偶氮胂Ⅲ—EDTA吸光度下降法测定血清钙

偶氮胂Ⅲ—EDTA吸光度下降法测定血清钙 偶氮胂?—EDTA吸光度下降法测定血清 钙 7j)生1毒珐叫绦叫乏虔下睥 第l3卷第3期 1998年9月 川北医学院Vo[13,No.3 JOURNALOFN0RTHSICHU.~NMEDICALCOLLEGESep1998 偶氮胂?一EDTA吸光度下降法测定血清钙 蒋兴亮 (川北医学院附属医院捡验科637000) 目前,偶氨肿?比色法测定血清钙由于简 便,灵敏,快速等优点.已广泛用于II盎床实验室.但 此法无论是酸性条件下,还是在碱性条件下,均采用 吸光度上升法.而无法扣除血清空白,尤其是脂血, 溶血及黄疽时对测定的影响.采用偶氨胂liT—ED— TA吸光度下降法可克服上述缺点.其原理为血清 钙与偶氮肿?在酸性条件下形成紫色络合物.加入 适量EDTA后,生成EDTA—Ca络合物.使偶氮胂 ?游离.吸光度下降,其下降幅度与钙浓度成正比. 1材料和方法 1.1试剂?偶氮胂?试剂.称取偶氮胂? l15.0rag.pvpl0g,溶于1000rrdPH6.8,Trls缓冲液 中.混匀后加入10mmol/LEDTA—Na20.5ml.? 起始剂.10mmol/LEDTANa2. 1.2仪器ColasEMlRA全自动生化分析仪.CL 一 770型半自动生化仪. 1.3方法?自动分析.C,~htsEMlRA生化分析 仪条件为双试剂,终点法,温度37?.波长650nm. 反应方向为吸光窟下降.显色液300u1.血清或标准 3ut,50S时读取吸光度A1,第75S时加入10mm~/1 EDTA20ul,125S时第二次读取吸光度A2,计算两 … 吹吸光度差值AA=A1一A2,据公式i×2.5=钙 mmol几.?手工分析.标准管.测定管及空白管各 加入2.5mmol几钙标准液.待测血清,去离子水各 20ut,各加显色剂2.0rrd.混匀.650nm波长比色B 管调零.记录吸光度A1.各管加10retool几E1)一 TANa230ul,混匀,B管调零.如上比色.记录吸光度 A2.计算×2.5=钙mmol/L.’ 2讨论 2.1暇收光谱钙标准与待测血清呈色后干CL一 770型生化分析仪上,以B管调零.进行自动扫描, 结果610mm和650nm处均有吸收峰.考虑到 650nm处B管A值较低.故选用650nm作为测定波 长. 2.2显色剂中EDTA用?的选择由于试剂及蒸 馏水中杂质成分较高.所配显色液空白吸光度一般 92? 廷6一,,2 为0.6左右.加入一定量E矾后吸光度降为03 左右.显色剂中EDTA—Na2为15um~t/L时可使试 剂空白降到最低.又不络合待测血清中的钙. 2.3偶氮胂?浓度的选择配制一系列浓度不同 偶氨肿?显色液.于CL一770分析仪上测定试剂空 白A值(I.X水调零).反应液A值(以试剂空白调零) 两种A值随浓度的升高而升高.当达到150tm-,ol/L 时,反应液A值趋于恒定,而空白A值继续上升,故 选用偶氮胂?浓度为l5otm-,ol/L. 2.4PH值的选择配{6jPH50--7.5的显色剂, 于CL一770型生化仪上测定空白A值(以水调零) 和钙—偶氮胂?络合物嗳光度(以空白嗣零),结果 表明,PH6.8时试剂空白A值最低,测定管A值最 大,PH大于7.0时.镁干扰测定,故选用呷.0. 2.5EDTA浓度在显色液中加入不同浓度的 EDTANa2,当其浓度为100umol/L对,试剂空白吸 光度最低,再增加EDTANa2的量,试剂空白吸光度 不变,其浓度为l00,800tnnol/L时结果一致. 2.6线性试验本法测定血清钙的线性范围为 05,5.0mmol/L.Y=0.992x+007,n=5.0, r09991. 27回收试验在钙为l50mmol/L的混合血清 中加入0.5,1.0,150rranol/L钙标准,测得回收值 分别为049,0.99.152mmol/L.回收率分别为 980%.99.0%.1013%,平均99.4%. 28重复性试验取高,中,低不同含量定值血清. 每份平行测定20次.批内cv为1.5%--20%.上 述三份血清于上午,下午各测定一次,计l0天共20 趺,得批问CV为1.81%,2.51%. 29千扰实验?胆红素的干扰:于混合血清中加 入不同含量胆红素,测定加入胆红素前后血清钙;结 果胆红素在500urnol几内不干扰测定.?脂血干 扰:加入不同量脂肪乳剂于血清标本中.当lnterripid 达40g/L时不干扰测定.?溶血干扰:于混合血清 中加入不同量血红蛋白.当血红蛋白浓度高达15g/ L时,测定结果未见明显干扰: 2.10方法对比取50份临床标本其中黄痘标 第13卷第3期 1998年9月 川北医学院Vo1.13.No.3 JOURNALOFNORTHSICHUANMEDICALO3LLI~ESep1998 Rh血型D因子检查和凝聚胺 交叉配血试验的临床应用 扬虹何培朴 (四】II省南充市中心医院637000) 血型鉴定和交叉配血试验是保障临床输血安全 的常规性的重要工作.我科在严格进行输血病人 A肋血型系统鉴定,盐水交叉配血的同时.自1996 年9月起对输血病人开展了输血前Rh(D)因子检查 和凝聚胺(MPT)低离子介质交叉配血两项新的常 规技术.现介绍如下. 1材料和方法 1.1试剂抗D血清,抗人球蛋白由中国医学科 学院输血研究所生产.MPT试剂盒由台湾东耀企 业有限公司生产. 1.2标本来源于本院临床输血病人. 13方法?Rh血型(D)因子检查按照《输血技 术手册》所示方法操作.?MTP交叉配血.按试剂 盒#说明#操作和判读结果. 2结果 2.1Rh(D)因子检查共239O例,其中Rh(D)阳性 者2388例(阳性率9992%),Rh(D)阴性者2例, (阴性率0.08%).检测结果显示我院输血病人Rh (D)阴性率(0.08%),略低于正常汉族人群(0 34%)但仍不可忽视. 22MPT法交叉配血与盐水交叉配血对比试验了 5257例,结果完全一致均为阴性.MPT法交叉配 血相合的5257例患者输血后,无一侧因免疫性抗体 引起输血反应. 3讨论 Rh血型系统是与ABO血型系统无关的另一重 要血型系统.其在输血中的重要性仅次于A肋系 统.正常人血中一般不存在Rh天然抗体,所以第 一 软输血时往往不会发现Rh血型的不合.Rh阴 性病人输人Rh阳性的血渍后可产生免疫性抗体, 当病人再次输人Rh用性的血液后可出现溶血性输 血反应.而其中大部分输血反应都是由抗D抗体 引起的. 鉴于D抗原在Rh血型中抗原性最强.出现频 率最多,对临床影响最大,我科开展Rh(D)因子检 查,使受血者的Rh血型在输血前得到确认以便及 时为受血者选好血型相合的供血者.这一工作的开 展对需要反复输血的患者如”自身免疫性贫血.再生 障碍性贫血,白血病,多次妊娠的孕妇等等,非常重 要,是保证安全输血的重要的一环. 凝聚胺交叉配血技术(MIX)是一种快速检涮 不完全抗体的方法,具有敏感性高,操作简单,快速, 结果明显等优点目前国外已广泛用于交叉配血, 输血前抗体筛选.笔者采用MPT交叉配血与盐水 交叉配血,增加了临床输血的安全系数,使我院的输 血质量得到了进一步提高,有效地防止了输血反应 的发生.(gt稿日期:1998-05-28) 本7份,胆红素67—391tmaol几;脂血标本4份.甘 油三酯8,15rarno[/L;溶血标本5份,血红蛋白浓度 为2.5,12/L.钙浓度范围1.52,372mn~[/ L,同时用此法及Roche公司试剂盒测定钙浓度,回 归方程为:Y幸击=0991XRoche~_+0.09,相关系教 为0990,可见两法测定结果里高度相关. 用偶赢胂?比色测定血清钙方法灵敏,试剂稳 定,操作简便,但因无法扣脒本底对结果的影响不适 宜于脂血,黄疸及溶血标本血钙测定,否则引起较大 误差.本文参考有关文献l013了以偶赢胂? 为显色剂,EDT.A_Na=为起始剂,采用吸光度下降法 作血清钙涮定.克服了因脂血,黄疽及溶血造成的 误差,使其适宜于各种标本中钙的测定.本法手工 及自动分析仪均可采用.实验表明线性范围,精确 度及灵敏度可满足实验室要求. 参考文献 I胡望平,等.血清钙测定的甲基百里香酚蓝试刑中舔加 掩蔽卉鼍的研究.临床检驻杂志I987;5(4):184,185 2擦国宴,等.octx,一EDTANa~吸光度下降法测定血清中 钙中华医学检验杂志1990;13(4);2O0,202 3畦大粱.等.偶氨肿?单一试剂测定血清钙,1995;I3 (5j:251,252(gt稿日期:1998.034)5)