胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理 胶回收DNA试剂盒的原理和方法\ 一 原理 1、硅胶膜捕获核酸的原理是什么, 利用核酸在裂解液下与硅胶膜特异结合，在洗脱液条件下被洗脱的原理。 2、我们一般都用硅胶膜来浓缩DNA片断，尤其是PCR产物，那硅胶膜能对RNA吸附吗,效率有多少, 可以，在酸性条件下可以结合，国外公司试剂盒所用大多是此原理。效率中等。 3、硅胶膜对双链DNA有吸附作用，那对单链DNA有吸附作用吗,对DNA/RNA杂合链能吸附吗,吸附效率分别有多少, 对单链DNA有吸附作用。DNA/RNA杂合链能吸附，但在裂解条件下DNA/RNA可能会解离，可以尝试一下。另外可以尝试用Desaltfast200快速脱盐试剂盒，对DNA/RNA影响较小，纯化速度快。 二 一般试剂盒的用法 1 试剂盒的产品包括 溶液I(融胶液)binding Buffer 溶液II(洗涤液) (第一次使用前按照说明加入无水乙醇) 溶液III(洗脱液) DNA纯化柱 废液收集管 2 使用方法(按照说明，不同公司产品操作方法有差异这里以其中一种为例) a 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。 加入等体积的溶液I(如胶为100mg，则加100微升溶液I)，vortex或颠倒混匀。 b c 50-60?水浴加热约10分钟至胶全融，期间，需vortex或颠倒混匀3-4次，以加速凝胶 融解。果胶碎片较小，3-5分钟即可全融，凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少 再在50-60?水浴加热2分钟。50-60?间任一温度都适合于本试剂盒。如果DNA片断 大于5kb，宜颠倒混匀。Vortex容易导致大片断DNA断裂。 d 加入到DNA纯化柱内，室温放置1分钟。如果体积较大，DNA纯化柱内容纳不下， 可以把部分样品加入到纯化柱内，经离心处理后，再加入剩余的样品继续处理。 e 最高速(10000g，约12000-14000rmp左右)离心1分钟，倒弃收集管内的液体。 注意:这一步一定要达到16000g，较低离心速度会导致回收效率下降。 f 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II，室温放置1分钟。 g 最高速离心1分钟，洗去杂质。倒弃收集管内的液体。 h 再加入500微升溶液II，最高速离心1分钟，进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。 i 最高速再离心1分钟，除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。 j. 将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入30微升溶液III至管内柱面上，放置1分 钟。用1.5ml离心管作为收集管。溶液III需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化 柱吸收。如果不慎将溶液III沾在管壁上，一定要震动管子，使液体滑落到管底，以便 被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的pH应不小于 6.5。如需得到较高浓度的DNA，可以只加20微升溶液III，但产量会略有下降。放置 较长时间例如3-5分钟，会对提供产量略有帮助。 k. 最高速离心1分钟，所得液体即为高纯度DNA。