不改变细胞内外酶的分布。研究结果表明,一些天然 存在的黄酮如花旗松素能影响成纤维细胞溶酶体酶的内分泌和外分泌,而且这类物 质在人体的吸收量超过,因此,这些黄酮能有效的影响正常溶酶体酶的生理学特性。 抗氧化作用: 年,等认为】,多元酚的抗氧化作用与供电子效应的难易及亲脂性 有关,并列出对两种黄酮类化合物近似的方程。通过,,分析认为 花旗松素能有效的抑制小鼠肝微粒体的脂质过氧化。等发现【】花旗松素能保 护线粒体免受过氧化基团的损伤,而对酶活性无影响。还能保护红细胞,有防止氧化溶 血作用。等研究后指出】:花旗松素能抑制活性氧和对中国仓鼠 细胞产生的细胞毒,能抑制和引起的克隆数量降低。等在研究被不同 浓度~/金属粒子,,,诱导的依赖于脂质过氧化的肝细胞 中一亚麻酸的脂羟基过氧化过程中,发现花旗松素存在铁离子浓 度 依赖的抗或进一步被氧化的活性,但对其他用于实验的金属离子只表现为抗氧化活性 【】 对小肠的影响: 花旗松素在剂量为~/时能减少肠蠕动】,这种活性能被 %%和~所抑制,但不能被阿托品等对抗。这 种效应与其分子结构有关,可能被肾上腺素.受体和钙介导。 其他活性: 除上述作用外,花旗松素还能抑制糖醛还原酶【,但对氧化酶不抑制。还 对细胞色素有较弱的还原作用,从而抑制线粒体内氧化呼吸链的传递【】。另外, 在.前突变实验中发现,花旗松素剂量为 时存在诱突变活性。 等研究发现花旗松素对鼠脑蛋白激酶存在微弱的抑制作用。此外,还可能存 在抗炎活性。 前景. 花旗松素的抗氧化特性和对不同酶活性的影响,为其在调节脂代谢、抗脂质过氧化、辽宁中医药大学硕士毕业论文 ’抗病毒、抗肿瘤等医学领域广泛应用提供了前提条件。随着对其生物活性研究的进一步 深入,必将为其在医学领域广泛应用打下坚实基础,也为其在工业领域的应用开辟广阔 空剐。 . 随着医药事业的发展,高科技运用到医药行业也越来越广泛,解释药物原理更加深 入,但是癌症还是难以攻克的难关,本文所述水红花子有很好的抗癌作用,运用水红花 子研发抗癌药物是很好的趋势。 水红花子药理作用但药效不强,作为单味药使用很难充分发挥其作用,把水红花子 作为合剂,根据需要和其他药物进行配伍一定能发挥很好的作用,为新药的开发提供线 索,为人类的健康作出贡献。水红花子生药学研究 参考文献 】《中国药典》一部.化学工业出版社:. 翟延君,张淑荣,郝宁,康廷国.水红花子研究概况】.辽宁中医学院学报, :. 赵敏.水红花子炮制工艺及其质量标准研究研究.辽宁中医药大学,:. 】包明慧,沈仲理治疗子宫肌瘤选药经验录】.中医文献杂志,,: 翟延君,初正云,程嘉艺,康廷国水红花子消积止痛药效学实验研 究【.中药材 , ,:. 南京药学院,荭草果实水煎剂对志贺氏痢疾杆菌的抑制作用.药学学报,,: : 【陈方良,水红花子药用机理研究.中医杂志,, 】雷载权,张廷模,中华临床中药学下】匕京:人民卫生出版社,: 杨国勋,宋蕾,李奎连,等.红要果实化学成分的研究】.中国中药杂志,, :? : 林宗广,治疗原发性肝癌疗效观察.新医药学杂志,, 【“张友,柔肝汤治疗肝硬化代偿期例临床观察】.北京中医,,: 邵厚地,刘玉柱,乙肝方治疗乙型病毒性肝炎临床观察.黑龙江中医药,,: . 颜正华,中药学.北京:人民卫生出版让,: 】杜可贤,伽测定荭草对小鼠心肌营养性血流量的影响.贵州医药,: :? 赵国栋,水红花子致植物一日光性皮炎例.中华实用医学 【】丰玉华,范玫,水红花子茎治疗胃柿石证】.中国民间疗法,:? 】翟延君, 初正云,程嘉艺,康廷国,水红花子消积止痛药效学实验研究.中药 材,:? 】郑兴中,荭草药效实验观察.福建医药杂志,,:辽宁中医药大学硕士毕业论文 : 】零陵地区卫生防疫站,红寥地上部分药效学研究.湖南医药杂志,, : ; 】郭晓庄,有毒中草药大辞典.天津科技翻译出版公司,:“ 【】国家医药管理局中草药情报中心站,植物药有效成分手册.北京:人民卫生出版 社,:. 】 . ,? . ,. 】. : ., 【】 , . . ,:? . , 【】 ?】. ,.:. . 一 , , ,,:. 】.. ? , ,. ,.:?. . . 】 . 】.,,:. ., , . ,,:?. . , 】 , ?? ?? ,,:?. . , , .,, . :?. ..水红花子生药学研究 . , ,, ,. :?., , 【 . 】. ?,,:?. .? 】 , , ?? ??? . ,,一:?.. ?, , 】 , , :? , . :. ., , ? , , , ? . ,:?. 】师智勇,孙宗全,王国华,花旗松素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.华 中医学杂志,:. 】乔华,谢銎,张晓云,花旗松素的生物活性及其应用.中草药,,: ? ..辽宁中医药大学硕士毕业论文 第一章水红花子正丁醇部分化学成分研究 .的干燥成熟果实,始载于《名医 水红花子为蓼科植物红蓼 别录》,原名荭草、荭草实,至《滇南本草》始命名为水红花子,是我国传统药物之一; 性寒、味咸,归肝、胃经;具有散血消瘢,消积止痛功能,主治瘢瘕痞块、瘿瘤肿痛、 食积不消,胃脘胀痛等症。水红花子自年版《中国药典》开始收载【。迄今为止, 国内外对水红花子中的化学成分进行了一定的研究,其所含成分主要为黄酮类化合物, 此外尚含木脂素类、芪类等【】。目前已从水红花子中分离得到个化合物。现代药理研 究表明,本品具有抗肿瘤、抑菌、.利尿作用【,但是没有能真正能具体说明什么是水红 花子的有效成分。本实验对水红花子的正丁醇部分进行了化学成分分离和结构鉴定。 第一节化学成分的提取分离 实验材料 .药材炮制方法 水红花子购于沈阳市药材公司,经本校翟延君教授鉴定为蓼科植物红蓼 .的干燥成熟果实。与中国药典版一部正品相符【。 取水红花子生品,置于可加热高压缸中,缓慢加热分钟压力达到,骤 放压至爆花,去种仁,取壳粉碎实验用【】。 .仪器 高效液相色谱仪安捷伦科技,紫外检测器安捷伦科 技,一型超声波清洗器昆山禾创超声仪器有限公司,一 .万分之一 分析天平北京赛多利斯仪器系统有限公司,十万分之一分析天平北京赛 多利斯仪器系统有限公司,.一型水浴锅北京市永光明医疗仪器厂,离心 机。粉碎机。 :..型自记式分光光度计辽宁中医药大学中心实验室 :一型核磁共振光谱仪辽宁师范大学分析测试中心、 ?一型核磁共振光谱仪辽宁师范大学分析测试中心水红花子生药学研究 :红外分光光度计辽宁中医药大学中心实验室 熔点:型显微熔点测定仪北京第三光学仪器厂,温度计未校正型液相色谱一质谱联用仪辽宁师范大学分析测试中心、 辽宁师范大学分析测试中心 .试剂 甲醇、乙腈为色谱纯天津科密欧试剂有限公司,水为重蒸水,其他试剂均为分 析纯天津科密欧试剂有限公司。薄层层析硅胶、。.目硅胶青 岛海洋化工厂出品、聚酰胺?、柱层析用?目、.。? 目青岛海洋化工厂出品。大吸附树脂一青岛海洋化工厂出品。反相硅胶日 本富士化工出品。葡聚糖凝胶一北京易慧德购买。中性氧化铝青 岛海洋化工厂出品。 .实验方法 .药材的提取 称取水红花子果皮炮制后除去种仁,用粉碎机粉碎三次,过目筛,用 %乙醇回流提取三次,每次提取小时,滤过,合并提取液,减压浓缩回收溶剂,得 到乙醇浸膏,将浸膏混悬于水中,相继分别以石油醚、醋酸乙酯、 正丁醇萃取数次,得 石油醚部分浸膏,醋酸乙酯部分浸膏,正丁醇部分浸膏和水溶解部分浸 膏,着重对正丁醇部分进行分离鉴别。 .正丁醇部分分离 取正丁醇部分浸膏甲醇溶解,用硅胶目拌样,挥干溶剂备用。 取目硅胶加入适量纯氯仿搅拌浸透,装入柱子。上样后用氯仿:甲醇 :,:,:,:,:,:,:,:,:,:甲醇,不 同梯度洗脱,柱子接下来的各部分样品经反复处理后得到个单体化合物,即化合物, ‘ 化合物?,化合物?,化合物?,化合物?,化合物。 水红花子炮制品化学成分的分离流程:辽宁中医药大学硕士毕业论文 %乙醇回流提取 压回收溶剂 圈卜圈 巨囫圈 打孔吸附树脂乙醇.水不同梯度洗脱 兰 化合物? 化合物? 化合物? 一.水红花子生药学研究 上器翟娥隰四。: 氯仿.甲醇 : 土篙甲醇 上凳甲醇 上 上凳甲醇 流份 流份 流份 流份 醇 脱 纯 滤 化合物 化合物?化合物 化合物?固 凝胶 洗脱 化合物辽宁中医药大学硕士毕业论文 第二节化合物的结构鉴定 ..一谷甾醇正十六烷酸 ’一? ,’一二甲氧基靴 花酸 槲皮素 胡萝卜苷 . ,一卜二, 心冬/ ..水红花子生药学研究 化合物: 无色的针状结晶,:.。。?反应成阳性,加入一 谷甾醇对照品后熔点不下降。并与一谷甾醇对照品共薄层,在种 展开系统石油醚. 乙酸乙酯:、三氯甲烷一甲醇:、环已烷一丙酮:,相应值分别为.、 .、.一致,显示相同颜色的斑点。确定其分子式为卯。 综合以上理化性质和波谱数据,鉴定化合物其结构如下: 化合物: 白色粉末状固体,溶于甲醇,%硫酸乙醇溶液显紫色,并且溴甲酚 蓝溶液显黄色, 表明该化合物含有羧基,香草醛硫酸溶液不显色,该化合物可能 为脂肪酸类化合物【】 .~ ,中: .,,.为甲基质子信号,在 ?辽宁中医药大学硕.上毕业论文 .,处为脂肪链上的质子信号, .,六重峰,.为亚甲基质子信 号, .,,. 为连于羰基上的亚甲基质子信号。 ? ..区域 ,中:万.为一羰基碳信号,在 内给出肪链上的若干碳信号, .碳信号,说明该化合物为长链脂 肪酸 ,其 综合以上理化性质和波谱数据,鉴定化合物为正十六烷酸 结构如下: 化合物? 淡黄色粉末,.?。反应阳性,示酚羟基的存在。反应阴性, 示非苷类化合物。 .: .,显示为活泼氢信号,推测为质子。 .,,. ’显示为芳香氢信号;.,,显示为质子信号。 ?.,:共给出个碳信号,推测有对称结构。.、.、.、 .、 .、 .、 .为芳香碳信号;.为的碳信号。 化合物的.、谱数据与文献报道,’一二甲氧基鞣花酸基本一 致【】。 根据以上数据确定化合物为 水红花予生药学研究 . . . 化合物? 黄色粉末溶于甲醇,.。。反应呈阳性,可能是黄酮类化合物。 反应呈阴性,示非苷类化合物。 ,:., ,., ,显示为苯环上 , 两个间位偶合的氢,该信号推测是黄酮化合物.和一质子。., ., .,该信号显示为苯环上偶合系 .,., 统的个氢,其中., .,.’和., .,.’为两 个邻位偶合的氢;., ,.’和., .,.’为两个 间位偶合的氢;故推测是黄酮化合物环上的偶合系统。 ,:共给出个碳信号。其中.为羰基碳信号;.、 ..辽宁中医药大学硕士毕业论文 .、.、 .、.、.、.、.、.分别为个含氧芳碳信号;.、 .、.、.、.为芳香碳信号。故推测为黄酮化合物。 该化合物?的.和.谱数据与文献上报道的槲皮素基本一致【。与 槲皮素对照品共薄层为同一个斑点,并且混合熔点不下降。根据 上数据确定化合物?为’ 槲皮素分子式为,.和数据和归属。. . ? ..水红花子生药学研究 化合物: 白色粉末,..~。。可溶于甲醇一氯仿:,难溶于甲醇,氯仿。 反应阳性,示分子中含糖,.反应阳性蓝色,示有甾体母核。 谱图显示:.,的信号为烯碳上质子信号,.,,. 可能为葡萄糖端基质子信号,.说明该糖为.葡萄糖。.,、. ,,.、.,、.,均为甲基信号,..处 多组质子信号为不同的亚甲基和次甲基信号。 谱图显示,化合物共有个碳信号,谱图显示,其中.、 .、.、.、.为甲基信号,.、.、.、.、.、.、.、.、 .、.、.、.为亚甲基信号,.、.、.、.、.、.、.、 .、.、.、.、.、.为次甲基信号,其中.次甲基信号、. 亚甲基信号信号的出现,提示分子中可能存在一分子葡萄糖,其 它各碳信号与. 谷甾醇的碳信号基本一致。 将化合物的?、”.数据与胡萝卜苷的文献数据比较【】,二者一致, 故鉴定化合物?为胡萝卜苷,。 ..辽宁中医药大学硕士毕业论文 化合物?: 白色无定形粉末,分子式为,溶于甲醇,.。 .谱图显示:.,,.,.,,.为’‘系 统,为苯环上的氢。.,,.,.,,.为与苯环相连双 键上单氢,并连有。.,,.,.,,.。同样为 ’系统为’ 系统,为苯环上的氢。.,,.,.,, .为与苯环相连双键上单氢,并连有?。 ?谱图显示,化合物?共有个碳信号,,.为羟基碳信号。., .,.,.,.,.,.,.为苯环上的碳信号。.,.为 苯环烯烃碳信号,.,.为苯环烷烃碳信号并提示结构中可能有脂 键。 化合物?的.、.谱数据与文献报道对羟基.香豆酸一对羟基 苯乙醇脂基本一致【】。根据以上数据确定化合物?结构 为:???????? ‘ ? 。 . ..水红花子生药学研究 合物?: 黄色粉末溶于醋酸乙酯一丙酮,.。反应呈阳性,表明可能是黄酮 化合物。反应呈阴性,显示为非苷类化合物。 ,., ,该信号显 ,:., 示为苯环上两个间位偶合的氢,故推测是黄酮化合物.和.质子。., ,该信号显示为苯环上 ,., ,., 偶合系统的三个氢,其中., ,一’和., ,一’为 两个邻位偶合的氢;., ,.’和., :,一’为两个间位偶合的氢;故推测是黄酮化合物环上的偶合系统。., 和., 构成反式二直立系统,该信号显示为二氢黄酮醇的两个直立反 式氢。并且和都是绝对构型羰基和环在同一平面上。 .,:一共给出个碳信号。其中.为羰基碳信号;.、 .、.、.、.为个含氧芳碳信号;.、.、 .、 .、.、 .、.、为个芳香碳信号;.和.为脂肪族碳信号。故推测为二氢黄酮化合 物。 化合物?的.、谱数据与文献上报道的花旗松素基本一致四。根据 以上数据信息确定化合物?为花旗松素。 .?辽宁中医药大学硕士毕业论文. . 。,紫外灯下有暗斑,三氯化铁一铁氰 化合物?:白色结晶甲醇, 化钾反应阳性。分子式:。 ,一比中:.,,.,两个活泼质子信号; .,,/. 为一组苯环对位羟基取代所形成的 ,.,,,. 一水红花了生药学研究 ’ 系统中的质子信号;.,,,. ,.,,/. 组苯 环对位羟基取代所形成的’’系统中的质子信号;.,,乒.,.,, .为一对反式双键的特征质子信号;.,,.毋为酰胺基团中连在氮 原子 上的氢;;.,和.,皆为亚甲基上的质子信号。 ,一比中共给出个碳信号:其中.、.、.、 .、.、 .、.为一 .、.为一组香豆酰基碳信号;.、.、 组对羟基取代苯结构片段中的信号;.、.为两个亚甲基碳信号, 且.应与酰 胺基的氮原子相连。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献进 行对照【】,鉴定化合物 ?为,其结构如下:’ 。 ’ ???????? ? ? 一一辽宁中医药大学硕士毕业论文 小结与讨论 .本实验通过柱层析,液相等方法从水红花子正丁醇部分分离得到个化合物,经液 相、薄层、光谱解析鉴定出个化合物的结构。 .由实验中分离得到的化合物可以看出花旗松素、槲皮素是黄酮类成分,黄酮类化合 物是许多中草药的有效成分,具有许多生物活性。大量实验研究表明,黄酮类化合物有抗 炎、调节免疫、抗衰老作用,其作用机制与其抗自由基或抗氧化有关。 .虽然迄今为止真正开发上市的黄酮类药物并不多,但是其保健效果和市场销量已经 预示了其强大的市场潜力,而且已发现的植物黄酮至少有几千种,可以相信,今后将会 有更多的黄酮类物质陆续被开发成为新型保健产品和药品,其市场前景无限广阔。在这 样的形势下对水红花子的化学成分进行研究价值和意义是巨大的。 .由于实验条件有限,本实验仅从水红花子中分离得到了个化合物,这些化合物并 不能完全代表该药材的性质,对药材化学成分的分析也是很浅薄的,需要进一步深入的 , 研究。水红花子生药学研究 第二章/分析水红花子的化学成分 液质联用/是指液相色谱与质谱串联的技术。是目前分离复杂体系最 为有效的分析工具,由于其仪器自动化、普及化程度愈来愈高,已成为中药分析最常用的 仪器之一。但目前中药分析中运用的仪器绝大多数与或检测器相联接, 对于单个色谱峰仅能提供保留时间及紫外图谱等信号,而对未知成分所能提供的结构信 息相当有限。是一种高灵敏度的检测器,且不同化合物的特征性强,可用于部分解析未 知化合物的结构。中草药是一个非常复杂的化学体系,其中含有大量的次生代谢产物,其 结构复杂,性质相似,有的化合物还不稳定。/将的高分离效能与 的强大 结构测定功能组合起来,为中药化学成分的快速分析提供了一个重要的新技术【】。本 实验利用/技术对水红花子果实、根、茎、叶的化学成分进行了系统的分析【】 第一节数据整理 实验仪器 高效液相色谱仪安捷伦科技,紫外检测 \安捷伦科技, 器安捷伦科技,.型超声波清洗器昆山禾创超声仪器有限公司, ..万分之一分析天平北京赛多利斯仪器系统有限公司,十万分之 一分析天平北京赛多利斯仪器系统有限公司,..型水浴锅北京市永光明 医疗仪器厂。 试剂与药品 甲‘醇为色谱纯,水为重蒸水,冰醋酸,其他试剂均为分析纯。实验所用的对照品均 由本实验室自制,结构经波谱鉴定高效液相色谱归一化法纯度%以上。水红花采集于 .的干燥成熟 大连南关岭。经本校翟延君教授鉴定为蓼科植物红蓼 果实。 方法与结果 .色谱条件辽宁中医药大学硕士毕业论文 . ,脚;流动相为甲醇一水%冰醋酸 色谱柱为 梯度洗脱::,:,:,:;检测 波长为 .;流速为. ?;柱温为;迸样量为此。 .对照品溶液的制备 精密称定对照品适量,加甲醇加甲醇溶解即得。 .供试品溶液的制备 取水红花子、根、茎、叶药材粉末 ,精密称定,置圆底烧瓶中,精密加入甲醇 ,放冷,称重,加甲醇补足重量,滤过,续滤液经. ,称重,回流提取 微孔滤膜滤过,即得。 化合物数据统计 目前国内外对水红花的研究有很多,其中有很多是关于化学成分 方面的,本实验通 过查阅国内外大量的文献,收集并整理了目前从水红花子、水红 花子根、水红花子茎、 水红花子叶片中所分离得到的化合物,通过表格列出相关的结构 和分子量四见下表。 表.?水红花子分离得到的相关化合物水红花予生药学研究 . 一一一一一 /?‰ . ,一 ,,。三羟基色原酮 . ?一香豆酰酪胺 . 槲皮素 . 花旗松素. 胡萝卜苷 . 正十六烷酸 .?辽宁中医药大学硕士毕业论文 .. ,’一二甲氧基靴 花酸 . ? 一一 对羟基一香豆酸.对羟基. 苯乙醇脂 . ,’一?? 一? ,’一二甲氧基鞣 花酸.一.?一吡喃 葡萄糖苷 . ?一一 阿魏酸一对轻基苯乙醇 酯水红花子生药学研究 . 一?? 花旗松素.一??一葡萄 、 吡喃搪苷 、 ., .山奈素.?一鼠李吡 喃糖苷 .? 柯伊利素? 一葡萄吡 哺糖苷 ? . ?. 一辛烯..醇 ?.. ..