枯草芽孢杆菌培养基配方

枯草芽抱杆菌培养基配方枯草芽抱杆菌培养基的组分是由葡萄糖、蛋白陈、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙等5种原料构成,采用L16(45)正交,将5种原料作为枯草芽抱杆菌培养有影响的因素，通过试验数理统计的直观和理论，对其配方进行优化。试验结果表明，当培养基的配方为无水葡萄糖3.50g/L、蛋白陈0.83g/L、酵母膏0.50g/L、磷酸二氢钾0.35g/L和碳酸钙0.25g/L,温度(34?2)?时，培养16h即可达到生长峰值。由于枯草芽抱杆菌光学密度(opticaldensity,OD)与活菌数量的关系:y=0.5182x2+1.4462x+1.9714(r=0.996343),接种的枯草芽抱杆菌由1.9714X108cfu/mL提高到3.3124X108cfu/mL。优化的枯草芽抱杆菌培养基条件能有效促进枯草芽抱杆菌生长。培养基:1L蒸储水+20g葡萄糖+15g蛋白陈+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，或牛肉膏蛋白陈配方(1000ml)力口10g的葡萄糖。ph为7即可，温度30度到37度皆可一一条件不是很苛刻，比较容易培养。枯草芽抱杆菌常用培养基配方：1L蒸储水+20g葡萄糖+15g蛋白陈+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂枯草芽抱杆菌原生质体的制备1培养枯草芽抱杆菌取亲本菌株T4412、TT2新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36?振荡培养14h,各取1mL菌液转接入装有20mL液体完全培养基的250mL锥形瓶中，36?振荡培养3h,使细胞生长进入对数前期，各加入25u/mL青霉素，使其终浓度为0.3u/mL,继续振荡培养2h。.收集细胞各取菌液10mL,4000r/min离心10min,弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10mLSMM中，每mL约含108,109活菌为宜。.总菌数测定各取菌液0.5mL,用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7各1mL（每稀释度作两个平板）、倾注完全培养基，36?培养24h后计数。此为未经酶处理的总菌数。.脱壁二株亲本菌株各取5mL菌悬液，加入5mL溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100ug/mL,混匀后于36?水浴保温处理30min,定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95犯上细胞变成球状原生质体时，用4000r/min离心10min,弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5mL高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。.剩余菌数测定取0.5mL上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4稀释7各0.1mL,涂布于完全培养基平板上，36?培养24,48h,生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率，未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。