瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究Ⅳ 含氮及其它类化合物（可编辑）

瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究Ⅳ 含氮及其它类化合物（可编辑） 瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究? 含氮及其它类化合物 天然产物研究与开发 2003 Vo1. 15 No. 1 NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMEN T 9 瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究 ?: 含氮及其它类化合物 3 何祥久 邱 峰 姚新生 沈阳药科大学中药学院 辽宁 沈阳 110016 摘 要 在药理活性指导下 ,利用各种化学和色谱手段从瓜蒌薤白白酒汤 活性部位中分离得到 10 个化 合物 ,通过化学及波谱手段鉴定了它们的化学结构 ,分别为 thymidine 1 ,adenosine 2 ,2 ,3 ,4 ,92tetrahy2 dro212methyl21H2pyrido[3 ,42b]indole232carboxylic acid 3 ,2 ,3 ,4 ,92tetrahydro21H2pyrido [ 3 ,42b ]indole232 β carboxylic acid 4 ,D2tryptophan 5 ,syringin 6 ,daucosterin 7 ,stigmasterol232O2 2D2glucoside 8 ,succinic β acid 9 , 2sitosterol 10 。 关键词 瓜蒌薤白白酒汤 ;活性成分 ;含氮化合物 瓜蒌薤白白酒汤是汉代名医张仲景的著名经典 道。鉴于上述研究现状 ,计划用我们研究中药复方 [2 ,3 ] 方剂 ,出自《金匮要略》 ,主治胸痹。在临床上 ,瓜蒌 的思路 ,对瓜蒌薤白白酒汤的活性成分进行研 薤白白酒汤主要用于冠心病、 心绞痛、 急性心肌梗 究 ,以期能阐明其作用的物质基础及组方依据。 塞、 心律失常及心肌炎等疾病 ,是中医治疗心血管系 在活性指导下我们对此复方进行了系统分离。 [1 ] 统疾病的重要方剂 。国内外 ,人们对其研究主要 我们从此复方的活性部位正丁醇层中分离到 10 个 局限于临床和药理活性研究的报道 ,而对其基础研 化合物。通过化学及波谱学手段 ,对这 10 个化合物 究特别是此复方发挥作用的物质基础研究尚未见报 进行了结构鉴定。 小板聚集仪。 1 实验部分 制备型 HPLC为 LC210 日本分析工业株式会 111 仪器与材料 社 ,示差检测器。色谱柱为 Econosphere C 22 18 熔点在 Yanaco 显微熔点测定仪上测定 未校 mm ×250 mm , Alltech , USA ,流动相为 MeOH2 正 ,NMR 在 500 MHz 核磁共振仪上测定 , IR 在 H O ,流速 6 ml/ min。HPLC用熔剂为色谱纯 ,其余 2 Bruker 红外测定仪上测定。柱层析和薄层层析用 溶剂为分析纯。 硅胶为青岛海洋化工厂产品 ,ODS和 Sephadex L H2 中药栝楼和薤白购自辽宁省药材站 ,由沈阳药 20为 Pharmacia 公司产品 ,预制硅胶板为 Merck 公 科大学中药学院孙启时教授鉴定为 T richosanthes 司产品。上海医科大学博高实业公司 M G2196 型血 ki rilow ii .和 A llium m acrostemon Bge. 。 112 化学成分的提取分离 收稿日期 :2002209202 修回日期 :2002209216 栝楼 15 千克和薤白 10 千克混合 ,用 10 倍量的 3通讯联系人 Corresponding author1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd All rights reserved. 1 0 天然产物研究与 开发 2003 Vo1. 15 No. 1 [4 ,5 ] 60 %乙醇回流提取 3 次 ,合并 60 %乙醇提取液 ,减 献 报道 Thymidine 的数据 ,发现化合物 1 的数 压回收溶剂得提取物浸膏。浸膏用水溶解后 ,依次 据与其基本一致。因此化合物 1 鉴定为胸腺嘧啶脱 用等体积的乙酸乙酯、 水饱和正丁醇萃取 3 次 ,得乙 氧核苷 Thymidine 。从该化合物的二维图谱分析 酸乙酯层、 正丁醇层和水层等三部分。经抗血小板 发现 ,文献中的 3′ 与 4′ 碳信号的归属有误 ,应按表 1 聚集活性测试表明 ,正丁醇层抗血小板聚集活性最 归属。 强 ,因此对正丁醇层作了进一步分离。正丁醇层 212 Adenosine 2 448克上 D101 大孔吸附树脂 ,水2乙醇梯度洗脱 ,得 白色粉末 ,熔点 231~232 ?,碘化铋钾显桔黄 水、 10 %、 30 %、 50 %和乙醇洗脱等五部分 ,其中 色 ,提示该化合物分子中可能含有氮原子。IR - 1 10 %、 30 %乙醇2水溶液及乙醇洗脱部分活性最强。 KBr 中 ,3334 cm 强尖峰说明分子中可能含有 - - 1 再经硅胶柱层析、 Diaion HP220、 ODS及 Rp18 HPLC OH或 - N H ,1666 cm 处为 C C及 C N 双键伸 - 1 等分离手段 ,分别得到化合物 1~10。 缩振动的吸收 ,1604、 1572 和 1470 cm 为芳香环的 13 吸收。在 C NMR中 ,共有 10 个碳信号 ,其中在 60 2 结构鉴定 ~90 ppm 之间的 5 个碳信号与核糖数据基本一 1 211 Thymidine 1 致。H NMR 中 ,最低场处有两个芳氢单峰信号 ,分 白色粉末 ,熔点 184~185 ?。在 IR 中 3312 别位于 8133 和 8112 ppm 处 ,在 7133 2 H ,s 处是 - 1 cm 尖峰表明分子中可能存在 - OH或 - N H ,1700 - N H 上二个质子信号 ,5186 H ,d , J 612 Hz为 2 - 1 - 1 cm 和 1659 cm 处的两个强峰说明分子中存在两 核糖上端基质子信号 ,通过分析该化合物碳谱及氢 [6 ] 个羰基 ,从它们的峰位分析 ,羰基应与供电基团相 谱数据 ,发现与文献 报道的腺苷基本一致。综上 13 连。从该化合物的 C NMR和 DEPT谱可以看出 , 分析 ,化合物 2 鉴定为腺苷 Adenosine 。 该化合物有 1 个甲基 ,2 个亚甲基 ,4 个次甲基和 3 213 2 ,3 ,4 ,92Tetrahydro212methyl21 H2pyrido[ 3 ,42 个季碳共 10 个碳信号。在 80~90 ppm之间有 4 个 b] indole232carboxylic acid 3 1 1 碳信号 3 个次甲基和 1 个亚甲基 ,分析其 H2 H 淡黄色粉末 ,碘化铋钾反应阳性。IR KBr 中 , COSY谱 ,可以得出如下片段 : - 1 - 1 3295 cm 处尖峰为的 - N H 吸收峰 ,1643 cm 处 - 1 的基峰为 - COOH 吸收峰 ,1577 ,1454 cm 为芳环 1 的吸收峰。H NMR的低场区共有四个芳氢信号 ,它 表 1 化合物 1 的氢及碳信号归属 们分别位于 7169 H ,d ,J 710 Hz ,7150 H ,d ,J 1 13 Table 1 The H and C NMR chemical shifts of compound 1 710 Hz ,7124 H ,t , J 710 Hz 及 7119 H ,over2 1 1 氢信号 文献值 碳信号 文献值 编号 lapped ,通过它们之间的耦合常数及二维 H2 H2 a b a b No. Proton Reference Carbon Reference COSY谱可以看出这四个芳氢为 1 ,22二取代苯环上 2 152. 4 154. 2 3 4. 5 H ,s 4. 65 H ,s 四个氢信号。在最高场 ,δ 1165 处是一个甲基信 4 166. 3 168. 9 1 1 δ 号。在 H2 H COSY谱中 , 3130 H ,ddd ,J 1210 , 5 111. 5 114. 0 6 7. 79 H ,q ,J 1. 4 Hz 7. 62 138. 1 140. 1 δ 810 ,214 Hz 的氢信号与 4110 H , dd , J 1210 , 7 1. 87 3 H ,d ,J 1. 4 Hz 1. 88 12. 4 14. 1 1’ 6. 26 H ,t ,J 6. 7 Hz 6. 25 88. 8 89. 2 810 Hz 是一对偕质子 信号 ,它们之间除了相互存在 2’ 2. 21 2 H ,m 2. 36 41. 2 41. 2 偕耦外 ,且同时与δ3155 H ,dd ,J 810 ,214 Hz处 3’ 4. 38 H ,m 4. 45 72. 2 87. 8 3 4’ 3. 88 H ,m 4. 01 86. 3 73. 1 3 δ δ 的质子耦合。 1165 处甲基与 4145 H , d , J 5’ 3. 70 H ,o ,3. 73 H ,o 3. 75 ,3. 83 62. 8 63. 9 13 419 Hz 之间为邻耦关系。在 C NMR 中共有 13 注 :1“a” 在 CD OD中测定“ , b” 在 D O 中测定。 3 2 个碳信号 ,其中最低场处 17216 ppm 为羧酸羰基信 2 3文献归属有误。 Note :1“a” measured in CD OD“ , b” measured in D O. 号 ,其余在 100~140 ppm之间的 8 个碳信号为芳香 3 2 [7 ] 2 3 are error in documents. 碳信号。通过上述分析 ,结合文献 ,该化合物鉴 1 定为 : 2 ,3 ,4 ,92tetrahydro212methyl21H2pyrido [ 3 ,42 结合 H NMR中 6125 ppm H ,t ,J 618 Hz 的 信号 ,发现该分子中含有一个脱氧核糖。对照文 b ]indole232carboxylic acid。1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd All rights reserved.2003 Vo1. 15 No. 1 何祥久等 :瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究 ?:含氮及其它类化合物 11 [7 ] 214 2 , 3 , 4 , 92Tetrahydro21 H2pyrido[ 3 , 42b] indole2 该化合物的氢谱及碳谱数据 ,与文献 报道的胡萝 32carboxylic acid 4 卜苷一致 ,因此化合物 6 鉴定为胡萝卜甙 Daucos2 淡黄色粉末 ,碘化铋钾反应阳性 ,提示该化合物 terin 。 可能含有氮原子。EI2MS 显示该化合物的分子量 218 Stigmasterol232O2β 2D2glucoside 8 - 1 为 216。IR KBr中 ,3343 cm 处强尖峰为 - N H 白色方晶 吡啶 ,熔点 264~ 265 ?,Lieber2 - 1 吸收信号 ,1635 cm 为羧酸羰基的吸收信号。比较 mann2Burchard及 Molish 反应均为阳性 ,酸水解检 化合物 4 与化合物 3 的氢谱 ,发现它们在低场区十 出葡萄糖 ,比较该化合物的氢谱及碳谱数据 ,发现与 [7 ] 分相似 ,在高场区化合物 4 较化合物 3 少了一个甲 文献报道 的 Stigmasterol232O2β 2D2glucoside 基本 基 ,提示化合物 4 可能是化合物 3 的 1 位去甲基的 β 一致 ,因此该化合物鉴定为 :豆甾烯醇232O2 2D2吡喃 β 化合物 ,其质谱中的分子离子峰证明了这一推论。 葡萄糖苷 Stigmasterol232O2 2D2glucoside 。 [7 ] 通过与文献 对照 ,结合上述分析 ,该化合物鉴定 219 Succinic acid 9 无色方晶 甲醇2水 ,熔点 181~ 182 ?。IR 为 :2 , 3 , 4 , 92tetrahydro21H2pyrido [ 3 , 42b ] indole232 - 1 carboxylic acid。 KBr 中 ,在 2500~3500 cm 之间有羧酸宽吸收 - 1 13 峰 ,1694 cm 为羰基伸缩振动的吸收峰。在 C 215 D2Tryptophan 5 化合物 5 为白色粉末 ,熔点 281~281 ?,溶于 δ NMR中 ,只有两个碳信号 ,其中 17917 为羧酸羰 δ 水及甲醇。碘化铋钾和茚三酮反应阳性 , EI2MS显 基的碳信号 , 3115 是 亚甲基信号。通过与文献报 [7 ] 示分子量为 204。通过与品薄层及其质谱数据 道 的琥珀酸数据比较 ,两者基本一致 ,因此化合 对照 ,该化合物鉴定为 :D2tryptophan D222amino232 物 9 被鉴定为琥珀酸 succinic acid 。 indole propionic acid 。 2110 β 2Sitosterol 10 化合物 10 为无色片状结晶 氯仿2甲醇 ,熔点 216 Syringin 6 白色针晶 氯仿2甲醇 ,熔点 192~193 ?,在薄 139~140 ?。在薄层上 10 %硫酸喷雾显紫红色。 β β 层上该化合物具有很强的紫外吸收 ,提示分子中有 通过与标准品共薄层 ,鉴定为 2谷甾醇 2sitos2 - 1 较长的共轭体系存在。在红外图谱中 ,1586 cm 及 terol 。 - 1 致谢 栝楼和薤白由沈阳药科大学中药学院孙启时 1508 cm 的吸收显示分子中存在苯环结构 ,3391 - 1 1 教授鉴定 ,在此深表感谢 ! cm 处的强吸收说明分子中多羟基的存在。H 1 1 NMR及 H2 H COSY谱显示 ,分子中存在反式耦合 参考文献 的烯氢 ,化学信号分别为 6160 ppm H ,dt ,J 1610 , 1 许沛源.方剂学.北京 :人民卫生出版社 ,1995. 371~373 510 Hz ,6184 ppm H ,d ,J 1610 Hz ,其中δ6160 2 何祥久 ,邱 峰 ,姚新生 1中药复方研究现状和思路 1 化 δ 处的质子与 4157 处的质子有较强的相关峰 烯丙 学进展 ,2001 ,13 6 :481~485 耦合 。此外 ,在低场区δ 6188 2 H ,s 的芳氢信号 3 姚新生 ,胡 柯 1 中药复方研究思路 1 化学进展 ,1999 , δ 可能是苯环上两个化学等同的芳香氢核。 5175 11 2 :192~196 13 4 Ericson L E ,Widoff E ,Bauhidi Z G. Studies of growth fac2 为糖端基质子 ,结合 C NMR ,DEPT 及 COSY ,该 1 tors for streptococcus faecalis occurring in marine algae. Acta β δ 单糖为 2D2glucopyranose。H NMR 中的 3175 6 Chem Scand ,1953 ,7 6 :974~979 13 H ,s及 C NMR中的δ 5615 说明分子中存在两个 5 Chenon M T. Carbon213 magnetic resonance ,A basic set of [8 ] CH O2基团 ,综上分析 ,结合文献 ,该化合物鉴定 3 parameters for the investigation of tautomerism in purines 为 Syringin [ 4 32hydroxypropenyl 22 , 62 estabolished from carbon213 magnetic resonance. J Am Chem Soc ,1975 ,97 16 :4627~2636 dimethoxyphenyl2β 2D2glucopyranose ]。 6 Okuyama T ,Shibata S , Hoson M , et al. Effects of Chinese 217 Daucosterin 7 drugs“Xiebai”and“Dasuan”on human platelet aggrega2 白色粉末 ,熔点 285~286 ?,Liebermann2Bur2 tion. Planta Medica ,1989 ,55 :242 chard及 Molish反应均为阳性 ,酸水解检出葡萄糖 , 7 Della Greca M , Monaco P , Previtera LStigmasterols from 酸水解的苷元部分与β 相同 ,分析 2谷甾醇共薄层 R f Typha latif olia. J Nat Prod ,1990 ,53 6 :14301995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd All rights reserved.