动物性副产物加工利用

动物性副产物加工利用 名词解释 1. 交联度：合成树脂所用的交联剂（如二乙烯苯）在原料总重量中所占的百分比叫做树脂的交联度。 2. 转型：根据需要用适当的试剂，使树脂的交换基团带有某种离子型式称为转型。 3. 相对离心力：这个粒子所受的离心力与它受到的地球相比较，即用离心力与重力（W=mg）的比值来示离心机的离心能力，称为相对离心力(Relative centrifugal force RCF) 4. 天然牛黄：是从牛的胆囊或胆囊管中取出的结石，又称天然牛黄。 5. 人工牛黄：依据天然牛黄的化学成分和组成，采用人工方法配制牛黄称为人工牛黄。 6. 活度量：凝血酶的单位定义为活度量，即1mL纤维蛋白原溶液在28℃、15s内产生凝集的量为一个单位。 7. 熬胶：制胶原料与水一起加热水解而转变为明胶的过程 8. 血清：新鲜血液如果不经抗凝处理，很快就会凝固，形成凝块，并析出一层淡黄色的液体称为血清。 9. 盐溶：一般蛋白质和酶在低离子强度的溶液中比在纯水中的溶解度要大，这种现象称做盐溶。 10. 盐析：低离子强度的溶液可产生盐溶现象，而当离子强度增加至一定程度时，蛋白质溶液离解度又随之降低，直至互相聚集沉淀，即为盐析。 11. 药用胰酶：（pancreatin）指从猪牛羊等动物胰脏中提取得到的一种混合酶制剂，主要含有胰蛋白水解酶类，淀粉酶和脂肪酶等。 12.提取：也叫溶剂分离，一般属于分离纯化的初级阶段，指利用溶剂对不同物质溶解度的差异，从混合物中溶解出一种或几种组分的过程。 绪论: 1. 畜禽副产品综合利用类型和现状：(论述) ①生化制药：脏器：a心脏——组织色素C  辅酶Q  辅酶A b胰脏——胰酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶，弹性蛋白酶，胰蛋白酶抑制剂，胰淀粉酶，胰脂肪酶 胰高血糖素，胰岛素 胃：胃蛋白酶（饭前），胃膜素 肠：肝素（抗血酶） 肝：肝水解物等 生发：胱氨酸9-11%，各种氨基酸 血液：血红素（补Fe），凝血酶，纤维蛋白原，SOD超氧化物歧化酶 胆汁：牛黄，人工牛黄，胆红素，脱氧胆酸，胆汁酸 ②工业原料：a皮：皮革，明胶 b毛：猪鬃（刷子），羽毛，羽绒 c肠：肠衣，手术缝合线 d血：黏合剂 ③饲料：几乎所有副产物：血液可以加工血粉和发酵血粉，骨头也可以加工成骨粉和骨肉粉 2． 动物性副产物综合利用的效益：①经济效益②社会效益 第一章：副产物利用的理化基础 1． 生物分子内或分子间的作用力 ㈠共价键作用力：共价键也称原子键，指两个原子共用电子对产生的化学键。 ①非极性共价键C—C键，S—S键  ②极性共价键C—H键，N—H键  ③配位键 ㈡非共价键作用力： ①离子键：指两个原子提供的电子对由于一方的吸引而被该原子单独占有时的化学结合状态。②氢键 ③范德华力：a取向力：极性分子产生的  b诱导力：极性分子和非极性分子产生c色散力：非极性分子产生  d疏水基团的相互作用 2．（判断）在分离提取脏器有效成分时的原则：在分离提取脏器有效成分时，既要拆开分子间力，又不能破坏目标分子结构，这就要求采用十分温和的条件，避免强烈的外界因素。 3．（1）相似相溶规律中的相似，主要指分子的结构或极性相似。由于分子的结构或极性相似，溶质分子能够很快分散到溶剂中，并形成稳定的分子间力。 （2）物质溶解规律：（应用：碱性物质用____提取） ①极性分子易溶于极性分子组成的溶剂中，非极性分子则易溶于非极性分子的溶剂中。 ②水是极性分子溶剂，因此能用于水中的分子一般都是极性分子或离子化合物。个别非极性分子中有较多的极性基团，因此也可以溶于水中，如糖等。 ③碱性物质易溶于酸性溶液中，酸性物质易溶于碱性溶剂中。 （3）选择性溶解的原则：在极性或非极性溶剂中选择对该种目标成分具有最大溶解度的溶剂，尽量避免非目标成分的混入。 4．分散系：(了解) 低分子分散系：分散相的粒子小于l纳米(1nm)，可穿过半透膜。 粗分散系：粒子大小在l00nm以上，如悬浊液。 胶体体系：粒子大小均为1～100nm之间，都不能透过半透膜。包括溶胶和高分子溶液。 5．（了解）高分子溶液的物理性质：①透析性 ②渗透压 ③扩散性 ④沉降性 ⑤粘度 6．高分子溶液的电解性质：（应用） 如黏多糖类带负电，核酸与蛋白质类同时带正电或负电； pH值大于pI值时，蛋白分子带负电；pH值小于pI值时，蛋白分子带正电；pH值等于pI时，整个蛋白分子正负电荷相等 7．影响生物分子溶解度的因素： ㈠离子强度：是影响生物大分子溶解度的主要因素之一。 ①（名解）盐溶：一般蛋白质和酶在低离子强度的溶液中比在纯水中的溶解度要大，这种现象称做盐溶。 ②（名解）盐析：低离子强度的溶液可产生盐溶现象，而当离子强度增加至一定程度时，蛋白质溶液离解度又随之降低，直至互相聚集沉淀，即为盐析。 ㈡pH值：选择的ph值应保证蛋白质、酶、核酸等生物活性不受影响，避免强酸、强碱的破坏作用。㈢温度：通常采用-5~15℃ ㈣表面活性剂：是一类分子中既具有亲水基及具有疏水基的物质。作用：①增溶②乳化 8．（名解）提取：提取分离，也叫溶剂分离，一般属于分离纯化的初期阶段，指利用溶剂对不同物质溶解度的差异，从混合物中溶解出一种或几种组分的过程 9．对固体原料提取时称为液—固提取：扩散规律；对液体原料处理时称为液—液提取：分配规律。书14页 10．提取过程中对活性物质的保护： ㈠采用缓冲溶液：常用的系统有磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲溶液、Tris缓冲液、醋酸缓冲液、碳酸盐缓冲液等。 ㈡加保护剂：可防止某些活性物质的活性基团或酶的活性中心遭受破坏。如半胱氨酸，a—巯基乙醇，还原性谷胱甘肽 ㈢抑制水解酶的活性：抑制水解酶的办法除去属离子激活剂、调整pH值、加热等防止其激活或降低其活性，加入抑制剂尤为有效。 ㈣其他一些因素如紫外线、温度、冻结等也影响生物大分子的活性，因此提取时均需考虑保护措施。 11．固液提取：提取液和残留物的分离有三种方法：自然沉降、过滤及离心分离。液液提取：提取液采用自然沉降或离心后分液即可。 12．浓缩：是低浓度溶液通过出去溶剂变为高浓度溶液的过程。浓缩方法：（1）蒸发法：蒸发是溶液表面的溶剂分子获得的动能超过了溶液内溶剂分子间的吸引力，从而脱离液面溢向空间的过程。蒸发的快慢与温度和蒸发面积有关。（2）冰冻法 （3）吸收法 （4）超滤法 13．结晶：蛋白质和酶的结晶方法：（1）盐析法 （2）有机溶剂沉淀法 （3）等电点法 （4）利用温度差结晶方法 蛋白质与酶结晶的条件：（1）纯度（2）浓度 （3）pH值（4）温度（5）晶种（6）金属离子（7）结晶时间 14．干燥方法：真空干燥 冷冻干燥 第二章 分离纯化方法 1. 常规的分离纯化方法有盐析法有机溶剂沉淀法、等电点沉淀、盐类复合物沉淀法、吸附法、结晶法，电泳、离子交换法、透析或超滤、超滤离心等。 2. 盐析法，结晶法，等电点沉淀常用于蛋白质或酶的提纯；有机溶剂沉淀法多用于粘多糖或核酸的提纯 第一节 层析分离技术 一：吸附层析 1. 吸附的原理： （1） 相同的分子结构或分子量的物质在吸附剂上停留的时间一致 （2） 而不同结构，不同分子量的物质在吸附剂表面停留的时间会有所不同、经过垂直向下不断地吸附—解吸后，不同的分子便形成各自的区带。 （3） 一般分子量越大，在吸附剂表面停留的时间越短，因此先被洗脱出来。 2. 吸附剂种类：无机吸附剂有氧化铝、活性炭、硅胶、碱金属的碳酸盐、硅酸盐、磷酸盐及其他盐类； 有机类吸附剂如纤维素、淀粉、蔗糖、乳糖、聚酰胺等。 3 （掌握）吸附剂的选择原则： 1）所选的吸附剂应有最大的面积和足够的吸附能力； 2）对欲分离的物质应有不同的吸附能力，即对被分离物应有足够的分辨力； 3）与洗脱剂、溶剂及样品组分不会发生化学反应，也不会在这些试剂中溶解； 4）要求吸附剂颗粒均匀，操作过程中不会破碎。 4．硅胶是应用最广泛的一种极性吸附剂。硅胶的吸附活性取决于其含水量，吸附色谱一般采用含水量10~12%的硅胶。 5．以氧化铝为吸附剂的色谱法时应于亲脂性成分的分离制备。①碱性氧化铝②中性氧化铝③酸性氧化铝 6．活性炭按来源分做植物炭，动物炭和矿物炭三种。根据粗细程度分粉末活性炭，颗粒活性炭，锦纶—活性炭 7．活性炭的吸附作用在水溶液中最强，在有机溶剂中吸附力最弱。 8. （了解）吸附柱层析的操作方法：(1) 对吸附剂的处理颗粒均匀一致的吸附剂(2) 装柱  装至距柱子上端5~10厘米 (3) 样品液上柱 (4) 洗脱 二．离子交换层析 9. 离子交换层析法原理：溶液中的某一种离子与固体中的另一种具有相同电荷的离子互相调换位置，即溶液中的离子跑到固体上去，把固体上的离子替换下来。这里，溶液称流 动相，而固体称固定相。 10. 离子交换剂类型：聚苯乙烯阳离子和阴离子交换树脂是最重要的一类离子交换树脂 聚苯乙烯阳离子交换树脂交换剂分为强酸型，中强酸型和弱酸型。磺酸基为强酸型。 聚苯乙烯阴离子交换树脂也分为强碱型，中强碱型和弱碱型。季胺碱为强碱型 聚丙烯酸阳离子交换树脂：蛇笼树脂。 这种树脂中的羧基和季胺基是等量的。用于脱盐如蛋白溶液。 11. 离子交换剂的性质： ①多孔性：树脂为疏松，多孔的网状物质，活性基团（交换树脂）一般都处于树脂网孔内，外来的离子必须进入到网孔内部才能进行离子交换。 ②不溶性：树脂在水，稀酸，稀碱及一般有机溶剂中都不溶解。维持其立体网状结构。③稳定性：树脂母体对酸，碱具有很强的稳定性，树脂的交换基团化学性质也非常稳定。④总交换量 ⑤（名解）交联度：合成树脂所用的交联剂（如二乙烯苯）在原料总重量中所占的百分比叫做树脂的交联度。交联度越大，树脂的网孔越小；反之交联度越小，网孔越大，孔内活性基团越多，故交换量也大，但膨胀性增大。 ⑥离子交换剂中活性基的解离性质 ⑦离子交换树脂对离子的亲和力 12 .离子交换层析的操作： （1）交换剂的选择：选择阴离子或阳离子交换剂取决于背分离物质所带的电荷性质，如带正电荷，应选择阳离子交换剂。 （名解）转型：根据需要用适当的试剂，使树脂的交换基团带有某种离子型式称为转型。 如阳离子交换树脂用HCl溶液处理转为H+型，用NaOH溶液处理则为Na+型，用2NH4OH处理为NH4+型；阴离子交换剂用HCl溶液处理能转为Cl-型，用NaOH溶液处理为OH-型，用甲酸胺处理为甲酸型。（判断、选择） 三． 凝胶层析 13．凝胶层析 凝胶层析原理：是指混合物分子随流动相经装有凝胶作为固定相的层析柱时，混合物中各物质因分子大小不同被分离的技术，也将凝胶层析叫做凝胶过滤或者分子筛过滤。 凝胶类型：有天然凝胶和人工凝胶两类。天然凝胶包括马铃薯淀粉凝胶和琼脂糖凝胶； 人工合成凝胶有聚丙烯酰胺凝胶和葡萄糖凝胶。 凝胶层析的操作：1.凝胶的处理 2.装柱 3.加样和洗脱：加样不当以致样品渗入柱床不均匀，造成区带扩散，影响分离效果。 凝胶层析的应用：1.作为分析工具 2.作为脱盐工具 3.高分子溶液的浓缩4.去除热原物质5.测定大分子物质的分子量6.用于物质的分离提纯 14. 薄层层析（TLC） 第二节：膜分离技术 膜分离法有渗透、透析、电渗析、反渗透及超滤。 1. 透析膜的性能： （1）透析时在溶剂中膨胀形成分子筛状的多孔薄膜。 （2）具有化学惰性，不含有和溶质起化学反应的基团，在水、稀酸、稀碱中不溶解。 （3）有一定的机械强度和良好的再生性能。 2. 超滤技术的应用：  ①浓缩与脱盐 ②分级分离 ③除菌 ④去热原 ⑤加工细胞悬液 第三节：离心技术 1.（了解）离心技术基本原理：由于不同颗粒的质量、密度、大小等因素均不同，在同一液相介质和相同的离心力场中，沉降速度各不相同，由此而得到彼此分离。 2. 离心技术的应用： （1）制备型离心和分析型离心 分析型离心的最终目的在于对已经分离纯化了的物质做各方面的性质研究、如测定分子量、沉淀系数、密度和纯度鉴定等。 制备型离心对生物来源样品进行分离制备或纯化。 （2）离心技术测定物质的分子量：沉降速度法和沉降平衡法 3．(名解）相对离心力：这个粒子所受的离心力与它受到的地球相比较，即用离心力与重力（W=mg)的比值来表示离心机的离心能力，称为相对离心力(Relative centrifugal force RCF) 4.（多选）测定大分子分子量：①凝胶层析技术②离心技术 第四节超临界CO2萃取. 超临界CO2流体萃取过程是由萃取和分离过程组合而成的 第五节 有机溶剂沉淀法 1. （了解）有机溶剂沉淀法基本原理： ①有机溶剂能降低溶液的介电常数，溶液的介电常数降低就意味着溶质分子异性电荷库伦引力的增加从而使溶解度降低。 ②有机溶剂的介入使得具有水化膜的大分子表层脱水，互相聚集析出。 2．（了解）有机溶剂沉淀法的影响因素： (一) 温度：加入有机溶剂都必须预冷至较低温度，操作最好在冰浴中进行。 (二) 待沉淀样品溶液浓度(三) pH值(四) 金属离子的影响（五)离子强度的影响 第六节 盐析法 1. 盐析是提取蛋白质或酶时最常用的方法。 2. 盐析最常用的盐均为中性盐，最广泛是硫酸铵。 3. 利用硫酸铵对蛋白溶液盐析时，加入硫酸铵三种方法： ①加固体硫酸铵：当蛋白质溶液所需饱和度高而溶液的体积最好不要增加时可采用此法。 ②加饱和硫酸铵溶液 ③透析盐析：将待盐析样品装入透析袋后，放入饱和硫酸铵溶液中进行盐析。 4.（了解）盐析时应注意事项：（一）盐的饱和度（二）pH值（三）蛋白质浓度（四）温度 第三章：动物脏器的加工利用 第一节：脏器的采集与保存 一：脏器的采集部位 （1） 胃黏膜的采集：送入冷库（-20~-50℃）中速冻 （2） 甲状腺的采集：甲状腺位于喉头气管下侧，速冻保存 （3） 脑下垂体的采集：新鲜纯净的丙酮浸没，并保存于-4℃的冷库中 （4） 肾上腺的采集：在贴近肾脏前的脂肪组织中，冷库中存放 （5） 松果腺的采集：脑子内部正中间，粉红色，保存通脑下垂体 （6） 唾液腺的采集：唾液腺包括耳下腺、颌下腺、舌下腺三种。（判断、选择） 1. 耳下腺：在颜面肌下、上颌骨之后沿的稍前方。 2. 颌下腺：在上颌骨的后沿 3. 舌下腺：在舌的下侧前3分之一处 二：脏器组织采集的注意事项 （1）采摘时要及时，一般在动物宰杀后45min内采摘 （2）尽量避免破碎，保持其完整性 三：脏器的保存方法 （1） 冷冻升华干燥法：是最好的保存方法，但成本高，只能用于保存价值高的腺体 （2） 冰冻法：可保存较长时间而不会导致原料变质，在-20℃时进行速冻，然后冷库中贮藏 （3） 有机溶剂脱水法：一般采取丙酮浸泡脱水，只使用价值高的腺体 （4） 化学防腐剂：通常用盐或硫酸胺腌制好后阴干保存，适用于价值低廉的工业原料 （5） 真空灭菌干燥法：在不超过70℃温度下用真空干燥，但有效成分损失较大 冰冻法和有机溶剂脱水法适用于价值高的腺体 四：脏器组织预处理 目的：保存脏器组织中生理活性物质，蛋白质，酶等含量和活性 方法：（1）冷冻（2）稀酸稀碱溶液浸泡（3）有机溶剂浸泡 第二节：胰脏的加工利用 胰脏：外分泌---胰液消化液—（1）蛋白水解酶：胰蛋白酶、a糜蛋白酶、弹性蛋白酶、结晶糜胰蛋白酶 （2）胰脂肪酶 （3）胰淀粉酶 （4）胰蛋白酶抑制剂 内分泌---胰岛细胞——A—胰升血糖素 B---胰岛素 D PP 一：药用胰酶：是指从猪、牛、羊等动物胰脏中提取得到的一种混合酶制剂。主要含有胰蛋白水解酶类，胰淀粉酶和胰脂肪酶等。 1、 性质：（1）胰蛋白酶最适ph为8.0~9.0，用胰酶做水解剂时，ph控制在7~9最宜 （2） 胰酶在体内最适温度是37℃，在体外做水解剂应用时，一般采用45~50℃ 2、生产工艺 说明与讨论：（1）胰液在半融状态下即应绞碎，绞好胰浆温度应不超过4℃ （2）在ph小于4时加入0.02mol/L的钙离子，可以加速酶原的活化抑制分歧反应的发生(重点) (3)本工艺制得的胰酶，其胰蛋白酶和胰淀粉酶含量较高，而脂肪酶活力很低 3、临床应用：助消化酶 二：胰蛋白酶 是从牛羊猪胰脏中提取的一种蛋白水解酶 1、 钙有保护和激活作用，促进酶原激活，抑制分支反应发生， 2、 牛胰蛋白酶原由229个aa组成，由223个aa残基组成， 3、 胰蛋白酶刚从胰腺分泌时，是以无活性酶原形式存在，经肠激酶活化和自身激活才成为有活性的酶。 4、 活化剂：1%胰蛋白酶 5、 临床应用：常用作抗炎药，在外科手术被广泛应用 6．胰脏中所含的蛋白水解酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶)都能被胰蛋白酶自身激活。 7．注射用结晶糜胰蛋白酶，含糜蛋白酶和胰蛋白酶的比例为3：2，经重结晶八次，两种酶的相对含量始终保持不变。 三：弹性蛋白酶 1、 弹性蛋白酶原合成于胰脏的腺泡组织，经胰蛋白酶和肠激酶激活。 2、 临床应用：用于防治高脂血症，防止脂肪肝和动脉粥样硬化，对于慢性支气管炎也有一定功效 四：a-糜蛋白酶：即a-胰凝乳蛋白酶 1、 临床应用于外科手术中 2、 糜蛋白酶有很多种，他们是在不同情况下由a-糜蛋白酶原激活产生的 3、 a-糜蛋白酶原被肠激酶激活，胃蛋白酶、氯化钙以及糜蛋白酶本身均不能使他激活，但胰蛋白酶可以激活糜蛋白酶原成为a-糜蛋白酶 4、 注射用a-糜蛋白酶是由牛胰提取的结晶药用纯酶。 五：结晶糜胰蛋白酶：是中国的。 注射用结晶糜胰蛋白酶，含糜蛋白酶和胰蛋白酶的比例为3：2，经重结晶8次，两种酶的相对含量始终保持不变。 六：胰蛋白酶抑制剂：已广泛应用于治疗急性腺炎、烧伤后的休克及大出血 七：激肽释放酶：分为血液激肽释放酶和组织激肽释放酶 舒展毛细管和小动脉作用，适用于高血压、冠状血管及动脉血管硬化等症 八：胰岛素： 胰岛素细胞：A细胞：约占胰岛细胞的20%，分泌胰高血糖素 B细胞：占胰岛细胞的60%-70%，分泌胰岛素 D细胞：占胰岛细胞的10%，分泌生长激素抑制激素，有抑制胰岛分泌胰高血糖素和胰岛素的作用。 PP细胞：数量很少，分泌胰多肽 1、 基本结构：胰岛素分子由51个氨基酸残基所组成，有A链和B链两条肽链。A链含21氨基酸残基，B链含30个氨基酸残基。两链之间有两个二硫键相连，A链还有个链内二硫键。 2、 胰岛素生物学作用 （1） 对糖代谢调节：增加糖去路，减少糖来路 （2） 对脂肪代谢调节：促进脂肪合成减少脂肪分解 （3） 对蛋白质代谢调节：促进蛋白质合成，抑制蛋白质分解和肝糖异生 3、 胰岛素生产方法较多，目前国内多用猪的新鲜胰脏，采用酸醇提取减压浓缩法，还有分级提取zn沉淀法,磷酸钙凝胶吸附法，DEAE—纤维素吸附法，离子交换树脂吸附法 4、 胰岛素在酸醇提取阶段损失近一半，浓缩也是效价损失的重要环节 5、 说明与讨论：（论述） （1） 胰腺的采集和及时冷冻是影响胰岛素收率的关键之一 （2） 提取时乙醇的含量控制在65~67%较好，低于60%溶出杂质较多，高于80%，胰岛素提取率降低 （3） 提取温度一般控制在13~15度，温度高油脂含量大 （4） Ph一般为2.0~3.0，此时ph既能抑制蛋白质水解酶的活力，又能促进胰岛素的提取 （5） 提取时酸的选择:草酸是弱酸，加草酸的酸醇提取液ph较稳定 （6） 真空浓缩的设备和条件的控制对胰岛素的收率影响很大，浓缩温度要严格控制在30度以下。 （7） 盐析：粗品盐析用Nacl PH1.8  25度效果最好 （8） 结晶：最常用柠檬酸法，还有磷酸盐法，酯酸盐法 （9） 形态：胰岛素在中性或不含锌条件下，都是二聚体，中性含铅时，正六面体，PH6.2时，含锌的胰岛素为菱形六面体结晶。 第三节、肝制剂 1、 大约有1000种酶存在于肝脏中 2、 肝注射液临床应用：抗贫血药，用于恶性贫血和其他巨细胞型贫血 3、 肝注射液的主要成分是抗贫血因子，其他的还有vb12,叶酸，多肽，核酸的降解产物等 4、 肝注射液生产方法主要有醇-盐析法，等电点法 第四节：胆汁的加工利用 （重点） 1、 天然牛黄体轻，质脆，味清香（腥），有挂甲现象，主要成分是胆红素，多种胆酸及胆固醇 2、 人工牛黄在解热抗惊厥祛痰和抑菌作用方面都优于天然牛黄。 3、胆红素为淡橙色或深红棕色单斜晶体。 胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及碱液中，微溶于乙醇或乙醚。 胆红素钠易溶于水，不溶于氯仿，其钙盐、镁盐或钡盐不溶于水。 3、 从胆汁中提取胆红素的生产方法主要有钙盐法 、乙醇法、树脂法、水解法等 4、 加工工艺，钙盐法（论述）详细见书 注意事项：①使用优质原料 a.胆汁应新鲜。 b.利用钙盐法生产胆红素时，应选优质的石灰。 ②每个程序加抗氧化剂：加抗氧化剂（NaHSO3）是防止胆红素氧化破坏的有效措施。③避光避铁缩短时间④酸化是技术关键：a.酸化前先加足量的抗氧化剂，并掌握好酸化程度。b.用盐酸与醋酸液酸化效果好。⑤谨慎操作，回收完全，确保效率 5、 树脂法原理：胆红素可以与氢氧化钠皂化反应，变成溶于水的腥红素钠盐，再水解成钠离子和腥红素离子，与阳离子交换树脂进行离子交换，再经洗脱处理得胆红素。 6、 水解法原理：腥红素酯与氢氧化钠皂化，生成胆红素钠盐，可离解出腥红素离子，与钠离子，盐酸中氢离子可与腥红素结合生成游离的腥红素分子。 胆固醇→初级胆汁酸：胆酸 ↓    鹅脱氧胆+甘氨酸或牛磺酸 次级胆汁酸：鹅脱氧胆酸 猪脱氧胆酸 硼酸素 第五节：胃肠的加工利用 1、（区别）胃蛋白酶是动物胃液中最主要的蛋白酶。它以酶原的形式存在于胃粘膜的主细胞中，在基部的粘膜中含量最丰富。药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶、组织蛋白酶和胶原蛋白酶等。本品为助消化药，用于缺乏胃蛋白酶或病后消化机能减退引起的消化不良症。 2、胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物，如胶原蛋白、粘蛋白、精蛋白等 胃蛋白酶原在体内受盐酸和自身的催化后激活成胃蛋白酶 3、 胃膜素是从猪胃黏膜中提取的一种以黏蛋白质为主要成分的药物，临床上用于胃及十二指肠溃疡，效果较好。 4、 胃膜素生产工艺：单产工艺收率较高，联产工艺收率较低但纯度较高。 5、 肝素：白色粉末，无色无味，具强酸性，高度带负电荷，肝素广泛分布于哺乳动物组织中，如肠黏膜，十二指肠膜，心，肝，胰脏，胎盘，血液等。 6、 肝素具有由六糖或八糖重复单位组成的线性链状分子，三硫酸双糖是肝素主要的双糖单位，L-艾杜糖醛酸是此双糖的糖醛酸。二硫酸双糖的糖醛酸是D-葡萄糖醛酸。三硫酸双糖和二硫酸双糖以约3：1的比例交替联结。（填空） 7、 1916年在肝中发现了肝素，但不到1933年，从肺中提取的肝素即开始应用，近年来临床使用的肝素，几乎都来自猪肠黏膜。（填空） 8、 肝素一词的意义应认为是一族化合物的名称，这些化合物不仅分子量不同，其结构和生物活性也不同。此族物质中有的在抗凝血Ⅲ，有的在脂蛋白脂肪酶释放方面，或在补体的溶细胞体系方面具有占优势的活性。用以治疗血栓栓塞疾病，降血脂和某些免疫复合体疾病。在凝血，脂肪代谢和免疫学领域内应用于治疗。（填空） 9、 肝素的提取原理：一般包括肝素-蛋白复合物的提取，肝素-蛋白复合物的分解和肝素的分级分离三步。（填空） （1）提取：用钠盐的碱性热水或沸水提取 （2）水解酶解：用蛋白质水解酶，胰酶，肠蛋白酶，胃蛋白酶，木瓜蛋白酶（多选） 盐解：一般用碱性食盐水提取，与热变性和凝结剂（明矾，硫酸铝）等变性措施结合除去蛋白质。 （3） 分级分离：多用阴离子交换剂或长链季铵盐进行分级分离。然后再经乙醇沉淀和氧化剂氧化等步骤，进一步精制。 说明与讨论：①根据目前国内外的情况，肝素的生产工艺，以离子交换树脂法为好。 ②动态吸附和洗脱有利于提高收率和效价。 ③掌握好洗脱方法和乙醇浓度是提高效价的关键。 ④杂质沉淀都应分离除净，这与提高效价关系也很大。 ⑤氧化法精制：a以高锰酸钾为氧化剂，氧化能力较强，但可能使产品含钾量偏高并影响收率；b以过氧化氢的氧化剂，氧化较为温和，且不增添杂质，两者配合使用结果较好。 10、 肝素为抗凝血药，能阻止血液的凝结过程，用于防治血栓的形成 第六节：心脏中生化物质的加工提取 1、细胞色素C也简称细丙，是一种以铁卟啉为辅基的呼吸酶。是呼吸激活剂。 在生物氧化过程中，它是一个非常重要的电子传递体。可由动物心脏制备提取。 2、氧化型细丙可被亚硫酸盐、连二亚硫酸盐及抗坏血酸等还原，氧化型细丙呈深红色。 还原型细丙则可被铁氰化物所氧化，还原型细丙为桃红色。还原型最大吸收在520nm、550nm，最小吸收在535nm。（判断） 3、Cytochrome适应症：用于各种组织缺氧急救的辅助治疗。如：CO中毒。 4、树脂反复多次干搓水洗有利于提高含铁量和消除热原。 5、细丙的质量控制主要是①纯度检查包括含铁量分析、杂蛋白检查、过敏实验、光学含量②有效性测定：酶活力测定。酶活力测定方法：瓦氏检压法和酶可还原率法。 6、辅酶Q类因广泛存在于生物界，故又名泛醌。在人体主要集中于肝、心、肾上腺等组织。 是呼吸链中的重要递氢体。 辅酶Q用于治疗心脏病和肝瘤。皂化时间直接影响辅酶Q的收率，一般以15-25min为宜。 7、 辅酶A在物质代谢过程中起着传递酰基的作用，是酰基传递体。 第四章 1.动物血液的总量一般为体重的6％～8％，因动物的种间差异而有所不同。 2. 血清：新鲜血液如果不经抗凝处理，很快就会凝固，形成凝块，并析出一层淡黄色的液体成为血清。 3.血清与血浆的区别是：血清中不含有纤维蛋白原。 4．血浆：含水90％～93％，固形物中数量最多的是蛋白质。 5.血细胞包括：红细胞、白细胞、血小板。 （一）红细胞：具有进行气体交换，选择性通透，渗透脆性、悬浮稳定性。 （二）白细胞：是动物机体防疫体系的一部分。 （三）血小板：其数量变化随动物生理状况而异。如动物剧烈运动后或大量失血或组织损伤时其数量可显著增加。 6我国畜禽血液利用的概况：（论述）（重点） （一）在饲料工业中的利用 : 20世纪80年代前的利用形式主要是蒸煮血粉或压榨血粉。80年代初期一些科研单位和企业，开始联合研制发酵血粉，如“喂壮—w发酵血粉”和酶化的猪血粉。进入21世纪以来，随着科学技术的发展，畜禽血液在饲料工业的应用越来越受到人们的高度重视，新产品开发提到重要的位置，将会呈现美好的前景。 （二）在食品工业中的利用： （1）肉制品：在香肠、灌肠、西式火腿和肉脯中添加适量的猪血浆蛋白，脂肪含量相对降低，蛋白质含量提高，特别是血浆蛋白乳化性能好，产品的保水性、切片性、弹性和粘度、产品的得率等均有提高，成本降低。 （2）糕点：血浆或全血脂经水解酶脱色脱臭后，研制出食用蛋白质，应用于糕点，如蛋糕、饼干、桃酥、面包等均取得较好的效果。 （3）营养补剂：由于血中含有丰富的蛋白质、微量元素和铁质等，特别适宜于做营养添加剂，如蛋白质补剂、铁质补剂。 （4）烹饪菜肴：利用血浆蛋白粉烹饪菜肴，如蛋白虾片、辣油蛋白等具有高蛋白、低脂肪的特点，味道鲜美，嫩滑可口，吃而不腻，营养丰富，色、香、味、型俱佳。 （三）在医药工业中的利用 （1）血卟啉衍生物：在原卟啉基础上经过分子结构修饰而制得，该物质有与癌细胞中的核糖核酸紧密结合的作用，做荧光注射剂，对肿瘤细胞有较强的杀伤力，药物毒性小，疗效好。 （2）原卟啉钠：生化药厂采用脂化法研究原卟啉钠，该产品有保护肝和降低转氨酶的作用，用于治疗急性肝炎，慢性活动肝炎等。 （3）超氧化歧化酶（SOD）：主要是从猪血中研究采用生化方法制取。目前广泛用于抗衰老，美容健体，放射生物学，许多疾病的发病机理研究等，为其提供了重要的药物和生化制剂。 （4）还有球蛋白制剂、血清素、氧化血红素、水解蛋白、免疫血清、生化制剂等，在医学临床得到广泛的应用。 7.畜禽血液脱色的方法 ： （一）物理脱色法            （二）蛋白酶分解          （三）氧化破坏血红素 （四）吸附脱色法            （五）综合脱色法 8.超氧化物歧化酶（SOD） （1）SOD是一种新型的酶制剂，广泛存在于动植物及微生物中的金属酶。 （2）SOD至少分为3种类型： （A）Cu Zn-SOD:呈蓝绿色，由两个亚基组成，每个亚基含1个铜和一个锌。 （B）Mn-SOD:呈粉红色。由两个亚基组成，每个亚基各含一个锰； （C）Fe-SOD:呈黄色，由两个亚基组成，每个亚基各含一个铁。 （3）SOD功能 “一清四抗”：SOD是超氧阴离子自由基的清除剂，它是构成自由基，活性氧对机体损伤的第一道防线，所以它具有抗衰老、抗辐射、抗炎和抗癌作用。 9.常用抗凝剂种类：乙二胺四乙酸（EDTA）盐、枸椽酸钠、草酸钠、肝素。 10. .超氧化物歧化酶（SOD）提取（论述） 1.工艺 2操作要点 （1） 抗凝处理：抗凝剂的种类:乙二胺四乙酸（EDTA）,盐枸椽酸钠,草酸钠,肝素 （2） 分离血球：新鲜牛血，加3.8克柠檬酸三钠/千克血液，搅拌均匀，以3000转／分的速度离心15分钟，收集血球，血浆可用于制备凝血酶。 （3） 提取：收集的血球用0.9％氯化钠溶液洗3遍后在0～4℃条件下，搅拌溶血30分钟，缓慢加入95％乙醇和氯仿，搅拌均匀，静置20分钟，置离心机中离心30分钟，收集上清液，弃去沉淀。 （4） 沉淀：在上清液中加入2倍体积的冷丙酮，搅拌均匀，于冷处静止20分钟，离心收集沉淀。沉淀物用1～2倍体积的水溶解，在55℃水浴中保温15分钟，离心收集上清液。再用2倍冷丙酮使上清液沉淀，静置过夜。把以上的沉淀溶于pH值为7.6、2.5微摩尔／升的K2HPO4-KH2P04缓冲液中，用离心法除去杂质，收集上清液准备上柱。 （5） 离子交换分离纯化：DEAE-sepHadex A-50装入柱中，用pH值为7.6、2.5微摩尔／升的K2HPO4-KH2P04缓冲液平衡，然后将样品上柱，用pH值为7.6、2.5～50微摩尔／升的缓冲液进行梯度，收集具有SOD的活性峰，在蒸馏水中进行透析，然后将透析经超滤浓缩后，冷冻干燥即为SOD产品。 11.猪血提取SOD注意事项： （1）SOD的提取操作过程温度应控制在5℃以下，最好在0℃左右。      （2）上柱分离纯化要注意pH值和盐浓度，pH值控制酶分子带电子状态，盐浓度控制结合键的强弱，为了得到高纯度的SOD，常采用梯度洗脱。