HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量

HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量 HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪 麻黄碱的含量 HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量 广西桂林食品药品检验所(541002)阳志云饶伟文 摘要:目的在现有方法的基础上进一步 优化各种条件,建立简便,快速,准确的 能同时测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪 麻黄碱含量的高效液相色谱法.方法色 谱柱:Diamonsil—C250mm×4.6ram, 5in);流动相:乙腈一0.2%磷酸一三乙 胺(3.8:96:0.2);流速:lm1.min,; 柱温:30?;检测波长:207nm;进样 量:20l.结果盐酸麻黄碱,盐酸伪麻 黄碱质量浓度线性范围分别为104.3g. ml一一521.5g.ml(I1=12,r=1), 101.1g.ml一,505.5g.ml(n=12, r=1),平均加样回收率分别为103.14% (n=6,RSD=0.76%和102.98%)(n=6, RSD=0.98%).结论本法能同时测定麻黄 中麻黄碱和伪麻黄碱两种成分的含量,快 速准确,重现性好,优于药典法,可用于 麻黄药材的质量控制. 关键词:高效液相色谱法;盐酸麻黄碱; 盐酸伪麻黄碱;麻黄;含量测定 《中国药典》2005年版一部收载的麻 黄项下的含量测定中仅控制了麻黄碱…, 而已有文献报道的测定方法存在着样品提 取步骤多,耗时长,溶剂毒性大,流动相 配制繁琐等问题,笔者在现有方法的基础 上,经系统研究,优化了供试液制备方 法,流动相系统等,使本法既简便快速, 又能同时测定麻黄中麻黄碱,伪麻黄碱两 种成分的含量,效果满意. 1仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪(美国 Agilent公司),BUT2030—40—06超声波 清洗器(必能信超声上海有限公司), GZX,DH—BS电热恒温干燥箱(上海跃 进医疗器械厂),GR一202电子天 平(日本AND公司).盐酸麻黄碱对 照品(ephedrinehydrochloride)(批号 171241—200506)盐酸伪麻黄碱对照品 (pseud0ephedrinehydrochloride)(拈c号 171237—200505)均购自中国药品生物制 品检定所;麻黄药材产自甘肃,经笔者鉴 定为草麻黄EphedrasinicaStapf的干燥全 草;乙腈,磷酸,三乙胺均为色谱纯,水 为纯化水,其余试剂均为分析纯. 2HPLC测定方法的建立与验证 2.1供试液制备方法的优选 2.1.1提取溶剂的选择比较了?甲醇, ?50%甲醇,?95%乙醇,?20%乙醇, ?1mo1.L盐酸一20%乙醇(1:10), ?1mo1.L盐酸,?本文流动相等7种溶 剂,结果用?,?,?号溶剂提取的供试 液的色谱峰峰形好,杂质峰少,其中?的 提取率最高,故选其作为提取溶剂. 2.1.2提取方法的选择在取样量相同的前 提下,以测得样品的峰面积为指标,比较 了索氏提取,回流,超声等提取方法的提 取效率,结果回流提取效果最差,索氏提 取和超声提取效果相当,而超声法提取更 简便,故选之.见附1. 2.1.3提取时间的选择用超声法提取,仍 以峰面积为指标,比较了3种提取时间的 图考》中日:土大黄"性凉""治无名 肿毒,杀虫".功效偏于解毒杀虫. 《陕西中草药》所述"土大黄"(牛 西西),味苦酸,性寒,具有活血,散 瘀,止血,清热,解毒,通便的功能. 功效近似于大黄.《民间常用草药汇 编》所载"土大黄"(牛耳大黄),味 酸苦,性寒,功效略同于牛西西.动物 试验表明土大黄具有收缩毛细血管的作 用,牛西西则具有缩短血液凝固时间, 治疗血小板减少症的作用及祛痰,止 咳,平喘的作用.牛耳大黄除具有祛 痰,止咳,乎喘的作用外,尚有抑菌, 抗肿瘤作用.因此将三者混淆使用是欠 妥的.值得一提的是,1974版《北京市 中药饮切制规范》规定土大黄的药材来 源为蓼科植物巴天酸模Rumexpatientia L的根(牛西西).这一规定已欠准 确,而1986年重修《北京市中药炮制 规范》时又在此基础上新增一药材来 源"蓼科植物皱叶酸模Rumexcrispus L.的根(牛耳大黄)",使其药材来源 更趋复杂. 从以上分析可以看出,牛西西及牛耳 大黄被冠以"土大黄"之名出现的籍, 均为现代中草药文献.由于中医的方剂大 多源于历代医家的经验集成,中医师遣方 用药时,也经常借鉴前人的经验,因此, 建议中医师在引用前人的经验遣方用药 时,一定要先考证其出处和年代,并根据 当今的用药规范,准确书写药名,以保证 用药的准确有效.如果药材名称模糊不清, 则难免用药不准,甚至贻误病情.鉴于目 前北京所用的土大黄药材来源分别为蓼科 植物巴天酸模RumexpatientiaL的根(牛 西西)及蓼科植物皱叶酸模Rumexcrispus L.的根(牛耳大黄),建议在新修订的 《北京市中药饮片炮制规范》中将旧 版中的土大黄重新命名,即将蓼科植物巴 天酸模RumexpatientiaL的根命名为"牛西 西";将蓼科植物皱叶酸模Rnmexcrispus L.的根命名为"羊蹄根"或"牛耳大 黄".同时,另增"土大黄"条目(《中 药大词典》中所载蓼科植物土大黄Rumex madaioMak根).希望以上建议能对临床 合理用药有所帮助. 参考文献 1江苏新医学院.中药大词典().上 海:上海科学技术出版社,1977,80, 423 (20091131收稿) 2010.02(下)I首都医药.P.T^L栩皇53 提取率,结果表明超声处理30分钟以上, 已基本提取完全,故本实验采用超声处理 3O分钟.见附表2. 2.2流动相的选择比较了流动相:?乙 腈一0.2%磷酸水溶液(4:96);?乙 腈一0.02mo1.L磷酸二氢钾溶液(含0.2%三 乙胺,磷酸调pH值2.7)(2:98);? 乙腈一0.1%磷酸(9:87);?乙腈一0.2% 磷酸一三乙胺(4:96:0.2),结果显示采 用流动相不仅基线稳定,且能使各色谱峰 达到良好的分离,120min的图谱显示55min 后再没有其他特征峰出现,故选为本实验 流动相. 2.3系统适应性试验色谱柱:Diamonsil— Cl8(250ram×4.6mm,5.0m);流动相:乙 腈一0.2%磷酸一三乙胺(4:96:0.2); 流速:1m1.rain,;柱温:30?;检测波 长:207nm;进样量:20l.在此色谱条件 附表1不同提取方法的效果比较(n=2) 下,盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱可达到良 好的分离.理论板数大于6000. 2.4拟定的测定法 2.4.1对照品溶液的制备精密称取盐酸麻 黄碱对照品10mg及盐酸伪麻黄碱对照品 10mg置同一100ml量瓶中,以lmo1.L盐 酸一20%乙醇(1:10)为溶剂溶解并稀释 至刻度,摇匀,精密量取2ml至25ml量瓶 中,加流动相稀释至刻度,摇匀. 2.4.2供试品溶液的制备取麻黄细粉约 0.2g,置具塞锥形瓶中,精密加入上述溶 剂25ml,超声处理(220v,50Hz)30分 钟,用45汕m微孑L滤膜滤过,即得. 2.4.3测定法分别精密吸取以上两种溶液 各20l,注入液相色谱仪,依法测定. 2.5方法学考察 2.5.1线性关系考察取盐酸麻黄碱对照品 溶液(104.3g.ml),盐酸伪麻黄碱对 54I2010.02(下)l首部医药c?^L— 照品溶液(101.1g.ml),分别进样1, 23,45810,,5203040 5Ol,记录色谱图,以峰面积对进样量 进行回归,得到盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄 碱回归方程分别为:y=0.0005x一0.0008. Y=0.0004x+0.0091;质量浓度线性范围分 别为104.3,521.5g.ml(r=1,n=12), 101.1,505.5g.ml..(r=l,n=12). 2.5.2精密度试验取对照品溶液,连续进 样6次,每次2Ol,测定盐酸麻黄碱及盐 酸伪麻黄碱的峰面积,其RSD分别为0.41% (n=6),0.53%(n=6),表明精密度良好. 2.5.3重复性试验取同一批样品,照 "2.4"项下的测定法,分别测定6次,结 果盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄碱的含量值的 RSD分别为1.1%,1.21%,表明方法的重复 性良好. 2.5.4稳定性试验取同一供试品溶液分别 于0,2,8,14,43,58,82h进样20l, 测定盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄碱的峰面 积,结果RSD分别为1.92%,2.01%,表明 供试品溶液在82h稳定性良好. 2.5.5回收率试验精密称取麻黄细粉0.1g, 分别精密加入523g.ml盐酸麻黄碱对照 品溶液,252g.ml盐酸伪麻黄碱对照品 溶液各2ml,依法制备供试品溶液,测得 盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄碱的平均加样回 收率结果分别为103.1%和103%.见附表 3,附表4. 2.6本法与药典法比较取同一批样品按本 文方法及《中围药典》2005年版一部收载的 麻黄项下的含量测定方法测定盐酸麻黄碱含 量,两种方法结果基本一致,见附表5. 3讨论 本文通过对供试液提取条件,流动 相优选等系统比较研究,重新建立了麻黄 中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定 方法,操作简便,所用试剂环保,结果准 确,各方面指标均优于药典法,具有推广 应用价值. 参考文献 1国家药典委员会.中华人民共和国药典 一 部[S].2005,223,224 (20091201收稿)