101221胶塞细菌内毒素挑战性试验操作规程.doc

101221胶塞细菌内毒素挑战性试验操作.doc 标 准 操 作 规 程 题 目:细菌内毒素挑战性试验检验操作规程 制 定 人: 制定日期: 年 月 日 编 号:BSC-39-2010 审 核 人: 审核日期: 年 月 日 颁发部门: 质管部 批 准 人: 批准日期: 年 月 日 生效日期: 年 月 日 分发部门:质管部、技术部、中心实验室、生产和车间 1 目的: 3验证胶塞置清洗机经注射用水清洗后，细菌内毒素下降10倍。 2 检验依据: 参照国家中华人民共和国药典(2010年版二部)附录XI E有关方法测定。 3 试验仪器及试剂: 试验仪器:电冰箱、鼓风干燥箱、酒精灯、漩涡振荡器、恒温水浴锅、医用净化工 作台、微量加样器及无热原吸头、试管、具塞试管、手术剪刀、封口膜、计时器。 试剂:8250000EU/ml的细菌内毒素工作标准品、2.5EU/ml的鲎试剂、鲎试剂检查用 水。 4 试验步骤: 4.1 试验前准备: 4.1.1将所用的器具进行无热原处理(250?×30min干热灭菌)。 4.1.2含高浓度细菌内毒素的胶塞的制备 1ml 6658.25×10EU/ml 1.65×10EU/ml 1.65×10EU/ml 5ml 10ml 5取28只白色20系列胶塞，分别在胶塞嘴部滴加0.1ml 1.65×10EU/ml的细菌内毒 #素，其中取出4只胶塞作湿阳性对照品(样品标注1)，其余24只胶塞在百级层流下自 #然晾干(约14h)，取出4只胶塞作干阳性对照品(样品标注2)，另20只胶塞备用(胶 #塞经清洗机注射用水清洗后，样品标注3)。 4.1.3 湿阳性对照试验 #将4只湿阳性对照胶塞(1)分别放入已除热原的具塞试管里，加入10ml无热原的 3，取溶液(即浓度为1.65×10EU/ml)检查用水，将试管分别在漩涡混合器上混匀15min 0.1ml稀释至10ml,即为1.65×10EU/ml(理论值)，将此溶液用无热原的检查用水按下方法稀释记为作湿阳性对照的稀释液。 1ml 1ml 1.65×10EU/ml 8.25EU/ml 4.125EU/ml 第 1 页 共 2 页 1ml 1ml 6取8.25×10EU/ml的细菌内毒素工作标准品用无热原的检查用水按以下方法稀释: 1ml 0.1ml 0.1ml 66538.25×10EU/ml 1.65×10EU/ml 1.65×10EU/ml 1.65×10EU/ml 5ml 10ml 10ml 10ml 1ml 1ml 1.65×10EU/ml 8.25EU/ml 4.125EU/ml 1ml 1ml 取12支2EU/ml鲎试剂在酒精灯上轻灼消毒，将安瓿上部的白色粉末弹至底部，每支加0.1ml无热原的检查用水溶解，放置20min。其中8支加入上述0.1ml用作湿阳性对照的稀释液，分别标为1#-1-1、1#-1-2，1#-2-1、1#-2-2，1#-3-1、1#-3-2,1#-4-1、1#-4-2;2支加入0.1ml无热原水，作为阴性对照;两支加入0.1ml4.125EU/ml的细菌内毒素工作标准品，作为阳性对照;全部用封口膜封口，摇匀置于37?水浴保温1h，取出缓缓倒转180度观察。做好记录。 4.1.4 20只已清洗好的胶塞和4只干品细菌内毒素检查试验方法同4.1.3。做好记录。 5、相关文件和记录 细菌内毒素挑战性试验检验原始记录 BSD-8.2.4-64 第 2 页 共 2 页