乙醇快速检测

乙醇的快速半定量检测: 每排实验前检查实验材料: 乙醇氧化酶1支,过氧化氢检测试纸条(每组3片),过氧化氢检测比色卡每组一张,过氧化氢酶专用缓冲液1支,水一支。 检测步骤 1 取含重组质粒的大肠杆菌发酵液及含空质粒的大肠杆菌的发酵液各400 微升,8,000r/m离心1 min。 2 取1.5 mL离心管3支,分别加入过氧化氢酶专用缓冲液200 微升。 3 在上述装有缓冲液的离心管中分别加入发酵上清液或水(作为空白对照)各 4 微升,混合。 4 上述三种混合液各取10 微升于培养皿中(各一滴总计共三滴)。 5 取过氧化氢酶1 微升,与其中一滴混合液混合(注意尽量不要产生气泡),其余两滴也同样操作。静置反应15 min(让反应液与氧气充分接触)。(注意过氧化氢酶不能多用,否则会产生假阳性)。 6 将上述三种反应液(没有发酵液的空白对照,含空质粒的对照,含重组质粒的对照)分别取5 微升,滴在过氧化氢试纸条上,观察颜色变化。反映1分钟后拍照。对照比色卡,估测过氧化氢含量,进一步估计发酵夜中乙醇的含量(可以假设过氧化氢的摩尔数与乙醇摩尔数基本一致,分子量分别为34和46)。 注意事项: 1 接触过过氧化氢试纸条的枪头绝对不能接触反应液,否则会使反应液中的过氧化氢被提前分解,颜色反应消失。 2 建议对照实验每个排做一份,各组省下试纸条进行进一步的检测。