武隆野生菌调查及毛头鬼伞的液体深层培养-毕业论文

武隆野生菌调查及毛头鬼伞的液体深层培养-毕业论文 【标题】武隆野生菌调查及毛头鬼伞的液体深层培养 【作者】付文昌 【关键词】野生菌 毛头鬼伞菌 液体培养 培养基 培养条件 【指导老师】陈今朝 【专业】生物科学 【正文】 1 引言 武隆县位于东经107?13’~108?05’，北纬29?02’~29?40’之间，属亚热带湿润季风气候。东西长82.7 km，南北宽75 km，总面积2901.3 km2。自然概貌为“七山一水二分田”，境内山峦起伏，地形地貌多样化，气候温湿，四季分明，温暖湿润，为野生菌的生长繁殖提供了适宜的环境条件。对武隆县野生菌调查，初步建立了武隆县野生食用菌资源标本库，为开发利用武隆县野生菌资源，为驯化、引种、育种和栽培提供种质资源意义重大[1]。 毛头鬼伞(Coprinus comafus)俗称鸡腿菇，属真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞科目、鬼伞科、鬼伞属，是一种珍稀菌类[2,3]。该菌在武隆县分布较广。毛头鬼伞具有较高的食药用价值，毛头鬼伞粗多糖具有抗肿瘤、提高机体免疫力和降血脂等功效并可预防动脉硬化、心脏病及肥胖症等，对糖尿病人亦有很好的辅助疗效，是一种很有发展前途的食用菌[4-6]。该品种已被联合国粮农组织和世界卫生组织确定为集“天然、营养、保健”三种功能一体的16种珍稀食用菌之一[7]。毛头鬼伞是一种适应性与抗逆性很强的草腐兼土腐生菌类 ，分布广泛，世界各国均有，我国主要产于北方各地，河北、山东、西藏等省区[8]。野生毛头鬼伞发生于雨后春末及夏秋季，生于田野、林园、路边，甚至茅屋顶上。 国内关于毛头鬼伞驯化栽培的研究较多，但有关毛头鬼伞深层发酵研究少[9]。本文对毛头鬼伞液体培养基配方进行了筛选和优化，旨在为毛头鬼伞产品的开发奠定基础 。 2 材料与方法 2.1 试验菌种 毛头鬼伞，由长江师范学院生命科学系生物技术实验室提供。 2.2 培养基 斜面培养基 马铃薯20%，葡萄糖2.0%，琼脂2.0%，pH自然。液体发酵基础培养基 葡萄糖2.0%，蛋白胨0.50%，MgSO4?7H2O 0.040%，KH2PO4 0.040%，K2HPO4 0.12%，维生素B1 0.00050%，水1000 ml，pH自然[10-12]。 2.3 试验药品 品名 等级 生产企业 HCl 分析纯 四川省绵阳市新皂化工总厂 NaOH 分析纯 石家庄市试剂厂 MgSO4 分析纯 重庆北碚化学试剂厂 NH4NO3 分析纯 重庆北碚化学试剂厂 KH2PO4 分析纯 上海试剂二厂 K2HPO4 分析纯 重庆北碚化学试剂厂 CO(NH2)2 分析纯 重庆北碚化学试剂厂 甘露醇 分析纯 成都宏博事业有限公司 蔗糖 分析纯 成都鸿鹤化工试剂厂 葡萄糖 分析纯 重庆北碚化学试剂厂 麦芽糖 生化试剂 中国科学院上海生物化学研究所 乳糖 生化试剂 北京红冒化工厂 果糖 生化试剂 北京红冒化工厂 酵母膏 生化试剂 上海酵母厂 蛋白胨 生化试剂 军事医学科学院天津市东方卫生材料厂 甘氨酸 生化试剂 成都鸿鹤化工试剂厂 牛肉膏 生化试剂 重庆北碚化学试剂厂 维生素B1 食品级 湖北华中药业有限公司 维生素B2 食品级 湖北华中药业有限公司 维生素B6 食品级 湖北华中药业有限公司 维生素C 食品级 西南药业股份有限公司 叶酸 食品级 江苏亚邦爱普森药业有限公司 2.4 仪器与设备 设备名称 型号 生产企业 电子天平 MP5002 上海恒平科学仪器有限公司 立式电热蒸汽灭菌器 LDZX-40型 上海申安医疗器械厂 双人单面净化工作台 SW-CJ-2FD 苏州净化设备有限公司 电恒温培养箱 HH.B11.500 上海市跃进医疗器械一厂 酸度计 PHs-25 浙江省上虞市墟立明化验仪 电热鼓风干燥箱 CS101-2EBN型 重庆恒达仪器厂 2.5 毛头鬼伞的液体深层培养试验方法 2.5.1 母种活化及菌丝体形态观察 斜面培养基在0.10 MPa，121.3 ?下灭菌20 min，摆斜面，把毛头鬼伞菌母种转接到斜面培养基上，26 ?恒温培养7 d，观察其菌丝体的生长状况。 2.5.2 碳源试验 分别用2.0%蔗糖、果糖、甘露醇、麦芽糖和乳糖代替液体发酵基础培养基中的葡萄糖[13-15]。将100 ml液体培养基装入250 ml锥形瓶中，0.10 MPa，121.3 ?，灭菌20 min，冷却、将毛头鬼伞菌母种(约0.50 cm2)接种于锥形瓶中，160 r/min，26 ?恒温振荡培养5 d[16]。过滤、烘干，测定菌丝体的干质量，每个处理设3个重复[17]。试验结果用LSD法比较其生长速度的差异显著性[18,19]。 2.5.3 氮源试验 分别用0.50% 酵母膏、牛肉膏、CO(NH2)2、甘氨酸和NH4NO3代替液体发酵基础培养基中的蛋白胨[20,21]。每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 2.5.4 C/N比试验 调节液体培养液的葡萄糖和蛋白胨的C/N比为2:1，4:1，8:1，10:1，20:1，30:1。 每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 2.5. 5 无机盐试验 以葡萄糖 2.0%，蛋白胨 0.50%，维生素B1 0.00050%为基础培养基，用L9(33)正交试验确定无机盐的最佳浓度组合[22]，试验因素水平见下。每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 因素水平表 水平 因素(%) KH2PO4 (A) MgSO4.7H2O (B) K2HPO4 (C) 1 0.02 0.02 0.06 2 0.04 0.04 0.12 3 0.06 0.06 0.18 2.5.6 维生素试验 分别用0.00050%维生素B2、维生素B6、维生素C和叶酸代替液体发酵基础培养基中的维生素B1，以及不加维生素做对照。每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 2.5.7 正交试验 选取葡萄糖、蛋白胨、MgSO4?7H2O 、KH2PO4 、K2HPO4及维生素B1，设计L9(34)正交试验[21]，见下表，每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 因素水平表 水平 因素(%) 葡萄糖(A) 蛋白胨(B) 无机盐(C) 维生素B1(D) 1 1.0 0.25 0.10 0.00025 2 2.0 0.50 0.20 0.00050 3 3.0 1.0 0.30 0.0010 2.5.8 pH试验 用1.0 mol/L HCl溶液或1.0 mol/L NaOH溶液调整培养基pH分别为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0和 7.5[23]。每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 2.5.9 温度试验 调节培养基温度分别为20、22、24、26、28和30 ?，在摇床中培养5 d[24]，每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 2.5.10 摇瓶转速试验 分别控制摇床转速为100、120、140、160、180 和200 r/min，26 ?恒温培养5 d[22]，每个处理设3个重复，试验方法和结果处理同2.5.2。 2.6 武隆县野生菌调查 2.6.1 武隆野生菌资源调查 用抽样调查法和样带调查法进行调查。根据野生食用菌的生物学特性及当地野生菌的生长特点，调查时间为07年4月至11月。通过向当地乡镇政府负责人和农民了解野生菌资源的分布状况选择巷羊片区、土坎片区、白马片区、长坝片区、鸭江片区、平桥片区，江口片区、桐梓片区、火炉片区等9个片区为调查地点，聘请农民做调查向导。 对野生食用菌资源丰富的区域进行重点调查，详细记载采集的标本，记录各种野生菌的名称及其生物学特征、分布数量、生境与习性，采集时间、地点等，拍摄野生 菌照片。分类、鉴定所有标本。在野生菌生长期，我们与野生菌销售大户、收购商人和采食野生菌的农民保持联系，签订了陌生菌收购，定期到野生菌市场上收购尚未采集到的野生菌标本，完善武隆县野生菌菌标本库。 2.6.2 标本的制作 2.6.2.1 配制标本液 (1)有色素不溶于水的标本液: Hg2Cl2 10 g、C2H5OH 10 mL、H2O 1000 mL。 (2)白色标本液:5% HCHO或70% C2H5OH或二者等份混合液。 (3)色素溶于水的标本液:Hg2Cl2 1.0g、Pb (Ac)2 10 g、HAc 10 mL、90% C2H5OH 990 mL混匀即可。 2.6.2.2制作标本 将所采集的标本按是否有色素、色素是否溶于水进行分类。将相应的标本液装入标本缸中，根据标本大小确定装液量。将标本小心放入标本缸中，用凡士林封口。 3 结果与分析 3.1 母种活化及菌丝形态观察 26 ?恒温培养7 d后，毛头鬼伞菌母种在PDA培养基上，菌丝匍匐生长，呈白色，气生菌丝不发达，绒毛状，细密，整齐，生长快，长势好。结果如图1。 图 1 毛头鬼伞菌丝体生长情况 3.2 不同碳源对菌丝体生长的影响 不同碳源对毛头鬼伞菌丝体生长的影响如表3-1。从表中可知，毛头鬼伞菌丝体在不同碳源培养基上的生长情况不同。菌丝体在葡萄糖培养基上生长最好，菌丝体干重为0.314 g;其次是麦芽糖培养基，菌丝体干重为0.224 g;果糖培养基菌丝体干重为0.168 g。在甘露醇培养基上生长最差，菌丝体干重仅 表3-1 不同碳源对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 碳源 菌丝体长势 菌丝体干重(g) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 葡萄糖 +++ 0.350 0.388 0.204 0.354 a A 麦芽糖 ++ 0.209 0.175 0.289 0.224 b B 果糖 ++ 0.154 0.140 0.211 0.168 b B 蔗糖 + 0.077 0.077 0.073 0.076 c C 乳糖 + 0.031 0.093 0.077 0.067 c C 甘露醇 + 0.050 0.047 0.053 0.050 c C 注: +表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05=0.047，LSD0.01=0.066 为0.050 g。由LSD法比较可知，在0.01水平上葡萄糖培养基与其它五种培养基之间，菌丝体干重差异极显著;麦芽糖培养基和果糖培养基都与蔗糖培养基、乳糖培养基、甘露醇培养基之间菌丝体干重差异极显著;而麦芽糖培养基与果糖培养基之间，蔗糖培养基、乳糖培养基和甘露醇培养基三者之间菌丝体干重差异不显著;从菌丝体长势看，在葡萄糖培养基中形成的菌丝球较多且大小比较均匀，菌丝体长势明显优于其它几种培养基;而在甘露醇培养基中形成的菌丝球较少且非常小，长 势较差。因此，葡萄糖是毛头鬼伞菌丝体生长的最佳碳源。 3.3 不同氮源对菌丝体生长的影响 不同氮源对毛头鬼伞菌丝体生长的影响如表3-2。从表中可见，毛头鬼伞菌丝体能利用除CO(NH2)2以外的其它氮源，但利用能力不同。在蛋白胨培养基上生长最好，菌丝体干重达到0.799 g;其次是在酵母膏培养基上生长较好，菌丝体干重为0.489 g，而在CO(NH2)2培养基上，菌丝体基本上没长，其菌丝体干重为所接母种的重量。蛋白胨培养基与其它几种培养基之间的菌丝体的干重达到差异极显著水平;CO(NH2)2培养基、甘氨酸培养基与其它几种培养基之间都达到差异极显著水平;而酵母膏培养基、 表3-2 不同氮源对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 氮源 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 蛋白胨 +++ 0.99 0.605 0.801 0.799 a A 酵母膏 ++ 0.392 0.615 0.459 0.489 b B 硝酸铵 ++ 0.365 0.263 0.572 0.400 b B 牛肉膏 ++ 0.247 0.421 0.449 0.372 b B 甘氨酸 + 0.011 0.011 0.014 0.012 c C 尿素 + 0.005 0.004 0.005 0.005 c C 注: +表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05=0.214，LSD0.01=0.300。 NH4NO3培养基及牛肉膏培养基之间差异不显著，甘氨酸培养基与CO(NH2)2培养基之间差异也不显著。从菌丝体长势看，在蛋白胨培养基上毛头鬼伞菌丝体形成较大且较多的菌丝球，大小均匀，长势好;在酵母膏培养基、NH4NO3培养基和牛肉膏长势较好，有大小不等的菌丝球形成;在甘氨酸培养基中长势较差，形成的菌丝球少且较小;而在CO(NH2)2培养基中没有菌丝球的形成，菌丝体基本上没有生长。因此，蛋白胨是毛头鬼伞菌丝体生长的最佳氮源。 3.4 不同C/N比对菌丝体生长的影响 不同C/N比对毛头鬼伞菌丝体生长的影响如表3-3。从表中可见，毛头鬼伞菌丝体在C/N比为4:1的培养基中长势最好，菌丝体干重为0.672 g;在C/N比为8:1的培养基中长势较好，菌丝体干重为0.441 g;其次是C/N比为2:1的培养基，菌丝体干重为0.388 g;在C/N比为20:1的培养基中长势最差，菌丝体干重仅为0.246 g。用LSD法分析可知，C/N比为4:1与其它C/N比之间都达到差异极显著;C/N 表3-3 不同C/N比对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 C/N比 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 4:1 +++ 0.680 0.710 0.626 0.672 a A 8:1 ++ 0.453 0.466 0.403 0.441 b B 2:1 ++ 0.422 0.363 0.380 0.388 c BC 10:1 ++ 0.335 0.340 0.322 0.332 d CD 30:1 ++ 0.313 0.324 0.301 0.313 d D 20:1 + 0.263 0.238 0.237 0.246 e E 注: +表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05=0.058，LSD0.01=0.081。 比为8:1与C/N比为2:1之间、C/N比为2:1与C/N比为10:1之间没有达到差异极显著，但是达到显著差异;C/N比为20:1与其它培养基都达到差异极显著。从菌丝体长势看，在C/N比为4:1的培养基上毛头鬼伞菌丝体形成较大且较多的菌丝球，大小均匀，长势最好，在其它C/N比中长势都较差。因此，毛头鬼伞菌丝体生长的最适C/N比是4:1。 3.5 不同无机盐对菌丝体生长的影响 无机盐试验的结果如表3-4所示。从表中可见，毛头鬼伞菌丝体在无机盐组合5培养基中生长最好，菌丝体干重为0.354 g;在无机盐组合8培养基中生长较好，菌丝体干重为0.280 g;在无机盐组合6和无机盐组合7培养基中长势一般，菌丝体干重分别为0.257 g和0.241 g;在无机盐组合3培养基中生长最差，菌丝体干重为0.150 g。用LSD法比较可知，无机盐组合5与无机盐组合8及无机盐组合6之间没有达到差异极显著，但无机盐组合5与无机盐组合6之间达到显著差异;无机盐组合5与其它无机盐组合(除无机盐组合8、无机盐组合6外)之间都达到差异极显著;无机盐组合8除与无机盐组合3达 表3-4 不同无机盐组合对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 无机盐组合 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 5 +++ 0.361 0.322 0.379 0.354 a A 8 ++ 0.257 0.354 0.258 0.280 ab AB 6 ++ 0.209 0.295 0.267 0.257 bc ABC 7 ++ 0.239 0.276 0.207 0.241 bcd BC 9 ++ 0.198 0.249 0.172 0.206 bcde BC 4 ++ 0.298 0.122 0.176 0.199 cde BC 1 + 0.177 0.192 0.187 0.185 cde BC 2 + 0.178 0.187 0.161 0.175 de BC 3 + 0.155 0.113 0.183 0.150 e C 注: +表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05=0.080，LSD0.01=0.110 到差异极显著外，与其它无机盐组合都没达到差异极显著，但与无机盐组合4、无机盐组合1和无机盐组合2达到显著差异;无机盐组合3和其它无机盐组合都达到差异极显著;从菌丝体长势看，在无机盐组合5中长势最好，形成了较大、较多并 且大小均匀的菌丝球，在无机盐组合8、无机盐组合7及无机 盐组合6中长势较好，有菌丝球的形成，大小较均匀，但形成菌丝球较少。在无机盐组合3中长势最差，没有形成明显的菌丝球形成。因此，无机盐组合5是毛头鬼伞菌丝体生长的最佳无机盐组合。 3.6 不同维生素对菌丝体生长的影响 不同维生素对毛头鬼伞菌丝体生长的影响如表3-5。毛头鬼伞菌丝体在维生素B1培养基中生长最好，菌丝体干重为0.786 g;其次是维生素B2培养基和维生素B6培养基生长较好，菌丝体干重分别为 0.574 g和0.509 g;在对照组中长势最差，菌丝体干重为0.298 g。用LSD法比较可知，维生素B1培养 基与其它培养基之间都达到差异极显著;维生素B2培养基和维生素B6培养基之间没有显著差异性;维 表3-5 不同维生素对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 维生素 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 维生素B1 +++ 0.737 0.802 0.818 0.786 a A 维生素B2 ++ 0.575 0.531 0.615 0.574 b B 维生素B6 ++ 0.541 0.468 0.518 0.509 b BC 维生素C ++ 0.440 0.390 0.379 0.403 c CD 叶酸 + 0.340 0.323 0.318 0.327 cd D 对照组 + 0.251 0.260 0.383 0.298 d D 注:+表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05= 0.078，LSD0.01=0.109。 生素B6培养基维生素C培养基之间没有达到差异极显著，但是达到显著差异;对照组培养基与其它培养基都达到差异极显著。因此，维生素B1是毛头鬼伞菌丝体生长过程中最适的维生素。 3.7 正交试验结果分析 正交试验结果如表3-6。表中数据显示，葡萄糖的R值最大，其次分别是蛋白胨、维生素和无机盐。 表3-6 L9(34)正交试验设计与结果 因素( % ) 菌丝体干重( g )编号 葡萄糖(A) 蛋白胨(B) 无机盐(C) 维生素(D) ? ? ? Li Ki 1 1.0 0.25 0.10 0.00025 0.036 0.045 0.039 0.120 0.040 2 1.0 0.50 0.20 0.00050 0.069 0.060 0.063 0.192 0.064 3 1.0 1.0 0.30 0.0010 0.806 0.080 0.106 0.272 0.091 4 2.0 0.25 0.10 0.00050 0.102 0.089 0.085 0.276 0.092 5 2.0 0.50 0.20 0.0010 0.110 0.120 0.105 0.335 0.112 6 2.0 1.0 0.30 0.00025 0.140 0.086 0.097 0.323 0.108 7 3.0 0.25 0.20 0.00025 0.068 0.073 0.072 0.213 0.071 8 3.0 0.50 0.30 0.00050 0.204 0.242 0.227 0.673 0.224 9 3.0 1.0 0.10 0.0010 0.127 0.148 0.123 0.398 0.133 T1 0.195 0.203 0.372 0.219 T2 0.428 0.400 0.289 0.380 T3 0.312 0.332 0.274 0.336 1 0.065 0.068 0.096 0.073 2 0.143 0.133 0.124 0.127 3 0.104 0.107 0.091 0.112 R 0.078 0.065 0.033 0.054 注:Li、Ki分别表示第i个处理的菌丝体干重的总和及平均值(i=1，2，3„„9)。Tn、 n分别表示各因素以n水平的菌丝体干重的总和及其平均数(n=1，2，3)。R表示因素的极差，即各因素的 1、 2、 3中最大值与最小值之差。 由此可知，碳源是影响毛头鬼伞菌丝体生长的关键性因子;其次是蛋白胨和维生素;无机盐对毛头鬼伞菌丝体生长的影响最小。比较各因素的T值可知:葡萄糖T2最大，即其最适为2.0%。同理，蛋白胨的最佳浓度为0.50%，无机盐的最佳浓度为0.20%，维生素最佳浓度为0.00050%。因此，毛头鬼伞菌丝体生长的最适培养基配方为A2B2C2D2，即葡萄糖2.0%，蛋白胨0.50%，无机盐0.20%，维生素0.00050%。 3.8 不同pH对菌丝体生长的影响 pH试验结果见表3-7。从表中可知，毛头鬼伞菌丝体在pH 5.0-7.5之间菌丝体均可生长，但生长状况有差异。在pH为5.0培养基中生长最好，菌丝体干重为0.127 g;其次是pH为6.5的培养基，菌丝体干重为0.102 g。在pH为7.5培养基中生长最差。用LSD法比较可知，pH为5.0的培养基与pH为6.5、7.0的培养基之间没有显著差异，与pH为5.5、6.0、7.5的培养基达到差异极显著;pH为7.0的培养基与pH为5.5、6.0的培养基之间没有达到差异极显著，但是达到显著差异。pH为7.5的培养基与其 表3-7 不同维生素对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 pH 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 5.0 +++ 0.149 0.117 0.115 0.127 a A 6.5 ++ 0.103 0.088 0.114 0.102 ab AB 7.0 ++ 0.122 0.107 0.068 0.099 ab AB 5.5 ++ 0.073 0.097 0.080 0.083 b BC 6.0 ++ 0.090 0.079 0.078 0.082 b BC 7.5 + 0.051 0.061 0.049 0.054 c C 注:+表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。 LSD0.05=0.031，LSD0.01=0.043。 它培养基都达到显著差异。从菌丝体长势看，在pH为5.5培养基上毛头鬼伞菌丝体形成较大且较多的菌丝球，大小均匀，长势好;在pH为6.5、7.0培养基上长势较好，有大小不等的菌丝球形成;在pH为7.5培养基中长势较差，形成的菌丝球少且较小。因此，pH 5.0是毛头鬼伞菌丝体生长的最适pH。 3.9 不同温度对菌丝体生长的影响 不同温度对毛头鬼伞菌丝体生长的影响如表3-8。从表中可见，毛头鬼伞菌丝体在26 ?生长最好，菌丝体干重为0.351 g;其次是28 ?和30 ?，菌丝体干重分别为0.261 g和0.245 g;在22 ?下生长最差，菌丝体干重为0.162 g。 用LSD法比较可知，在26 ?中生长的菌丝体和其它温度下生长的菌丝体之间达到差异极显著;在28 ?中生长的菌丝体与在的菌丝体之间没有达到差异极显著，但与在32 ?中生长的菌丝体之间达到显著差异;在32 ?中生长的菌丝体与在24 ?、22 ?中生长的菌丝体之间没有达到显著差异。可知，在温度为26 ?时毛头鬼伞菌丝体生长最好，即26 ?是毛头鬼伞菌丝体生长的最适温度。 表3-8 不同温度对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 温度(? ) 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 26 +++ 0.388 0.330 0.334 0.351 a A 28 ++ 0.287 0.220 0.276 0.261 b B 30 ++ 0.260 0.222 0.252 0.245 b BC 32 ++ 0.176 0.191 0.219 0.195 c BCD 24 ++ 0.209 0.142 0.192 0.181 c CD 22 + 0.166 0.149 0.170 0.162 c D 注:+表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05=0.050，LSD0.01=0.071。 3.10 不同转速对菌丝体生长的影响 不同转速对毛头鬼伞菌丝体生长的影响如表3-9。从表中可见，在转速为160 r/min时，毛头鬼伞菌丝体生长最好，菌丝体干重为0.740 g;在转速为140 r/min时，毛头鬼伞菌丝体生长较好，菌丝体干重为0.486 g;在转速为180 r/min时生长最差。用LSD法比较可知，在转速为160 r/min生长的菌丝体与其它转速生长的菌丝体之间达到差异极显著;在转速100 r/min生长的菌丝体与转速为120、200和180 表3-9 不同转速对毛头鬼伞菌丝体生长的影响 转速(r/min) 菌丝体长势 菌丝体干重( g ) 差异显著性 1 2 3 0.05 0.01 160 +++ 0.723 0.715 0.781 0.740 a A 140 ++ 0.436 0.545 0.476 0.486 b B 100 ++ 0.308 0.318 0.321 0.319 c C 120 ++ 0.230 0.340 0.299 0.290 cd C 200 + 0.282 0.249 0.259 0.263 cd C 180 + 0.218 0.259 0.263 0.247 d C 注:+表示菌丝体生长差;++表示菌丝体生长一般;+++表示菌丝体生长旺盛。LSD0.05=0.067，LSD0.01=0.093。 r/min生长的菌丝体之间没有达到差异极显著，但与转速为180 r/min生长的菌丝体之间达到显著差异。在转速为160 r/min生长的菌丝体形成较多的菌丝球，大小均匀，长势好;在转速为140 r/min生长的菌丝体长势较好，形成大小不均匀的菌丝球;在转速为200 r/min和180 r/min生长的菌丝体较差，形成的菌丝球很少、较小。因此，毛头鬼伞菌丝体生长的最适转速为160 r/min。 3.11武隆县野生食用菌调查结果 将所采集的野生菌标本根据《中国真菌志》、《中国大型真菌》、《中国真菌总汇》和《毒蘑菇》等文献进行分类、鉴定。统计武隆县野生菌共有9科16属29种。 科 属 种 牛肝菌科(Boletaceae) 牛肝菌属 (Boletus) 美味牛肝菌 [Boletus edulis]、红柄牛肝菌 [Boletus erythropus] 绒盖牛肝菌属(Xerocomus) 红绒盖牛肝菌[Xerocomus chrysenteron] 乳牛肝菌属 (Suillus) 乳牛肝菌 [Suillus bovines]、黄乳牛肝菌 [Suillus flavus]、柄乳牛肝菌 [Suillus Albidipes] 木耳科(Auriculariaceae) 木耳属 (Auricalaria) 木耳 [Auricularia auricula]、毛木耳 [Auricularia polytricha]、黑木耳[Auricularia auricula]、皱木耳 [Auricularia delicata] 珊瑚菌科(Clavuliaceae) 锁瑚菌属( Clavulina) 灰锁瑚菌 [Clavulina cinerea]、冠锁瑚菌 [Clavulina cristata] 珊瑚菌属 (Clavaria) 扁珊瑚菌 [Clavaria gibbsiae] 马鞍菌科 (Helvellaceae) 羊肚属 (Morchella) 羊肚菌 [Morchella esculenta] 红菇科(Russulaceae) 红菇属 (Russula) 菱红菇 [Russula vesca]、美红菇 [Russula puellaris] 乳菇属 (Lactarius) 红汁乳菇 [Lactarius hatsudake]、松乳菇[Lactarius deliciosus] 口蘑科(Fricholomataceae) 侧耳属 (Pleurotus) 美味侧耳 [Pleurotus sapidus]、腐木侧耳[Pleurotus lignatilis]、灰白色侧耳 [Pleurotus spodoleucus] 革耳属 (Panus) 野生革耳 [Panus rudis] 香菇属 (Lepista) 白香蘑 [Lepista caespitosa]、紫香菇 [Lepista nuda] 离褶伞属 (Lyophyllum) 榆干离褶伞 [Lyophyllum ulmarium]、 荷叶离褶伞 [Lyophyllum aggregatum] 鬼伞科(Coprinaceae) 鬼伞属 (Coprinus) 毛头鬼伞 [Coprinus comatus] 蜡伞科 (Hygrophoraceae) 蜡伞属 (Hygrophous) 红菇蜡伞 [Hygrophorus russula] 铆钉菇科(Gompbidiaceae) 铆钉菇属 (Gomphidius) 血红铆钉菇 [Gomphidius rutilus] 4 结论与讨论 武隆县野生食用菌标本共有9科16属29种。从调查结果看，武隆县野生菌的种类和数量较多，但只有少数几种野生食用菌被采食和销售，采集利用的种类和数量甚少。大部分可食用的野生菌没有被利用，对其了解也很少，资源没被有效利用。如果能充分利用资源优势，对那些目前还不能实现人工栽培、经济价值很高的野生食用菌进行有序的采集、加工，既可以提高农民的收入，又能促进当地经济的发展。 毛头鬼伞菌丝体在斜面培养基上生长，呈白色，气生菌丝不发达。葡萄糖是毛头鬼伞菌丝体生长的最适碳源;蛋白胨最佳氮源;MgSO4?7H2O 0.040%，KH2PO4 0.040%g，K2HPO4 0.12%是最适比例。维生素B1是毛头鬼伞菌丝体生长的最适维生素。毛头鬼伞菌丝体生长的最适培养基配方为葡萄糖2.0%，蛋白胨0.50%，MgSO4?7H2O 0.040%，KH2PO4 0.040%g，K2HPO4 0.12%，维生素B1 0.00050%，pH为5.0。培养温度为26 ?，转速为160 r/min。