益生菌和酸奶对乳糖不耐受者结肠菌群作用研究

益生菌和酸奶对乳糖不耐受者结肠菌群作用研究 益生菌和酸奶对乳糖不耐受者结肠菌群作 用研究 第35卷第5期 2006年9月 卫生研究 JOURNALOFHYGIENERESEARCH Vo1.35No.5 Sep.2006587 文章编号:1000—8020(2006)05—0587—05 益生菌和酸奶对乳糖不耐受者结肠菌群作用研 钟燕黄承钰何涛HarmsenHMJVonkRJ 四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,成都610041 ? 论着? ?.''''''''一' 宓达能营养中心! DKNONE矾娜1I'IECHINA 青年科学工作者论坛! iYoungScienlistsFccum! ?l1..?|_?1.?I1???'.??_?I' 摘要:目的研究补充益生茵和酸奶对乳糖不耐者结肠茵群的影响.以经25g乳糖负荷试验筛 选的乳糖不耐受者11名为对象,让受试者持续摄入益生茵(含B.1ongum)和酸奶(含Banimalis,L. bulgaricus,S.thermophilus)14天进行补充研究.试验分3阶段:即补充前阶段7天,补充阶段l4天,补充后阶 段7天.在补充阶段开始前1天和结束后1天分别进行乳糖不耐受负荷试验, 受试者不耐受症状并评 分.在试验阶段收集受试者的新鲜粪便样本共5次,采用荧光原位杂交技术(FISH)和变性梯度凝胶电泳技 术(DGGE)检测补充前,补充期间和补充后粪便样本细菌总数和各主要菌群的数 量构戍,以及外源性和内源 性双歧杆菌菌种分布.结果在补充益生菌胶囊和酸奶后受试者乳糖不耐受症状评 分均显着降低(P< 0.05).补充期间细菌总教和主要细菌组 (BifMobacteria,Bacteroides-Prevotella,Eubacteria,Ruminccocc等)的数量 均显着高于补充前(P<0.05),双歧杆菌的数量在补充结束后7天仍显着高于补充 前(P<0.05),其他几组细 菌数量在补充结束后下降;DGGE结果显示来自益生茵胶囊和酸奶的双歧杆菌菌 种在补充期间能够在受试 者肠道内检出,但个体间存在较大差异.结论益生菌胶囊和酸奶中的双歧杆菌能够 耐受胃肠的酸碱环境 在结肠内存活和繁殖,并影响内源性双歧杆菌和其他细菌组的教量,改变结肠茵群 的构成,尤其以双歧杆菌 更为明显.这对减轻乳糖不耐受症状起到重要作用. 关键词:乳糖不耐受益生菌酸奶结肠茵群 中图分类号:Q533.3R574.62文献标识码:A Effectofprobioticsandyogurtoncolonicmicroflorain subjectswithlactoseintolerance ZhongYan,HuangCheng—yu,HeTao,HarmsenHMJ,eta1. DepartmentofNutritionandFoodHygiene,WestChinaSchoolofPublicHealth,SichuanUni versity,Chengdu610041,China Abstract:ObjeetiveTostudytheeffectsofprobioticsandyoghurtsupplementationoncolonic microflorainsubjects withlactoseintolerance(LI).MethorsElevenlactoseintolerantvolunteersdeterminedby"2 5glactosechallengetestwere recruitedandgivensupplementationwithBifinacapsule(withB.1ongum)andyogurt(withB .animalis,L. bulgaricus,S.thermophilus)for14days.Thetrialwasdividedinto3phases:7-daybasalperiod.14一day supplementationperiodand7-daypost— supplementationperiod.Twolactosechallengetestswereperformed1daybefore and1dayaftersupplementationperiodrespectively,andlactoseintolerancesymptomswererecordedwithquestionnaires. Fivefecalsampleswerecollectedduringthetria1.andtotalbacteriaandseveralmaingroupsofbacteriaincolonwere analyzedbyfluorescenceinsituhybridization(FISH).TheshiftofBifidobacteriumspeciespopulationincolonwas analyzedbydenaturinggradientgelelectrophoresis(DGGE).ResultsItwasfoundthatL1svmptomwasalleviated significantlyaftersupplementation(P<0.05).Theamountoftotalbacteriaandthemaingroupsofbacteria (Bifidobacteria,Bacteroides— Prevotella,Eubaaeria,Ruminccocc,eta1.)wassignificantlyincreasedduringthe supplementationperiod(P<0.05).TheamountofBifidobacteriaduringpost— supplementationperiodwassignificanfly higherthanthatofbasalperiod(P<0.05),whiletheamountofotherseveralgroupsofbacteriadecreased.TheresuItof DGGEshowedthattheextraneousBifidobacteriaspeciesfromBifinacapsuleandyoghurtcouldbedetectedinfecalsamD1es duringsupplementationperiod,howevertherewasdiversitybetweenvolunteers. ConclusionItwassuggestedthat extraneousBifidobacteriainBifinacapsuleandyogurtcouldresisttheeffectofgastricacidandbilesaIt,andsurvivein 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No302"/1126) 作者简介:钟燕,女,博士,现工作单位上海交通大学医学院营养系 1通讯作者 2Groningen大学,荷兰 588卫生研究第35卷 colon.Supplementationofprobioticsandyogurtcouldinfluencethecolonicbacteria,andinc reasethenumberofmain groupsofcolonicmicmflora,especiallyforBifidobacteria,whichcouldplayimportantrolei nalleviatingLIsymptoms? Keywords:lactoseintolerance,probiotics,yogurt,colonicmicmflora 持续摄人益生菌和酸奶之后,受试者的乳糖不耐受症状 显着缓解,小肠乳糖酶活性,肠转运时间并没有显着改变,而 结肠B一半乳糖酶活性显着增高.提示益生菌和酸奶对乳糖 不耐受的改善作用不是小肠因素而可能是结肠因素. 相关研究显示,乳糖酶缺乏者能够更好地耐受酸奶等发 酵乳制品,除了与酸奶本身的物理特性有关外,更重要的是酸 奶中含有的活性乳酸菌,可能通过影响结肠内源性菌群的构 成,而调节乳糖在体内的代谢过程. 本研究采用荧光原位杂交(fluorescenceinsitu hybridization,FISH)和变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradientgelelectrophoresis,DGGE)分析补充含双歧杆菌的益生 菌胶囊和酸奶l4天后,对结肠细菌总数和主要菌群数量构成 的影响,以及内源性和外源性双歧杆菌菌种分布的变化,以探 讨外源性益生菌和酸奶对改善u者症状的结肠作用机制. l材料与方法 1.1主要仪器 LeieaDM/RXA荧光显微镜(Leiea公司,德国);Leiea Quantimet-6OOHR成像分析系统(Leica公司,德国);PCR仪 (Eppendorf,德国);电泳仪(Bio—rad,美国);变性凝胶电泳全套 装置(INGENYphorU一2,IngenyInternationalBV,荷兰). 1.2主要材料和试剂 酸奶(25g/杯,含L.bulgaricus,S.ttrermophilus和8. animalis173010,10cfu/g,上海达能酸乳酪有限公司一法国达 能集团提供);Biflna胶囊(含B.1ongum,2.2×10/粒,Jintan 公司,13本);"C一乳糖(由荷兰乳制品研究所提供,荷兰);PCR 缓冲液(10mmol/LTris—HC1,2.5mmol/LMgCl,,50mmol/LKC1): dNTP}昆合物(10mmol/L,pH7.0);银染溶液(0.5gAgNO,250ml 1×Carlos缓冲液);显色溶液(250ml1.5%NaOH,750/~l甲醛). 1.3对象 乳糖不耐受者l1名(男5名,女6名,年龄23,54岁),经 乳糖负荷试验症状评分>10分.受试者身体健康,在试验前 3个月未服用过抗生素,前2个月未服用过泄剂.实验前3天 开始禁食天然富含"c一乳糖的食物,如蔗糖,玉米,菠萝及其 制品.乳糖负荷试验前1天晚餐集中进食,避免食用牛奶及 其制品,豆制品,葱,蒜及其它富含纤维素的食品等;试验前至 少禁食12h.在益生菌和酸奶补充期间,要求受试者尽量不 改变饮食习惯. 1.4方法 1.4.1实验试验分3阶段:即补充前阶段7天,补充 阶段l4天,补充后阶段7天.在补充阶段,受试者每天摄人3 次酸奶,每次1杯,三餐后饮用;同时给予Bifina胶囊,每次3 粒.在补充阶段开始前1天和结束后1天分别进行2次"c一 乳糖负荷试验.在补充前阶段,补充阶段和补充后阶段分别 收集2次,2次和1次新鲜粪便样本,同时通过问卷记录受试 者在补充期间摄人Bifina胶囊和酸奶后不适症状和排便 次数. 1.4.2"C.乳糖负荷试验受试者在试验日清晨空腹摄人 250ml含25g"C一乳糖的溶液,记录受试者摄人乳糖后24h内 出现的腹部不适症状(腹胀,腹痛,腹泻)及其严重程度,同时 记录受试者的健康史,饮奶史,一般状况(年龄,身高,体重 等).腹胀,腹痛,腹泻的评分系数分别为2,3,4;症状严重程 度分类如下:(1)腹胀,腹痛:0无症状,1轻度不适,2中度不 适,3重度不适;(2)腹泻:0大便正常,成形,1疏松软便,2稀 水样便.症状评分(SSC)为摄人乳糖后12h内各症状评分系 数与其严重程度乘积之和. 1.4.3FISH技术分析粪便样本细菌数量采用硬质密封塑 料袋收集受试者的新鲜全便,要求处理前在4?下密闭保存 时间不超过12h.预处理后的样本用4%多聚甲醛固定保存. 杂交处理和计数方法在Franks等报道的FISH技术的基础 上加以改进.采用Quanti—met自动荧光显影计数系统对涂 片后的样本进行细菌计数,该系统由LeicaDMRXA荧光显微 镜和LeicaQuantimet一600HR成像分析系统两部分组成.表1 列出本研究所用的探针和对应的靶细菌,以及探针序列. 表1计数粪便样本细菌所用的探针,对应靶细菌以及探针序列 Table1The16SrRNA—basedprobes.theirtargetgeneraorspecies.probesequences NameofprobeTargetgroupSequence(5—3) DGGE技术分析结肠双歧杆菌的菌种构成提取粪便样本 中的细菌总DNA准确称量0.5g粪便样本,加入4.5ml磷酸缓 冲液,700g低速离心1min,取上清液500/~l高速离心5min (14000g),并弃去上清液留沉淀.按文献报道方法提取细菌 总DNA,产物进行琼脂糖凝胶电泳观察DNA提取结果. 歧杆菌特异性PCR扩增将提取的细菌DNA稀释l00倍 后进行PCR扩增.反应体系如下:5l缓冲液,5lMgC1,4/11 dNTP,引物分别为Bif164一f(5GoGGTAAITFccGGArC3)和 Bif662一GC—r(5CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGG- CACGGGGGG-CCACCGTrACACCGGGAA3)各ll,TaqDNA聚合 酶0.5l,llDNA提取物,加入去离子水使终反应体积达 第5抽钟峨.等益生荫和酸坍对乳糖不耐受者坫腑菌群怍研究 50.1IPER扩增条件为:96?空性15rain.35次循环反应(96: 45min.62:2min,7221nJ.72't-延伸5min 粪便样本PCR增物进行IR~,GEH=R扩增产物采用 INGEN'~DhorU.2电泳系统世,仃DGGE,电溶采J=I19%阿烯酰胺 凝胶.变性剂屎素,甲酰胺的浓度梯度范嘲为40%一80% 12V电压下点样.在85V.60~E条件下屯泳16h电泳完成后, 采用硝酸镶法进行银染,薄膜密封睦.数码成像 箍生藩腔囊和馥奶中双歧杆菌的PCI~,扩增和UGGE咐上述方法提取益生菌睦囊和酸奶中总细菌DNA与样奉一趁进 行双赋扦茁特异性PER扩增和DGGE. 统计丹析实验数据采用SPS-Sl0.O软件进行方差分析. 殂歧杆蘸结果数据不符台正态分竹i因此采刖秩合硷膛 2结果 2.1朴充前后乳特不耐受症状比较 丧2比较丁两救"(:一乳糖鲺荷试骑6h内的胃嘶道症状评 舒结果显示.}}充盏t菌睦囊和酸奶后受试者的各种 状评分和症状评分均显着降低 裹2朴充前后两次"c.乳暗负荷试验的乳孵不耐受症状评分 Table2L~eloseintolerancesymptomsbeforeand afftersupplementation[/I=11.?} 2.2补充益生菌胶囊和酸奶对结肠菌群构成的影响 EUB338探针汁数的细萄总数,BAC303探针计数的拟扦 蒴一菅氏菌属,I~wge2P探针计数的一组与prausni~7棱苗相 关的真细菌属,RflalRbro探针汁数的赠胃球菌属,援蘸属的数 最在补充阶段第l4_天时显着高于基础值(P<().05).在补充 阶段第7天和终止补充7天后的平均数量高于基值但无显着 性差异REC482探针计数所得的直晒真杆蓖f球形棱菌菌属 在补充阶段第7天和第14天均显着高干基值(P<0.05).补 充终止7灭岳高于基值怛无显着性差异BIFI64探针计散的 双歧扦菌属在补充阶段第7天和第l4天以煦终止补充7天 昏数量均显着高于基值(P<0.05.表3). 表3采用FISIt技术分析扑充前后结晒纲菌总数和几组主要细菌属的数量 Table3Thenumbertotalb~~terimandthepredominelltbacteriainfecesanalyzedbyFISHtec hninh咕 ppIm*_ltaIi0.IandpOSl?supplementationperbods{=11) {"?bn【qum-lile.[1.{2Jm口dwitht触F~rks:lP<005 2.3补充益生菌胶囊和酸奶对结肠双歧杆菌菌种分布影响 酉I,周2图3是对l1名受试对象粪便样奉进行双蛙杆 菌特异性PCR扩增后,PCRtr增.物进行I'tGGE的结果每 j盎幢上同时乜括不同种双止壹杆菌菌种组成的标样作打标 准盟Bifina胶囊和睦奶中积歧扦菌PCR扩增产物的电淋 带,补觅前,对象,V的样车叶】无阳性条特,时象1?,? ?,旺有I.2条非常淡的条惜.对象珊?,?X有多条较 清晰的荣带,{三要驳歧轩菌两种为bre~.e,Blong~m.B bifidumBpset~docaterutlnttam等,个体f}l】条心敷壁和颧色陡 牟在差异}}充1=援期n1】.际对象l?外.外9名对象舳 }羊率rp出观米自酸蚋的.ctnbtlm电辣条带;对象JV ?,?出现了补充前所彼有的米臼Bifina性囊的loag~-条 栉,性是颤色较浅;对象1m?,?X侄补充前已有诲景 {苷,补充后持续存并n电非条带觑也n盯椿,.补充结求7d 电泳条带的讣市补充前较一致.条带觏色有加豫.所有对象 的Battinlalis条带消失..r条带根据剥象补充前是 否存在而消失或颜色壹洼;将DGGE结果FISH计数结果进 行比较.发现无阳性条带或条带较涟的样丰的HSH汁数往往 勾胡性或数量撒fIl 3讨论 凡群研究发现.1.1症状的出现与结肠代谢哭系密切.尤 其是站弱菌群起着非常重要的作用蛤乳糖不耐受者 YBMI2]4567B910lI1213l4I5 lY灯酸.LBBLfi~腔壤.1…由M…rk. 1amel一5埘象I.Lane6一If)为对象『1l11—15埘象? 囤1试验对象I一?粪便样本双歧杆菌特 异性PCR扩增产物的DGGE电诛结果 Hg.1DGGEnsIllt0fBbifidobacterialgenusspecificPCR preduetsfromvolunleer1I 酸奶或扦他发酵乳制品可能逋l过改善结掰菌群ifl=『缓解? 症壮.但目前尚缺乏^群宴验研究的有力据 3.1益生菌和酸奶对结腼酋群构成的作用 难研究录用HSH技术分析朴宽益生苗和酸奶对u耆站 胼菌群构成的影响.陔方法可以克服传统培养法的缺点,具有 更高的准螗性和特异性,本曝组已成肋将其用于成人结髓 菌群的丹析 生研究第35卷 hneY为酸奶.L皿eB,Bifina脏蠢.LaneM为标准blaAcr, L【,5为对豪.LIe6一j0为对象.hartr_l—l5为埘象? l…l6,2【'为耐泉? 圉2实验对象百一?粪便样本双歧杆菌特异 性PCR扩增产枸的DGGE电泳结果 Fig.2lieGEresull0fBJfidobacter/a/gcaussperil]cPCR prt~luctsfromvo!unle~r?IO? YBMI23456789l011】213l4I5I6l718I920MBY LaneY酸奶.I…B斯Bil]lla瞍鞋.I…M却杯准Md |l一5为时釜哪.farlI6一jil对象I.1d"II,l5象I larl~I6一10时复 囤3实验对聋礓一?粪便样本飙歧扦菌特异 性PCR扩增产蝴的l~d3E电泳结果 Fig-3DGGEresultofBifrdo~+'terialgenusspectrePCR produc~frOllflvolunleer+llto 结果显示.补允益生闰和酸奶一段时问之后受试荇站肠 细菌总数和各主要细苗届t拟扦茵部分梭菌属,细菌积歧 扦苗,痼胃球菌等)均显瞢增加玮中双止,杆菌在补充第7 时就显着增加,划翦总数和其地JL虮细菌的数量增加相对 缓悭,补觅第l4天娃蔷商f垫愠;乳酸摘和链球菌数量银 低或者来被检1值得强意的是.终止补j=三后7.收雌杆 菌的数量仍继续增加,耐椰菌总数千【『其他几组细陌的数量开 始F降高于二基蝗但无盟菩性燕辟.说l珂补免蓝'菌和酸奶利 站腑菌群的怍m具有宅的持续性.圮其对孤歧补葡呐影向 更为持九 3—2益生酋和酸奶对结腼双歧杆菌菌种构成的作用 目前为止已经发现主要有12种嘏歧杆蔺茁种在^体内 寄居.其中用f益生菌功能性产品的主要是舟f呼tB 删m缸和B哪.这些嫂歧杆菌对凡体建康起着重要 的肓益作用 补充益生茸胶囊和酸奶『l通过增J]l1.1~道内盘生茁数量 ~til.体产L有益髟响…研究显现.除部舒报歧杆菌和乳酸 n菌外.太多数箍隹苗在通过上消化道时,舍由于胃酸和胆盐 的作用亡". DGGE电淋结果显示,在补充之岳有9名受试者粪便中 出现来自酸奶的Banirnaiis菌种.有4名埘象粪便中出现来 目Bifina胶囊的B.~ongum菌种,此结果说明来自醴奶和益生 前皎囊的j觋歧杆菌能够耐受胃酸,瞪盐和消化酶的作用井在 结晒【;l_I存活和繁殖,但存在个体差异造成这种差异的原因 叮能与多种I哥素有关.如个体肠道内环境的影响.以及饮食习 惯等对十充补源性益生菌作用技晕的影响等,补充结束7天 后,所有对象粪便样本中的B.aaimatis条带均为阴性,来自 Bifina股囊的.m条带根据党前谈最带是否存在而 为阴性或条带颜色变拽.提示在停止外振性补充的情况下, 这些外源牲l嘎歧扦苗菌种不能在结腑内继续存活. 率试验中FISH计数结果显示在补充结束7天后双歧杆 菌的总数量继续增加,提示补充益生菌和酸奶可能对结肠内 环境发生影响从而有利于促进内源性双歧杆菌的生眭,这也 解释r为什么即使此时补繇性双歧杆菌来儿肠道中柱出.但 是FISH计数的总驭歧杆菌数量仍是增加的在整个宴验期 闻.个体的内豫性双歧杆菌菌种种类保持相对稳定.从开始补 克到补充结乘.这些内源性菌种的电泳条带颜色加深.说明他 仃1的数量增加 3.3益生菌腔囊和酸奶中益生茵作用效果的比较 研究结果蛙现.尽管酸奶中的活苗数?o|ck)低于 I~.ifina胶囊(2.2x10,粒),但在干预之后更多受试者粪便样本 叶I?现来自酸奶的B.attima~i+菌种c分别是9名和4名),提 口."nl町能比B扣?胶囊中的B璃在悼内的存 活能高奠咏田一方面可能是酸奶具有的缓冲作用可以 更魏地护积歧杆菌通过上消化道并存活;另一方面,也可 能与两种菌种以外源形式补充时在体内的存活和增殖能力不 同有关.这方喵尚缺乏其他文献报道该结果对觞生菌功能 性产品的奸发具有一定的意义 乖研究结果表明,米自旋生菌胶囊和酸奶的补振性双歧 轩能够耐受胃酸和小肠内胆盐和消化酶的作用,在结肠内 存晒和誊砧.虾影响内源性双歧杆菌和其他细菌组的数量,对 缓解乳精耐受症状起卸重要柞用,个体间存在一定差异;干 预结束之后这外簖【性菌种往往从体内消失.IH他们对内源 菌群的作用Il_能持续存在一段fl寸间 4参考文献 IY.PdebeMG.VonkR.I.elTilemlc0f(1Ioni…ni-,bI?Hin ,I…r,h|lmDDisJ.200.1.49:78. 2Rizk~llaS'IuoJ.K~birMalCh~nu:n…mpti?tInchhll llolheaL<+,J"?1+ntp++~vt,sbreath—hydrt}l~en【u目andsh,m—chainl" uipM6l…'mI耐1】d…h?帅withurlthoul1龇t. mmldigcstkm^mJClin^tl2000,72:I471479 3l中燕.贾承钰.明主娅.等.用双标稳定同位豪技术舟析乳糖酶 缺乏昔小肠牯膜乳糖酶活性卫生研究.2,34:3【2,31b 4Fmnb^H.H丑HJM.T'ariatJo~ofleria[Io砌rioihu删 feet,s…nn…nlin-?hybtldlzation出舯叩.pecl6165 一{NA|laL"Iol/g~mucleotideI删b^IlEnvi~mMicmhiq1.I998. 643336-3345 5钟燕.荑承钰,VQnkRJ,等膻州荧光原位杂文拄术分析乳情不 黼受吉站肠苗群营养.媚.25:4l4_411 第35卷第5期 2006年9月 卫生研究 JOURNALOFHYGIENERESEARCH Vo1.35No.5 Sep.2006591 文章编号:11300.8020(2006)05—0591—03 荧光定量RT—PCR快速检测A型流感病毒 李莉房师松吴春利程小雯何建凡刘涛 深圳市疾病预防控制中心,深圳518020 ? 论着? 摘要:目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法.方 法根据A型流 感M2基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立,优化 反应体系后,利用十倍稀 释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线并与普通RT—PCR法进行比较; 特异性检验后进行临床标 本的检验.结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10,TCIDs.,标准曲线相 关系数为0.999,扩增效 率为108,5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳 定性,重现性和特异性. 结论本研究建立荧光定量RT—PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度 高,稳定性好,而且可以 对病毒滴度进行定量检测. 关键词:A型流感病毒荧光定量RT-PCR快速检测 中图分类号:R373.1文献标识码:B RapiddetectionofinfluenzavirusAbyfluorescencequantitativeRT—PCR LiLi,FangShi—song,WuChun—li,ChengXiao-wen,etal, CenterforDiseaseControlandPreventionofShenzhen,Shenzhen518020,China Abstract:ObjectiveTodevelopamethodtorapidlydetectinfluenzavirustypeAbyfluorescencereal—time quantitativeRT-PCR.MethodsAccordingtoconservativesequenceofinfluenzavirustypeAM2gene,apairprimersand Taqmanprobeweredesigned,respectively,Afterthequantitativecurveoftheassaywereestablishedusingtenfoldserial dilutionofTCIDso,thesensitivityandthespecificityofclinicsamplesweredetermined,ResultsThedetcectionsensitivity oft}Ieassaywas2.56× 10-'TCID50andtheregressioncoefficientofthequantitativecurvewas0.999.Thespecificitywas determinedbytestingfiveotherspecimens,allofwhichyieldednegativeresults.ConclusionThedetectionsystembased onreal— timeRT-PCRwasrapid,sensitiveandsteady,whichcouldbeusedtodetecttheclinicsamples. Keywords:influenzavirusA,fluorescencequantitativeRT-PCR,rapiddetection A型流感病毒在自然界广泛存在,从人,猪,马等哺乳动 物及水鸟等各种鸟类中都能分离到A型流感病毒.特别在 鸟类,所有的HA和NA亚型均能分离到.A型流感每年的发 病率和死亡率都非常的高,而且传播速度很快,容易造成大面 积的爆发流行:1918年西班牙流感(H,N型)大流行曾经夺去 了2000万人的生命".因此,流感病毒的快速诊断不仅对于 及时治疗而且对于流感爆发的鉴别都具有相当重要的意义. 对于流感病毒的鉴定分型一般采用传统的鸡胚培养分 离,血凝抑制法,操作繁琐,费时费力,不利于在基层单位推 广.本研究采用实时荧光定量RT—PCR法对A型流感病毒进 行快速检测,建立了一种快速,准确,简便的病毒鉴定技术,利 于推广使用,特别对流感爆发疫情的应急处理具有不可比拟 的优势. 6GeorgeD,DiGiovanni,LidiaS,eta1.Fingerprintingofmixedbacterial strainsandBIOLOGgram-negative(GN)substratecommuni'des9 enterobacterialrepetitiveintergenicconsensussequence—PCR(ERIC. PCR).CurrMicriobiol,1999,38:217.223 7Rwland1.Probioticsandbenefitstohumanhealth一.theevidencein10 favour.EnvironMicrobiol,1999,1:375—376 8MatsukiT,WatanabeK,TanakaR,eta1. Distributionofbifidobacterial speciesinhumanintestinalmicrofloraexaminedwith16SrRNA—gene.11 targetedspecies-specificprimers.ApplEnvironMicrobiol, 1999,65: 基金项目:广东省科技计划项目(No.2003C20217) 作者简介:李莉,女 4Ll6—45l2 SatokariRM,VaugbanEIE,Ant~nDL,eta1.Bifidobacterialdiversitv inhumanfecesdetectedbygenus—specificPCRanddenaturinggradient gelelectrophoresisApplEnvironMicrobiol,2001,67:504—513 PelletierX,Laure—BoussugeS,DonazzoloY.Hydrogenexcretionupon ingestionofdairyproductsinlactose-intolerantmalesubjects:importance oftheliveflora.EurJClinNutr.20o1.55:509—512 KotzCM,FumeJK,SavalanoDA,eta1.Factorsaffectingtheabilityof ahi【shp—galactosidaseyogurttoenhancelactoseabsorption.jDairySci, 1994.77:3538—3544 (2005.07—21收稿)