糖化酶的分离和提取

（三）糖化酶的分离和提取、实验目的掌握酶中的一些分离和提取。二、实验原理酶的分离提取首先要除去发酵液中的悬浮固形物，获得澄清的酶液；然后进行适当浓度的浓缩；其次将酶沉淀，然后收集沉淀；干燥、磨粉、获得粉状制剂。黑曲霉糖化酶是一种胞外酶，提纯工艺比较简单。首先采用过滤法将菌体等杂质除去，继而对滤液进行浓缩，最后将酶沉淀出来，对沉淀物进行干燥，加工成成品。糖化酶的沉淀可采用硫酸铵盐析法，也可采用有机溶剂如乙醇沉淀。三、实验材料1•液体培养将黑曲霉从斜面转接到液体三角瓶，28度，200rpm培养96h2•溶液及试剂盐酸、无水乙醇、硫酸铵等3.器材漏斗、离心机、抽滤泵、抽滤瓶、蒸发器、布氏漏斗、天平、干燥箱、定量滤纸四、方法步骤发酵液过滤取成熟的发酵液，在漏斗中用滤布过滤除去菌体。菌体用20ml水洗涤，抽滤。合并清夜，量总体积浓缩和沉淀将总滤液放入蒸发器中浓缩到1/3〜1/5体积，测定酶活。将浓缩液均分为二，一份用盐酸调节ph至3.5。在10〜20C条件下加入3.5倍冷冻的无水酒精，边加边搅拌，即可发现酶的沉淀现象。沉淀物用布氏漏斗抽滤，并称酶泥的重量另一份按55g/100ml加硫酸铵，静止盐析1h。沉淀物用布氏漏斗抽滤，称酶泥的重量干燥与加工将上述步骤中得到的酶泥放入干燥箱，在40C下以热风干燥。将干燥的制品磨粉即得成品。将成品称量并测定酶活。五、结果分析1.浓缩液及酶泥的酶活f一项目结果浓缩液酶泥空白对照消耗的硫代硫酸钠标准溶液16.0.ml8.12ml19.25ml根据公式X=579.9*(A-B)c*n稀释倍数1ml/g10ml/0.9715g1ml/g酶活力（u/g或u/ml）113.08053321.82一2.糖化酶的得率得率=（酶泥酶活*酶泥重量）/（浓缩液体积*浓缩液酶活）=（3321.82*0.9715）/（40*113.0805）=71.35%3.分析从数据可知糖化酶得率较高，为71.35%，由此可知糖化酶得率较好，次实验方法可行,但还可以又进一步改进的余地。