[doc] 紫外分光光度法测定海蟑螂中腺苷含量

[doc] 紫外分光光度法测定海蟑螂中腺苷含量 紫外分光光度法测定海蟑螂中腺苷含量 — ChinJ — MarDrugs,2005February,Vo1. 24No.1中国海洋药物杂志2005年2月第24卷第1期 紫外分光光度法测定海蟑螂中腺苷含量 宣伟东,卞俊,曾华武,肖靖 (海军药学专科中心.上海200434J 摘要:目的建立海蟑螂中药理作用成分腺苷的含量测定方”2x.方法海蟑螂全体经37”C水温浸提取,硅胶 薄层层析分离,用紫外分光光度法于260nm处测定腺苷吸光度.结果在1. O,2O.0g.mL一的范围内腺苷 的浓度和吸光度呈良好线性关系(r—O.9998,n一6),平均回收率为99.3%(RSD=1. 9%,n一3).结论本法 简捷,准确,适用于海蟑螂中腺苷的含量测定. 关键词:海蟑螂;腺苷;紫外分光光度法;含量测定 中图分类号:R917文献标识码:A文章编 号:1002—3461(2005)01—0040—03 DeterminationofadenosineinLigiaexoticawithultraviolet spectrophotometry XUANWei—dong,BIANJun,ZENGHua—WU,XEAOJing (ResearchCenterofPharmacy,Navy,thePeople’5LiberationA,Shanghai200434, China) Abstract:ObjectiveToestablishaUVmethodofdeterminationofadenosineinLigiaexotica. MethodsAdenosinewasextractedwith37? waterandseparatedbyTLCsilicagel.theab— sorbancewasdetectedat260nmwithUVspectrophotometry.ResultsThecabibrationcurve foradenosionwaslinearwithintherangeof1.O,20.Og?mL_.,r一0.9998(n 一6),the averagerecoverywas99.3,RSD=1.9(n一 3).ConclusionThemethodwassimple,con— venientandaccuratefordeterminationofadenosineinLigiaexotica. Keywords:Ligiaexotica;adenosine;ultravioletspectrophotometryassay 海蟑螂Ligiaexotica(Roux)属甲壳 纲,海蟑螂科,又名海蛆,海岸水虱,水陆两 栖,长年生活在海岸边.有消积,活血,解毒 之功效.在沿海地区民间常以海蟑螂为主 药,经瓦焙干炮制后,采用口服或外敷,用于 跌打损伤,消肿止痛,或治小儿疳积,痈疮肿 毒.本中心曾对海蟑螂的药理活性进行研 究,其提取液经动物实验证明具有显着的消 炎止痛作用[1].经对其有效部位进行成分分 析明,海蟑螂全体中含有较高的腺苷成分, 可能与其药理活性有关.本文采用紫外分光 光度法测定海蟑螂中腺苷的含量,为海蟑螂 的药用开发提供质量控制依据. ? 40? 1仪器与试药 岛津UV一240紫外分光光度计;海蟑螂 采集自浙江舟山市沿海,经本中心蔡定国主 任药师鉴定为节肢动物门,甲壳纲,海蟑螂科 海蟑螂Ligi10mL,于37?水浴中温浸 24h,过滤,残渣加蒸馏水10mL再温浸24h, 过滤,合并滤液,4O?真空干燥浓缩至约 lmL,转移至2mL容量瓶,蒸馏水定容得海 蟑螂提取液[1].用微量注射器取该提取液 80L,点样于10×20cm薄层硅胶板上,以氯 仿一醋酸乙酯一异丙醇一水(8:2:6:0.5)为展 开剂,腺苷品为对照,直立上行展开.紫 外灯下后,刮取与标准样品Rf值一致的 斑点硅胶,置10mL带盖试管,精密加入 5mL蒸馏水,剧烈振摇2min后,以3000r? 图1腺苷测试品和标准品的紫外吸收光谱 min离心30min,小心吸取上清液,即得测 试样品溶液[2,3].标准样品溶液和测试样品 溶液在200~320nm范围内进行紫外扫描得 紫外图谱(见图1),由图可知样品紫外吸收 图和标准样品重合良好,表明样品中其他成 分对吸光度几乎无干扰. 2.3线性关系 精密量取标准品溶液,配制成浓度分别 为1.0,4.0,8.0,12.0,16.0,20.Og?mL_1 的腺苷溶液,以蒸馏水为参比,于260nm处 测定吸光度,结果见表l.以浓度(g? mL_1)为纵坐标Y,吸光度为横坐标X,绘制 标准曲线(见图2),回归后得浓度一吸光度线 性方程: Y一17.2406X一0.2323r一0.9998 显示在1.O,2O.Og?mL_1的范围内, 腺苷的浓度和吸光度呈现良好的线性关系. 0020.406l f衄nn” 图2腺苷吸光度一浓度标准曲线 表1腺苷标准品吸光度值 1.0 4.0 8.0 12.0 16.0 20.0 0.068 0.238 0.493 0.712 0.934 1.172 0.068 0.239 0.493 0.712 0.934 1.173 2.4精密度与稳定性试验 取腺苷标准品溶液,加水配制成浓度为 5g?mL_.,以水为参比,于260nm处测定 吸光度.重复平行测定5次,得到吸光度值 RSD为0.629/5.另取该腺苷标准品溶液,以 水为参比,每隔lh测定吸光度,重复平行测 定9次,得吸光度的RSD为0.61.结果 显示本试验方法精密度良好,标准品溶液在 8h内有较好的稳定性. 2.5样品测定 ? 41? Chin.,MarDrugs,2005February,Vo1. 24No.】中国海洋药物杂志2005年2月第24卷第1期 按测试品溶液制备方法制备3批测试 品,以水为参比,于260nm处测定吸光度值. 另取含量分别为2.0,6.0ptg?mL-1的腺苷 标准品溶液,依法测定吸光度,以外标二点法 计算得到测试品腺苷浓度,经换算得海蟑螂 中腺苷的含量(见表2). 表2海蟑螂腺苷含量测定结果 2.6加样回收率试验 取已知腺苷含量的海蟑螂粉末(批号: 021126)1.0g,共3份,精密称量,加入腺苷标 准品,按测试品溶液的制备方法提取并制备 测试液,按样品测定方法测定吸光度并求得 腺苷含量,计算回收率,结果见表3:RSD为 1.9. 表3回收率试验结果 样品量标准品加入量回收率平均回收率RSD (g)(g)()()() 1.02240097.9 1.oo750098.699.31.9 1.24560o1o1.5 3讨论 本文采用硅胶薄层层析结合紫外分光光 度法测定了海蟑螂中腺苷的含量.海蟑螂活 性成分经温浸提取,薄层层析分离后得到的 测试品溶液和标准品溶液的紫外吸收图谱完 全一致,表明测试品溶液中主要成分为腺苷, 可以排除其他成分的干扰.本法灵敏度高, 简便易行,可用于海蟑螂药材的质控及药理 筛选的方法之一. 参考文献: [1]中国人民解放军第四一一医院.海蟑螂活性成分的提 取方法[P].中国专利.1253780.2000—05—24. [22毛丽珍,阙沛红.虫草一中华束丝孢中腺苷的含量测定 [J].中草药,1993,24(9):467. [3]徐汝明,陆阳,陈泽乃.紫外分光光度法测定贝母中腺 苷的含量[J].中国中药杂志,1996,21(9):556. (收稿日期:2004—03—08) ? 42?