中药指纹图谱操作指南

中药指纹图谱操作指南中药指纹图谱操作指南中药指纹图谱操作指南中药指纹图谱操作指南说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制定。本指南未能归纳的内容，经过实践可自行增补调整，但申报资料或复核资猜中须有相应的说明和申诉。指南中的"色谱指纹图谱"指采纳柱色谱及薄层色谱等各样色谱技术实验研究的指纹图谱。光谱指纹图谱将另行规定。一、供试品采集供试品采集是研究指纹图谱最先也是最要点的步骤，因为不行能对一个药材的所有样本进行试验，并且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要采集有代表性的供试品。采集许多于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。(一)原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关系还没有能说明的现阶段，基本上是在认可其传统的功能主治及临床考证的基础长进行指纹图谱的实验研究。原料药材的指纹图谱主假如反应其自然状态的内在质量状况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依照，同时作为研究注射剂成品指纹图谱有关性的基础。因为自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差别是正常的，在品种判定无误的基础上，力求药材有较为固定和稳固的根源，个体之间的指纹图谱主要特色大概相像即可，使成品指纹图谱特色的稳固有最少的保证。药材的"批"不是工业生产的"批"，是指互相独立的供试品，即不可以将同一地址或同一渠道同一时间获取的供试品分成若干份供试品，以保证试验结果的代表性。因为采集药材供试品受主观和客观的条件限制，供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以供试品数越多越好，10批是最低的要求。供试品应保证其真切性，应有完好采样原始记录，内容包含：药材名称供试品根源（真切记录供试品来自哪处：传统产地采集或是资源丰富的产地采集，或许来自GAP基地供给；仍是产地购置、市场购置或拜托购置，等，以便于生产原料的采买选择和测试数据的可追忆）。采集时间（购置时间）及采集人货源状况检查（货源能否充分和稳固）基原判定及判定人：产地或GAP基地采集的药材联合植物形态判定品种。如缺原植物，由娴熟的专业人员凭性状或显微特色鉴识。如近缘品种、难以划分的野生品种（如白花蛇舌草、蒲公英），应在指纹图谱研究中认真比较，如获取的指纹图谱相像度很高，也可应用，但须明确记录。并在此后实行GAP时确定一个品种，如指纹图谱相像度很低，则须确定品种，改为种植品使用。商品杂乱的品种（如陈皮）产区的选择应减小范围，并联合资源采纳药典收载品种中的一种。复方制剂中的君药及处方量大的药材必需要点注意品种的判定，以防止此后履行指纹图谱过程中出现难以料想的困难。质量评估：为了便于对色谱的正确剖析，减少试验结果的判断偏差，第一药材需切合药典或部颁标准规定，并详尽记录。所有药材均须编号，必需时附药材外形照片。供试品的留样、储藏和标签：因为指纹图谱研究周期较长，供试品一定在干燥、低温、避光处储藏，标签一定有编号，采集供试品的编号应与储藏样品、试验样品的编号一致。留样数目应许多于试验实质用量的3倍。以保证试验结果有异议时的可追忆。如以中药饮片或炮制品为开端原料，应采纳切合中国药典或饮片炮制规范的供试品。申报资料可将要点内容简要填写于表一中：表一（介绍）药材名称供试品编号供试品根源采集时间（购置时间）及采集人货源状况检查基原判定及判定人学名：判定人：质量评估供试品留样数目：容器：储藏地址及条件：标签原始记录保存处附一：药材外形照片。附二：药材的色谱图（试验完成后）。(二)半成品(提取物)：药材所含成分的个体差别是难以防止的，指纹图谱研究用的半成品应来自生产车间经过药材混批调整及规范的生产工艺生产的实质样品。要点技术及相应参数填写于表二，并附试验完成后指纹图谱。表二（介绍）半成品（提取物）名称混批前批号日期提取方法（要点技术）混批后批号混批比率原始记录保存处供试品留样数目：??容器：??储藏地址及条件：??附：混批前后的指纹图谱。(三)成品(注射剂)：产品批号、生产单位、成品批号与半成品（提取物）批号的有关性均须有明确的记录，以保证试验数据的可追忆。成品的“比较用指纹图谱”是成立在标准化提取物或10批以上产品指纹图谱的基础上。各批供试样品须有留样。主要内容填写于表三，并附试验完成后的指纹图谱。表三（介绍）供试品批号生产单位供试品数目供试品留样数目：??容器：??储藏地址及条件：??指纹图谱研究用的原药材、半成品及注射剂成品均应有10批以上的样品供实验，以保证指纹图谱的可重复性。二、供试品溶液的制备(一)药材供试品溶液的制备取样：供试品取样应注意代表性，以保持实验室取样与实际生产应用药材一致，比如地上部分的药材，取样约0.5～1Kg，分别称量茎、叶、花、果的大概比率并做记录。比如果实类药材，生产时去除种子的，供试品也应除掉种子，并做记录。假如药材表观质量不平均（如大小不一、肥瘦不等、粗细不匀等），应注意供试品的取样有代表性，后来的试验中，必需时应做比较试验，以观察所含成分有无明显差别，供生产参照。称样：应依照旧规要求，将选用的供试品适合粉碎后混淆均匀，再从中称取试验所需的数目，一般称取供试品与选用样品的比率为1：10，即如称取1g供试品，应在混淆平均的10g选用的样品中称取。因为指纹图谱需要供给量化的信息，称取供试品的精度一般要求取3位有效数字。制备：药材指纹图谱的主要目的，一是观察药材自己的质量状况，二是以药材的指纹图谱为参比，提取物及制剂的指纹图谱与之比较，以观察制剂与原药材的有关性。药材供试品溶液的制备，可采纳适合的溶剂和提取方法，定量操作进行，尽量使药材中的成分许多地在色谱图中反应出来，并达到较好的分别。最后制备的供试品溶液还应能适应色谱试验的需要，如液相色谱的供试品溶液宜用色谱流动相或色谱洗脱强度较弱的溶剂；薄层色谱用的供试品溶液可采纳液液萃取或固液萃取，采纳适合的溶剂制备供试品溶液。气相色谱的供试品可采纳水蒸气蒸馏法、顶空进样法或固相微萃取法，供试品如需使用溶剂，应用低极性低沸点的溶剂。定容：供试品溶液最后应用适合的溶剂溶于标定容量的容器中，制成标示浓度的供试品溶液（g/mL或mg/mL）。搁置：一般要求供试品溶液尽量新鲜配制，如连续试验需要，供试品溶液应在避光、低温、密闭容器条件下短期搁置，一般不超出两周，溶液不稳固的，一般不超出48小时。标签：须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，或有明确的关系，以保证数据的可追忆。主要操作过程及数据应详尽记录。(二)半成品(提取物)供试品溶液的制备：称取不一样批次的半成品（提取物），参照"供试品溶液"的制备方法中相应的内容制备成必定量的溶液，备用。标签须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，或有明确的关系，以保证数据的可追忆。主要操作过程及数据应详尽记录。(三)成品(注射剂)供试品溶液制备：液体注射剂一般可直接或稀释后作为供试品溶液，必需时也可用适合的溶剂提取并制备成必定量的溶液。固体形式的注射剂（冻干粉针）须注意注射剂成品的附带剂有无对色谱试验扰乱。若有扰乱，须研究采纳适合的样品预办理方法以清除扰乱（如含有氯化钠则液相色谱不行使用蒸发光散射检测器；如糖分太多，可能影响薄层色谱的清楚度和分别度；冻干粉针的骨架剂用量较大时也可能影响色谱的质量等）。别的，单方注射剂药材或复方注射剂中不一样药材成分类型假如相差较大，色谱条件要求不一样，需要进行样品的预办理时，应分别进行试验，便于制备2张以上的指纹图谱。主要步骤及数据应详尽记录。三、参照物(一)参照物的选择：指纹图谱的参照物质一般选用简单获取的一个以上注射剂中的主要活性成分或指标成分，主要用于观察指纹图谱的稳固程度和重现性，并有助于色谱的辨识。在与临床药效未能获得切实关系的情况下，参照物（复方注射剂应首选君药的活性成分或指标成分）起着辨识和评论色谱指纹图谱特色的引导作用，它其实不等同于含量测定的比较品。指纹图谱一般色谱比较复杂，内标物不易选择，也不易插入，指纹图谱不是含量测定，故内标物的作用也不等同于含量测定的内标物，所以应谨慎考虑采纳内标物质的必需性和可能性。参照物应说明名称、根源和纯度。如无参照物也可选指纹图谱中的稳固的色谱峰做为参照峰，说明其色谱行为和有关数据，并应尽可能说明其化学构造及化学名称。如状况需要，又有可能也可考虑选择适合的内标物插入色谱中。(二)参照物溶液的制备：精细称取，用适合的溶剂制成标示浓度的溶液，备用。四、实验常用的色谱技术有薄层色谱、液相色谱、气相色谱及其余色谱技术。须注意各样色谱技术的特色和不足，联合实质采纳。无论何种色谱技术，采纳的原则是必需拥有优秀的专属性、重现性和可行性。专属性：成立的指纹图谱一定能够表达该品种的特色，即独一性。重现性：同一品种同相同品指纹图谱中构成指纹的各特色峰（斑点）作为整体（峰位、峰数、峰的丰度、各峰的大概比率）在不一样实验室和不一样操作者之间获取的色谱整体特色应有较高的相像度，以表示方法的可行性。同一品种不一样样品之间的相像度不属于此范围。可行性：色谱方法和试验条件应易于推行和便于履行，即一旦由药品监察管理部门同意成为质量标准的内容后，生产公司、中等水平的剖析实验室和省级以上的法定查验机构均可履行该标准。(一)实验室：担当色谱指纹图谱的实验室应切合以下6个条件：1、实验室具备担当指纹图谱的整体能力；2、实验室设施经过查考证明切合指纹图谱试验研究的需要；3、技术人员具备从事指纹图谱试验研究的能力；4、对实验室的技术能力评论应有按期的内部的独立检查；5、试验数占有可追忆，与其余实验室有可比性；6、实验室应有质量保证系统，以保证各样举措实行的透明和一致。(二)仪器：所用的仪器性能应能知足指纹图谱试验的需要，并须经校验；假如同一台仪器有两个以上的项目共用，须有特别举措保证仪器的冲洗和保护，仪器使用要有明确记录。液相色谱柱记录商品名称、生产厂家及有关参数（固定相、柱长度、内径、填料粒度等）；一般需用三根以上不一样生产厂家的柱子进行比较，经比较试验后应固定色谱柱根源与规格。色谱系统的适应性试验可用该品种指纹图谱所用的参照物，参照旧法进行，如柱效显然降低，在清除其余要素后，说明该色谱柱不可以持续使用。另一方法是用制作"比较用指纹图谱"的提取物留样样品按期重复试验，将前后获取的指纹图谱垂直叠加，直观比较，各指纹特色峰能否能重合及整个色谱的形状能否有变异，若有变异以致指纹特色已难以辨识，或选择难分别的一对或一组峰，其分别度如显然降低，在清除其余可能的影响要素后，可认作该色谱柱不可以使用。仪器使用人、使用时间及周期应有记录。薄层色谱系离线操作，薄层板为一次性器械，不存在重复使用问，但不一样厂家的商品预制薄层板质量可能不一致，手工自制的薄层板只好供挑选试验条件使用，用确定的条件制作指纹图谱（图像）时一定用有质量保证的商品预制薄层板（如Silicagel60，Merck等）。图谱摄像时如用数码摄像机，解像度应在20,00,000象素以上，荧光色谱须在薄层色谱专用的紫外光灯箱下加滤光片拍摄。若有相应的积分软件，可立刻生成轮廓扫描图以及积分数据；也可用惯例的薄层色谱扫描仪进行积分和绘制轮廓图谱。薄层扫描仪的机械部分、电子部分及光源需按期校验。气相色谱如色谱柱种类、长度、内径、老化条件、载气、流速、柱温、柱头压力、进样方式、进样口温度、检测器等均需观察；仪器除按期检查校验外，填补柱或毛细管柱的柱效也应参照液相色谱柱按期校验柱效。其余种类的色谱仪参照上述原则校验和记录。各样仪器均须依照仪器操作手册以及SOP进行。(三)试验方法和试验条件：色谱指纹图谱试验方法和试验条件的精选：试验条件应能知足指纹图谱的需要，不宜简单套用含量测定用的试验条件，并需依据指纹图谱的特色进行试验条件的精选。试验方法和试验条件选择的目的是经过比较实验，从中选用相对简单易行的方法和条件，获取足以代表品种特色的指纹图谱，以知足指纹图谱的专属性、重现性和广泛合用性的要求。方法和条件须经过严格的方法学考证。因为色谱指纹图谱拥有量化的观点，所以从样品的称取、供试液的制备和进行色谱剖析时均须定量操作。在指纹图谱研究中，"量化"的含义是指在定量操作的条件下所获取的指纹图谱在整体特色上能够作半定量的比较，以表达供试品个体之间指纹图谱在"量"方面的整体差别程度，以及半成品（提取物）和成品之间及成品批间指纹图谱在"量"方面的相像程度。选择试验方法及试验条件须依据供试品的特色和需要设计适合的试验，在保证专属性、重现性的前提下，宜选择简单、适用、便于实行的方法和试验条件，并需要进行方法学考证。(四)试验中应注意的事项：(1)液相色谱的色谱柱需做比较试验加以选择，流动相最少用三种不一样构成进行比较，并从中选用最适合的色谱条件。当前，高效液相色谱一般为反相色谱，采纳十八烷基硅烷键合相柱，特别状况下可选择其余种类的化学键合相柱。不一样生产厂家不一样牌号的色谱柱因采纳的硅胶原料、键合条件、封尾状况等的差别，以致在性能上互有差别，故经过试验比较，选择适合的色谱柱很重要，采纳的色谱柱最好是多半实验室常用的。如需梯度洗脱时，应尽量采纳线性梯度。并应报告仪器梯度滞后时间。测定梯度滞后时间，可用一零死体积连结器取代色谱柱，以甲醇为溶剂A，含0.1%丙酮的甲醇为溶剂B，检测波长为260nm，运转0－100%B的线性梯度，梯度时间20分钟，流速1.0ml/min，记录梯度图形，测定梯度曲线中间点的时间，减去10分钟，即得。不一样的仪器，因为梯度滞后时间的不一样，可能影响方法的重现性，往常可经过调整进样和梯度开端时间减少这类影响。检测器最常有的是紫外-可见光检测器，文件报导的检测波长经常是为含量测定某一特定成分，不必定完好适合指纹图谱的需要，为了获取多层次的信息，经常需要选择数个不一样的检测波长，条件同意的可使用二极管阵列检测器，获取不一样波长获取的色谱图，从中汲取更多的信息。对在紫外区无汲取的化合物，也可选择其余种类的检测器，如差示折光检测器或蒸发光散射检测器等。薄层色谱一般采纳惯例硅胶预制板或高效硅胶预制板，必需时也可采纳聚酰胺薄膜板或纤维素薄层板等，采纳时主假如保证色谱图像的质量，低质的预制板不可以使用。睁开用溶剂系统的选择最少需做三种不一样睁开系统的比较，此外，需注意察看温度和相对湿度对色谱行为的影响。杂质的扰乱对柱色谱，经常是"隐性"的；薄层色谱则因为样品供试液中所有成分均可在薄层板上察看，所以杂质成分对色谱的扰乱是"显性"的，可直观地反应在薄层色谱上，甚至直接影响指纹图谱的察看，所以样品供试液的预办理经常是需要考虑的步骤之一。薄层色谱指纹图谱宜在同板将"比较用提取物"与供试品平行比较，即每一薄层板一定有"随行比较用提取物"或相应的参照物。显色剂分通用显色剂和专属显色剂，联合使用可在一个色谱条件下获取的指纹图谱获取成分类型或化学成分功能团的信息，如生物碱、黄酮类、三萜类、甾体类、香豆素类等，专用的显色剂能够直观地显示各自的特征。气相色谱往常使用毛细管柱，如填补柱获取的色谱固然简单，但如确能表达该品种的指纹特色，也可采纳。一般极性与非极性固定相均须比较，以确定采纳适合的固定相。色谱运转时间能保证供试品中的成分均能流优秀谱柱。如需要将相对保存时间作为固定的常数（"保存指数"），也可依据实质需要和可能选用1,2个内标物质计算。如需程序升温宜采纳线性升温，尽量防止复杂的多阶程序。其余色谱技术可参照上述基本要求设计试验。色谱中的参照峰因为作用不一样于含量测定，提升其分别度应以不牺牲色谱的整体特色为前提，所以不该孤立地苛刻其分别度必需达到含量测定的要求。试验研究中一般需要实验室模拟生产工艺制备供试品溶液，作为实验室模拟样品，以观察试验条件，并与实质生产的供试品的指纹图谱作参照比较。因为实验室制备条件不行能与大生产工艺制备的产品完好一致，在后来的有关性比较时，有关数据仅供参照用，如大生产样品与实验室模拟样品指纹图谱相差十分显然，则提示有必需从生产工艺和实验室模拟样品双方面检查原由。五、色谱指纹图谱的建立和辨识试验条件确定后，将获取的所有样品的指纹图谱逐个研究比较，第一试验人员应将原药材、半成品（提取物）、成品的指纹图谱分别直观比较。一张指纹图谱，特别是分辨率较高的图谱，一定制备有足够代表性的样品的图谱，认真察看，第一找出药材色谱拥有指纹意义的各个峰，给予编号，药材、半成品和成品之间的图谱比较，若出缺峰，则缺号，以保持峰的编号不变，便于清楚地观察互相之间的有关性。半成品（提取物）的指纹图谱与原药材的指纹图谱应有必定的有关性，即半成品（提取物）指纹图谱的特色应在原药材的指纹图谱中能够追忆，而原药材中的某些特色在提取物指纹图谱中同意因生产工艺关系而有规律的丢掉。半成品（提取物）指纹图谱与成品（注射剂）的指纹图谱应有较高的有关性。中药复方注射剂如处方药味许多，药量各异，成分复杂，难以要求在指纹图谱中所有表现，但作为原料的各味药材，一定研究各自的指纹图谱。有的品种某一种成分含量很高（如黄芩中的黄芩苷），在色谱图中占绝对优势，其余特色很弱，固然这自己就是特色，但有时为了差别用药材作开端原料和单调成分直接投料（如用黄芩苷取代黄芩药材），可试用不一样的检测波长或不一样色谱方法，突出其余特色，互相参照辨识。有的复方注射剂数种药材均含同一类型的成分，并且成分又许多时（如人参、三七、黄芪并存），成立指纹图谱的难度很大，除尽量改良试验条件，提升色谱的分辨率外，可用阴性比较，观察有关峰的叠加关系，此时，各指纹峰之间比率的稳固成为重要特色。所以更说明用药材的标准提取物投料将是必定的发展趋向。指纹图谱的辨识应注意指纹特色的整体性。一个品种的指纹图谱是由各个拥有指纹意义的峰构成的完好图谱构成，各个有指纹意义的峰（或薄层色谱的斑点）其地点（保存时间或比移值）、大小或高低（积分面积或峰高）、各峰之间相对的比率是指纹图谱的综合参数，辨识和比较时从整体的角度综合考虑，注意各有指纹意义的峰互相的依存关系。液相色谱不一样仪器可能因滞留体积不一样样原由以致保存时间的漂移。薄层色谱的比移值不一样实验室漂移现象更较常有，所以比较色谱的整体特色很重要，不宜纠葛细枝末节。指纹图谱的评论指标是供试品指纹图谱与该品种比较用指纹图谱（共有模式）及供试品之间指纹图谱的相像性。指纹图谱的相像性从两个方面考虑，一是色谱的整体"相貌"，即有指纹意义的峰的数目、峰的地点温次序、各峰之间的大概比率（薄层色谱还有斑点的颜色）等能否相像，以判断样品的真切性。二是供试品与比较样品或"比较用指纹图谱"之间及不一样批次样品指纹图谱之间总积分值作量化比较。如总积分面积相差较大（如±20%），则说明相同量的样品含有的内在物质有较显然的"量"的差别，这类差别能否同意，应视详细品种，详细工艺的实际状况，并联合含量测定项目综合判断。这类比较应在同一台仪器平前进行测定。为了减少平时查验的烦杂计算，积分数据能够简化为3位有效数字，或许直接读取图谱纵坐标的刻度值。因为积分值自己因为不一样成分响应不一样，并且量的多少与真值不必定呈线性关系；指纹图谱的功能不一样于含量测定，它只要要数目的大体信息。相像性比较能够用"相像度"表达，相像度能够借助药典会介绍的"中药指纹图谱计算机协助相像度评论软件"计算，除个别品种视详细状况而定外，一般成品指纹图谱相像度计算结果在0.9～1.（0或以90～100表示）之间作为切合要求。自行开发的软件必需公然算法。申报资猜中除相像度计算结果外，需附指纹图谱。相像度小于0.9，但直观比较难以否认的供试品，可进一步采纳模式辨别方法（如主成分剖析）检查原由。六、色谱指纹图谱的校验和复核生产公司申报的色谱指纹图谱须经独立于生产公司之外的实验室进行校验，以确认其专属性和重现性。国家药品监察管理局指定的省级药品查验所负责研制单位申报资料的技术审查与实验复核，除还有规定外，已上市品种的指纹图谱复核，好像品种经一致研究确定方法的指纹图谱标准复核由省级药品查验所进行；厂家自己研制的指纹图谱标准复核由省级药品查验所进行，并由国家药典会组织另一药品查验所对其进行二次复核。半成品（提取物）不做复核试验，只做文字资料的技术审查，以判断成品与原料及半成品（提取物）的有关性以及申报资料内容能否合理。进行资料审查时注意申报的资料能否进行系统的方法学考察和考证，书面审查内容包含提取方法、提取溶剂、色谱柱或薄层板、色谱系统、检测波长等的选择；精细度、方法稳固性、重现性及成品储放后指纹图谱的稳固性等观察，结果可经过相像度软件检查，结果相像度均应在0.9以上。所申报的上述资料应书写规范，数据齐备。除状况的确需要外，一般复核单位不再进行方法学复核试验，但复核单位自己对注射剂成品的复核试验仍须进行自己的方法学考证。复核申报的指纹图谱试验，应与原申报资料供给的试验条件相同。如复核结果难以与申报资料的指纹图谱符合，应联合申报资料的有关内容和数据以及复核单位的所有图谱及数据，客观地公正地剖析原由。必需时，由第三方再复核。也能够随行比较用提取物为参照，与供试品由申报单位和复核单位分别在各自实验室进行查对试验，双方供试品与比较用提取物的指纹图谱平行比较。如各自均能重复自己的结果，而色谱的指纹特色又能够互相印证，虽与标准所附比较用指纹图谱有所差别，但相像度检查均能经过，也可考虑予以认同。但同一实验室在完好相同的条件下获取的指纹图谱不该发生上述状况。故每次查验时均应用随行比较提取物同时试验，并进行相像度检查。(一)送样程序已上市品种的指纹图谱，好像品种经一致研究确定方法的指纹图谱，其研究资料与制剂由生产厂家送所在地的省级药品查验所复核，再转报国家药典会。如生产厂家自己研究的指纹图谱，其研究资料及药材与制剂送所在地省级药品查验所复核，再由国家药典会拜托另一药品查验所对其制剂进行二次复核。(二)实验复核按研制单位申报资料供给的指纹图谱测定方法对成品进行测定，绘制图谱，记录有关数据。第一将试验获取的指纹图谱与申报资料的文字表达及所附的比较用指纹图谱进行比较，检查图谱整体特色的相像性。薄层色谱指纹图谱除比较轮廓扫描图外，还须比较斑点颜色（包含荧光颜色）。将获取的指纹图谱原始数据输入或导入计算机，用《计算机协助相像度评论软件》计算，给出相像度结果。(三)质量标准中指纹图谱的标准书写格式指纹图谱作为质量标准单列项目，书写格式以下：指纹图谱书写格式﹙暂行﹚1、液相色谱法【指纹图谱】参照高效液相色谱法﹙中国药典一部附录ⅥD﹚，联合指纹图谱的要求进行测定。色谱条件及系统合用性试验如以参照物做系统合用性试验，则参照中国药典书写格式。如以随行比较用提取物做系统合用性试验，则只书写所用仪器、色谱柱型号及有关参数和各项详细试验条件。参照物溶液的制备同中国药典书写格式。供试品溶液的制备同中国药典书写格式。测定法精细汲取供试品溶液、参照物溶液各若干μL，（或比较用提取物溶液）分别注入液相色谱仪，测定。供试品指纹图谱与质量标准所附的比较指纹图谱或与随行比较用提取物指纹图谱经计算机模拟相像度计算软件计算，相像度大于××，切合要求（或相像度小于××，不切合要求）。指纹图谱复核及查验报告书有关内容的书写格式本品经查验，液相色谱（薄层色谱、气相色谱）指纹图谱与比较用提取物（比较用指纹图谱）比较，并经计算机协助相像度评论软件计算，相像度大于××，切合规定（小于××，不切合规定）。附一：指纹图谱附二：相像度计算评论报告。附三：仪器及色谱柱型号，有关阈值设定与技术参数。附四：计算机协助相像度评论报告。2、气相色谱法【指纹图谱】参照气相色谱法﹙中国药典一部附录ⅥE﹚测定。技术参数参照上述格式书写。附一：代表性比较指纹图谱及附注附二：计算机协助相像度评论报告。3、薄层色谱法【指纹图谱】参照薄层色谱法﹙中国药典一部附录ⅥB﹚测定。技术参数参照上述格式书写。附一：比较指纹图谱及色谱照片与附注附二：计算机协助相像度评论报告。4、其余方法【指纹图谱】参照中国药典一部附录有关方法。技术参数参照上述格式书写。附一：比较指纹图谱附二：计算机协助相像度评论报告。如药典附录的规定不可以知足指纹图谱要求的，须依据实际状况做明确的文字描绘。