DEPC性质简介及配制、使用注意事项

焦碳酸二乙酯(DEPC) DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式为C6H10O5,分子量为162.14,无色、澄清透明的液体。是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。DEPC可以抑制植物细胞上的NSCC,是常用的NSCC抑制剂. DEPC毒性 1.DEPC(diethypyrocarbonate,焦碳酸二乙酯) 是一种高效烷化剂。DEPC不稳定,在水溶液中会分解成乙醇和二氧化碳,155℃时也会分解。DEPC遇到氨水会发生反应产生氨基甲酸乙酯。 2.DEPC有刺激性,对眼睛和气道粘膜有强刺激,在操作中应尽量在通风的条件下进行, DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩,不小心沾到手上注意立即冲洗。 3.DEPC是一种潜在的致癌物质,主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯类衍生物,其中尿烷是一种已知的致癌物质。 DEPC在水中的半衰期: 25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min(pH 6)、9 min(pH 7)。Tris缓冲液中DEPC 的降解会加快,25℃时,半衰期为1.25 min(pH 7.5)、0.37 min(pH 8.2)。 DEPC加入到水中之后并不会立即溶解,而是形成小的球状液滴(类似于油滴),需要彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀。此时的溶液才可以拿去高温除菌除DEPC。一般灭菌15min即可将DEPC彻底除去。(试验所用试剂也可用DEPC处理,加入DEPC至0.1%浓度,然后剧烈振荡10分钟,再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC,否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。) 配置 加0.1% DEPC到去离子水中,混匀过夜,然后高温高压121℃,20min,DEPC即降解成二氧化碳和水,无毒。 用途 DEPC是一种有效的核酸酶抑制剂,它能够与很多酶的-NH,-SH或-OH等基团发生反应,从而破坏酶的活性位点。一般,常用浓度为0.1%(1 L水中加入1 mL DEPC)的DEPC 来作为RNA酶的抑制剂。比如,进行RNA实验时,要用DEPC处理实验所用的水和各种溶液。 我们通常所说的DEPC(处理)水是指用DEPC处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。DEPC(处理)水可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA 的退火等,以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。 使用注意事项 1、DEPC可能溶解掉某些塑料枪头,因此,量取DEPC时要用玻璃器具。 2、DEPC处理后的溶液要去除残余的DEPC,一般121℃灭菌15 min即可,也可以将其煮沸15 min以达到去除的效果。可能会残留些许气味,可以放心使用。 3、因为DEPC在Tris、HEPES等缓冲液中极易分解,因此不能直接用DEPC来处理Tris、HEPES 等缓冲液。这种情况下,要先用DEPC处理水,然后再用DEPC处理过的水来配制缓冲液。 4、Although H2O prepared with reverse osmosis systems like Milli-Q is free of RNases, it can be contaminated by microbial growth if the machine and piping are not well maintained. This is especially problematic in centralised water systems with metres of piping. 5、The fruity smell coming from ageing DEPC-containing solutions stems from the esters that are generated when ethanol produced from hydrolysis reacts with residual carboxylic esters. It is normal that some fruity smell lingers after DEPC removal and is not necessarily a sign of incomplete DEPC hydrolysis. 安全问题及替代产品 DEPC is carcinogenic (it carboxymethylates purines) and should be handled with care. Wear gloves! Dimethylpropyl carbonate (DMPC), a safer alternative to DEPC, is used in exactly the same way. 本文来源于:生物问问博客,原文地址: