【doc】几种特异性诊断肺神经内分泌瘤方法比较

【doc】几种特异性诊断肺神经内分泌瘤方法比较 几种特异性诊断肺神经内分泌瘤方法比较 @一c.f 江西医学院1995;35(3):1,3 ActaAcademiaeMedlCl盘et/z口gzz 几种特异性诊断肺神经 内分泌瘤方法比较 邓锦波张垒欧阳群玲程建华章克萍 (组织学胚胎学教研室昌33ooo67,, 杨淑' (江西省医科所电镜室南昌330006)R7;D,y- 温文 f第一附属医院病理科南昌330006) 【提要1利用镀银染色,免疫细胞化学法和透射电镜技术,对10例肺的神经内分泌瘤进行了观察 结果表明:8例镀银染色呈阳性,3例免疫细胞化学法呈阳性.透射电镜可见肿瘤细胞内有大量的致密核 芯小泡,且线粒体,粗面内质网,游离核糖体丰富.比较三种方法,认为镀银染色可作为神经内分泌瘤的 首选 分断学超微结构镉铖色,泡破关键词:神经内分泌瘤,/诊断免疫细胞化学超微结 ,彳'匕/r, 构{{及 中图号:R730.4 肺的神经内分泌瘤(Neuroendocrine NeoplasmsoftheLung,NE瘤)是一类由肺 内支气管上皮中神经内分泌细咆(Neuroen— docrineCell,NE细咆)转化而来的肿瘤,NE 瘤还可称之为K细咆瘤和APUD瘤.它包 括了典型的支气管类癌(KCCI),不典型的 支气管类癌(KCC?)及小细胞肺癌(KCC ?)等三类[1].由于它在诊断,治疗及预后等 方面都与鳞癌,腺癌不同,因此对NE瘤的诊 断及其鉴别诊断就显得尤为重要.目前,绝大 多数医院仅用HE染色,根据其形态结构来 对NE瘤进行病理诊断,因而漏诊和误诊现 象时有发生.我们在对肺的神经内分泌细咆 生物学特性进行了研究的基础上[..],将其研 究手段和方法运用于NE瘤的病理研究,比 较这些方法的优缺点,试图找出简便,经济, * 江西省自然科学基金资助项目 **补充词 特异性强的诊断方法,直接为临床眼务. l材料和方法 1.1实验材料 10例肺NE瘤标本中,7例取自于 Bouin固定临床病理诊断之后保留蜡块.另 外3例则取自于肺癌手术切除的病灶组织. 1.2实验方法 (1)Bouin固定.石蜡包埋.Grimelius: 镀银染色.(2)Bouin固定,石蜡包埋.抗5一羟 色胺抗体,抗降钙素抗体免疫细咆化学ABC 法].用人胚胎肺的神经内分泌细咆作阳性 对照,蒸馏水代替一抗作阴性对照.(3)3例 外科手术切除病灶标本除作镀银染色,免疫 细胞化学法外,还行电镜样品制备,其方法如 下:二醛,锇酸双固定,Epon812包埋,超薄 9江西医学院35卷 2结果 2.1镀银染色结果 l0例标本中有8例应用Grimelius镀银 染色发现大量的嗜银性瘤细咆,嗜银性瘤细 咆排列不规则,细胞呈团状或散在分布于病 灶之中.细咆形态可为圆形,多角形,梭形及 三角形不等,胞质内有黑色或棕黄色银颗粒 (图1见封页,下同] 2.2免疫细胞化学法结果 使用免疫细咆化学法,10例标本中有2 例发现5一HT阳性瘤细咆,1例标本中发现 降钙素阳性瘤细咆.免疫细咆化学阳性肿瘤 细胞亦呈团状或散在分布,形态多样(图2, 图3),但数量不如嗜银性瘤细咆多见.3例标 本的对照镀银染色均显阳性. 2.3透射电镜观察结果 由于3例NE瘤电镜制样标本是从十余 例各种肺癌切除组织中筛选出来的,故电镜 下均可发现含致密核芯小泡(DenseCore Vesicles,DCV)的瘤细胞.DCV直径约90"-- 180nm,外包一层单位膜,内有致密核芯,核 芯和膜之间有的有一约10"-2Onm间宽的 晕(图4].对3例标本作镀银染色及免疫细 咆化学法对照观察表明,镀银染色全部呈阳 性,而免疫细咆化学法未见有5一HT阳性和 降钙素阳性细咆(相片图见封二页). 3讨论 肺的神经内分泌细咆是一类存在于肺内 支气管上皮内具有神经感受与内分泌功能的 细咆.该细胞多见于胚胎时期,出生后逐步退 化.其主要功能是在胚胎时期相对少氧情况 下,通过分泌胺类和多肽类激素,以维持肺内 血管紧张度.出生后其功能退居次要地位,但 在成人NE细胞可以发生癌变,形成神经内 分泌瘤,给人们健康带来极大危害引.由于其 来源一致,故NE细咆与NE瘤在生理,生化 及形态结构上有诸多共同之处.表现在胞质 内都含有DCV,DCV内含共同的胺类及多 肽类激素.饶有兴趣的是,胚胎时期NE细胞 有4种亚型(P.细咆,P细胞,P!细胞,P细 咆),出生后逐步消失,仅存P.细咆[3].我们 观察到NE瘤咆质内DCV形态和大小和P: 细咆内DCV极为一致.这就为NE细咆向 NE瘤转化提供了形态学与发生学上证据. 电镜观察还表明:和其它肿瘤细咆一样,NE 瘤细咆内线粒体,粗面内质网及游离核糖体 异常增多.这些细胞器为肿瘤细咆的增殖提 供了必要的能量和蛋白质.有理由认为.线粒 体,粗面内质网及游离核糖体的异常增多.不 仅是NE瘤的超微结构的特征之一,也是衡 量肿瘤细胞分化与增殖程度的依据.从组化 特点上看,我们在NE细咆和NE瘤均观察 到5一HT阳性细胞和降钙素阳性细胞.它是 NE瘤细胞产生内分泌作用的直接证据.由 于肿瘤细胞恶性增生,它们分泌的激素也异 常增加,导致了临床上所谓的"类癌综合症". 有资料表明,NE瘤除分泌5一HT和降钙素 外,还可分泌亮氨酸脑啡肽,P物质,蛙皮素 及某些皮质激素[]. 我们用三种方法对NE瘤形态结构及组 化特性研究的同时着重考察它们在诊断 NE瘤方面的应用价值.应当承认.三种方法 都有其无可替代的优点但从经济,实用,推 广价值等角度考虑,则又有主次.免疫细胞化 学法虽然特异性甚高,但由于肿瘤细咆DCV 所含激素不尽相同,单独使用一,二种抗体, 不能排除含其它激素肿瘤细咆的可能,加之 抗体价格昂贵,该技术不能在所有医院开展, 故不宜作诊断NE瘤的常规方法透射电镜 技术虽然特异性高,且肿瘤细咆内DCV是 诊断NE瘤毋容置疑的标准,但由于取材范 围小,也易造成假阴性,加之电镜观察与制作 都需具较高的专业要求,从经费和设备上考 虑也非首选.镀银染色虽不能特异肿瘤 ? 3期邓锦波等:几种特异性诊断肺神经内分泌溜方法之比较 细咆某种激素.但它却可以同时显示多种不 同激素肿瘤细胞.而且检测率甚高.再加上方 法简单,易于掌握,故有广泛的应用前景.笔 者认为,有理由将镀银染色列为肺癌病理学 诊断和筛选的常规染色方法之一. 4参考文献 l胡华成.支气管K细胞癌.国外医学肿瘤学分册,l987, 5:282 2邓锦渡,胡焕民.XI~11肺内神经内分泌细胞研究.解剖 ,l991,22(2):214 3邓锦波,欧阳群玲,张垒,等.人胚眙肺内神经内分泌细 胞电镜观察.解剖学杂志,l993,l6(6):481 4BancroftJD.ManualofHistologicalTechniques.Nev, York:PitmanPress,1984.19 5蔡文琴.王伯潭.实用免疫细胞化学.成都:四川科学技 术出版社.1988,116 6邓锦渡.啼内神经内分泌细胞研究进展.江西医学院学 报,l994,34(3):77 7WarrenWH,Neuroendocrineneoplasmsoftilelu?. TheJournalofThoracicandCardimascularSuIgtry. 1989.98(3):321 8WarrenWH,WelldifferentiatedandsmallLe11nu roendocrinecarcinomasofthelung.VirdlO,,ts.'\rot】itB CellPathology,1988,55:299 (收稿日期l995一)6.【5 AComparativeStudyonSomeSpecificMethodsf(,r theDiagnosisofNeuroendocrineNeoplasmsoftileLung DengJinboZhangLeiOuyangQunlinChengJianhuaZhangKeping (Department(jHistologyandEmbryology Jia~zgxiMedicalCollege,Nancha~z330006) YangShuhua (LaboratoryofEletronmicroscopy,Jia,zg.r[nstit"f of:V[edicalSciences.Nancha,z330006) WanWen (DepartmentoJPathology.Fi7?stAfrillntedHOstnz {)Iiang.:VIedicalCollege.Nam?han{330006) Abstract VtnslVerstan,immunocytochemicaladdtransmissionelectronmicr oscoDictrh— nques'tensPecmensofneuroendocrineneoplasmofthelungwereobserved . Therc11ts snowthateghtofthemarepostivewithsilverstain.andthreearepositi\eimmu11一 tOchemcally?Under仃ansmissionelectronmicroscope ,numerousvesic1es,vithdensecore. richn?t0chondmandroughendoplasmicreticulumcanbese enintumorce11s.AftercolnDa卜 atVestudyoftheaboVethreemethods? itissuggestedthatsilverstainisthemethodoffi choiceforroutinediagnosisofneuroendocrineneop1 asms. Keywords:neuroendocrineneoplasm立/diagnosis;immunocytoch emistry;ultrastructllre ?complementword(责任编辑刘大仁) /,?,j/ 几种特异性诊断肺神经内分泌瘤方法比较 (原文见第1页) 也 3I1. T 图1示嗜银性神经内分泌瘤细胞,肿瘤细胞排列紊乱,细胞呈三角形,多角形,胞质内有粗细不 均的银颗粒(镀银染色×1000) 图2示5-HT阳性神经内分泌瘤细胞,II中瘤细胞形态多样,细胞排列紊乱(ABC法×1000) 图3示降钙索阳性神经内分泌瘤细胞,箭头示细胞散在分布于病灶之中(ABC法×400) 图4示神经内分泌瘤细胞超微结构,肿瘤细胞内线粒体,粗面内质网丰富,尤其胞质 内有大量 的具特征性的DCV(透射电镜×2000) 噻啦嗪对全脑缺血再灌大鼠脑皮层单胺递质及超微结构的影响 (原文见第15页) 图1细胞结构正常EMX8000 图2线粒体水肿严重,部分脊断裂,出现空泡EM×8000 图3线粒体水II申减轻,空泡较少EMX10000