人甲胎蛋白异质体3(AFP

人甲胎蛋白异质体3(AFP 人甲胎蛋白异质体3(AFP 人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)Elisa试剂盒说明书人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)Elisa试剂盒仅供研究使用。检测范 围:96T 50ng/L 1600ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)水平。用纯化的人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)，再与HRP标记的甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下 )，通过标准曲线计算样品中人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)浓测定吸光度(OD值 度。人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)Elisa试剂盒组成:1 30 倍浓缩洗涤液 20ml 1 瓶 7 终止液 6ml 1 瓶2 酶标试剂 6ml 1 瓶 8 标准品(3200 ng/L) 0.5ml 1 瓶3 酶标包被板 12 孔 8 条 9 标准品稀释液 1.5ml 1 瓶4 样品稀释液 6ml 1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml 1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml 1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求:1.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融操作步骤:1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1600ng/L 5 号标准品 150 l 的原倍标准品加入150 l 标准品稀释液800ng/L 4 号标准品 150 l 的5 号标准品加入150 l 标准品稀释液400ng/L 3 号标准品 150 l 的4 号标准品加入150 l 标准品稀释液200ng/L 2 号标准品 150 l 的3 号标准品加入150 l 标准品稀释液100ng/L 1 号标准品 150 l 的2 号标准品加入150 l 标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 l，待测样品孔中先加样品稀释液40 l，然后再加待测样品10 l(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37?温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50 l，空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50 l，再加入显色剂B50 l，轻轻震荡混匀，37?避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50 l，终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序:计算,以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定 的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数( n 5)。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期:1.试剂盒保存:2-8?。2.有效期:6个月