方法学评价实验

临床检验生物化学实验指导第2章方法学评价与试剂盒评价实验为满足临床医疗对实验室检验的不断，实验室需要不断引入新方法或改进原有的方法。引入或改进的新方法在进入临床应用时，需要对其进行方法性能评价，达到提高分析方法质量的目的。方法学评价的基本步骤包括：①明确临床需求，确定方法的质量目标，即可允许误差，常用允许总误差（TEa）示；②选定适当的反映分析误差的实验，如回收试验、干扰试验、方法比较试验、重复性试验（批内、批间、日内、日间）等；③分析试验数据，评估分析误差的大小；④将测定的误差与确定的可允许误差进行比较，判断方法的可接受性。常见的方法性能评价指标有准确度（accuracy）、精密度（precision）、灵敏度（sensitivity）、特异性（specificity）、分析测量范围（analyticalmeasurerange,AMR）等。本章以血糖测定项目为例，评价葡萄糖氧化酶法（GOD-PAP法）的方法性能，比较方法采用血糖测定参考方法己糖激酶法（HK法）。两种方法的测定均采用商用试剂盒。第1节、准确度的评价准确度是指分析物测定值与真值之间的一致性，常用误差系统（systematicerror）和总误差（totalerror）评价，一般用偏差（bias）和偏差系数（coefficientofbias）反映不准确度。评价方法准确度可通过相关试验对其各种误差及总误差进行分析，并与性能标准进行比较，判断其准确性是否可接受，常用试验包括回收试验、干扰试验和方法比较试验。实验10回收试验【实验原理】回收试验是反映分析方法准确测定加入样品中已知浓度或量的纯分析物能力的试验，是评价方法准确度的有效方法。回收试验可有效反映方法的比例系统误差，也可反映方法的竞争性干扰。本实验通过GOD-PAP法测定生理盐水中加入血糖的回收率，判断GOD-PAP法比例系统误差的大小，从而评价方法的准确性。【试剂与器材】1.80mmol/L葡萄糖标准液。2.生理盐水。3.GOD-PAP血糖检测试剂盒。4.样品血糖浓度约为2.2mmol/L的人血清（浆）标本或混合血清（浆）。【操作步骤】1.样本制备（表10-1）表10-1回收试验样本制备 加入物（ml） 基础管 回收管 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 血清 0.9 0.9 0.9 0.9 葡萄糖标准液 — 0.01 0.06 0.09 生理盐水 0.1 0.09 0.04 0.012.血糖浓度测定按GOD-PAP试剂盒说明分别测定基础管及回收管的血糖浓度，每管做双份检测，结果取平均值。【结果计算】1.加入葡萄糖浓度计算2.回收量计算回收量=回收管测得量-基础管测得量3.回收率计算【参考区间】一般要求回收率在95%~105%。【注意事项】1.为了避免检测样本中血清被过度稀释，造成误差的改变或消失，加入标准品溶液及生理盐水的体积不得超过血清样本的10%。2.加入标准液后的样本浓度应在医学决定水平附近，且应在方法的分析范围内，一般须测定高、中、低不同浓度的回收率，计算平均回收率。3.标准液加入浓度是根据加入标准液、血清样本及生理盐水体积计算得到，吸样量的变化会影响加入标准液的浓度，因此，本实验中准确加样尤其重要。【评价与思考】1.一般要求回收率在95%~105%，最为理想的回收率为100%。在检测样本时，样本中的非分析物质环境可以对分析物浓度的测定造成强化或抑制的作用，而回收试验测定了加入患者标本中已知浓度或量的纯分析物的浓度，计算得到的回收率越接近100%，说明分析方法对分析物在纯溶液或复杂的基质检测环境中反应能力一致性越强，受基质影响越小；回收率越偏离100%，说明分析方法对分析物在纯溶液和复杂的基质检测环境中反应能力差别越大，受基质影响越大。2.加入标准液的体积控制在10%以内的目的是什么？实验11干扰试验【实验原理】干扰试验可反映分析物以外其他物质对分析方法对分析物测定准确度的影响，可测定特异性和干扰两者引起的误差。本实验采用维生素C作为GOD-POD法测定血糖的干扰物质。维生素C可以和GOD反应生成的H2O2发生还原反应，影响H2O2参与第二步POD的偶联反应，从而降低显色强度，产生分析误差。【试剂与器材】1．样本血糖浓度约7mmol／L的人血清(浆)标本或者混合血清(浆)。2．30mmol／L维生素C溶液。3．生理盐水。4．GOD-POD血糖检测试剂盒。【操作步骤】1.样本制备（表11-1）表11-1干扰试验样本制备 加入物（ml） 基础管 回收管 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 血清 0.9 0.9 0.9 0.9 VitC — 0.1 0.07 0.05 生理盐水 0.1 — 0.03 0.052.GOD-POD法测定血糖浓度按GOD-POD试剂盒说明分别测定基础管及干扰管的血糖浓度，每管做双份检测，结果取平均值。【结果计算】1．干扰物加入浓度计算2．干扰值计算干扰值(mmol／L)=干扰管测定值一基础管测定值3．干扰率计算干扰率(％)=干扰值／基础值×100【参考区间】干扰值即偏差，当偏差<允许误差，则表明干扰物引起的偏差不会影响测定结果的临床应用价值。对于血糖测定而言，当干扰物引起的偏差小于1/4TEA[CLIA88(临床实验室修正法规1988)能力比对试验的质量要求规定，血糖的TEa为0．33mmol/L或10％]，则不会影响测定结果的临床应用价值，可以近似地认为当干扰物浓度低于该浓度时不会对血糖测定产生影响。【注意事项】1．加入可疑干扰物浓度应明显高于通常所见浓度的上限，最好达到病理标本的高值。2．在实际应用中，分析方法的干扰物不止一个，如一定浓度的尿酸、维生素c均可影响血糖的测定，而干扰物也可对多种分析方法造成干扰，因此，方法学评价应对造成临床影响的多种干扰物质进行干扰试验的评价。3．为了区别误差的来源是方法的特异性差还是干扰，可用干扰物的纯溶液作为样本测定，如存在干扰值，则误差来源于候选方法的特异性差。4．同回收试验，加样准确对本试验同样重要。【评价与思考】1．当干扰物引起的偏差小于1/4TEA时，则不会影响测定结果的临床应用价值，可近似地认为当干扰物浓度低于该浓度时不影响测定结果。干扰物对测定的影响与被分析物浓度无关，而与干扰物本身的浓度有关，所以产生的误差属恒定系统误差。也正因为如此，干扰试验与回收试验不同，计算不同干扰物浓度下的平均干扰率无意义。2．进行干扰试验时，首先需要确定被试可疑物质是否可引起误差；若能引起误差，还需进一步探讨其误差的来源是因方法特异性差还是干扰，若加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数，说明为方法特异性差；若加入物质并不与分析试剂反应，但它改变了分析物和分析试剂间的反应，说明存在干扰。实验12方法比较试验【实验原理】方法比较试验是将候选方法与己知准确度的方法(如参考方法或经典方法)作对比，以评价候选方法的准确度，是验证方法准确度的最佳。它可同时检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。本实验参照美国临床实验室标准化委员会(现更名为美国临床实验室标准化协会)EP9-A2文件(MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples；ApprovedGuideline-SecondEdition)，以HK法测定血糖的方法作为比较方法，来评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差。【试剂与器材】1．GOD-POD法试剂盒。2．HK法试剂盒。3．样本临床血清标本40份，血糖浓度应均匀覆盖GOD-POD法检测线性范围，如≥8．9mmol／L的标本10份；2．8~8．9mmol／L之间的标本20份；≤2．8mm01／L的标本l0份。【操作步骤】1．将每份样本分别采用GOD-POD法和HK法进行双份检测，第一次按1、2…7、8的顺序检测，第二次按8、7…2、1的顺序检测。2．将40份样本共80对测定结果按表12—1进行整理记录。设HK法测定结果为x值，GOD-POD法测定结果为y值。表12-1方法比较试验测定结果 标本号 GOD-POD法（mmol/L） HK法（mmol/L） 第一次Y1 第二次Y2 均值 第一次X1 第二次X2 均值 1 2 3 4 5 6 7 ... 40 【结果计算】1．检查双份检测数据的离群值(1)分别检查HK法和GOD-POD法双份测定值有无离群表现：计算每个标本每一方法双份结果的差值及差值的均值，以各方法双份检测结果间差值的均值的4倍作为判断限，要求各方法内标本的成对差值都应在判断限内，若存在超过判断限的检测点，则按步骤(2)中叙述处理。如GOD-POD法双份检测结果有无离群值，每份标本的双份结果检测差值△Y为对应的Y2-Y1，并计算所有△y的均值(△Y)，若所有△Y均小于4倍△Y，则说明双份测定结果符合要求，均可纳入后面的计算)评价。(2)若存在某一标本双份结果差值大于4倍差值均值的情况，则应进行进一步相对差值的离群值判断：计算相对差值为双份结果差值绝对值除以双份结果均值的倍数(△Y或△X)，以4倍△Y或△X作为判断限分别对两种检测方法的测定值进行判断，若超过判断限，则不符合要求。若某一标本双份检测结果均超过上述两种判断限，应分析存在这种情况的原因，且该标本的检测结果应剔除，再继续分析剩下的检测结果。如果存在1例以上检测结果需剔除，应检查原因。若是标本的原因，则其他数据仍可以使用；若无法找出原因，则保留所有的数据；若最大差异超过临床允许误差，应从仪器、试剂、方法上寻找原因，停止继续实验。2．绘制散点图将双份检测结果在坐标纸上作散点图，其中以x轴代表HK法测定值，y轴代表GOD-POD法测定值。3．检查散点图中有无离群值观察坐标图中X、Y实验点有无离群表现以及明显的离群点，若无，可做后继统计学处理，若有，应对X、Y配对检测结果进行离群值筛选及剔除。离群值筛选方法及标准类似双份检测数据离群点的筛除方法及标准。将每份标本经过两种方法检测的前后两个测定值一一对应，计算它们的差值，如第一个标本，差值E=(Y1一)和(Y2一)，其中为HK法检测1号标本的双份结果均值，同理计算2～40号标本的检测差值，然后计算所有差值的平均值()，以4倍平均差值()作为判断限。所有差值都不应大于判断限。若某标本的测定差值超过了判断限，则应进一步进行相对差异的离群点判断：计算相对差值E’为(Y1一)和(Y2一)除以的倍数，再计算所有80个E’的均值，以相对差值E’大于4倍作为判断限进行判断。若某标本两种方法检测点结果均超过上述两种判断限，应认为该点的检测结果属离群点，应剔除。但要求剔除离群点的个数不超过所有检测标本数的2.5％。在本试验中，若存在1个以上离群点时，须检查原因，判断是否保留数据。原因不清楚，保留全部作统计分析，或用一批新标本重新测定后评价。4．回归及相关分析根据散点图观察，若从x、y之间呈直线关系，根据直线回归分析法作统计处理，求出回归方程y=a+bx及相关系数r。截距a反映恒定系统误差的大小，斜率b反映比例系统误差的大小，相关系数r反映两种方法相关性的密切程度。(相关请参阅统计学教材)5．计算系统误差根据回归方程的a、b值，可计算候选方法的系统误差(SE)，并与不同医学决定水平(Xc)的允许总误差(TEa)作比较，对候选方法系统误差的可接受性作出判断。SE的可接受性判断指标为：|(a+bXC)一XC|<1/2TEa因未考虑不精密度，此时可接受性判断的值取l/2TEa。6．利用配对t检验进行评价方法比较试验的数据属于配对资料，因而可作配对t检验进行评价,其统计学公式是：其中，d代表候选方法与参考方法测定值的差值(或正或负)，为差值之平均值，以为配对数。若求得t值>t0.05(v)，即P<0．05，表示候选方法存在显著的系统误差。可从上述t检验的计算公式入手进行分析。在计算f值公式中的分子为两种方法的偏差值，表明方法间系统误差的大小。分母是平均偏差标准误，反映方法比较试验中随机误差的大小。因此t值是方法比较试验中系统误差和随机误差的比值。若t值<t0.05(v)表明两种方法间的系统误差和随机误差量相差不大，尽管有偏差值，但可能由随机误差为主所致，不一定确实存在方法间的系统误差，若t值>t0.05(v)，说明系统误差显著大于随机误差，方法间确实存在系统误差。【参考区间】回归方程中a代表恒定系统误差．b代表比例系统误差；|(a+bXC)一XC|代表医学决定水平(Xc)处候选方法的总的系统误差，要求|(a+bXC)一XC|<EA。EA可以根据TEa来确定。【注意事项】1．试验标本的选择一般为40～100例，其中25％的标本浓度低于参考区间下限，50％标本浓度在参考区间之内，25％标本浓度高于参考区间，且所有标本的浓度应均匀分布于测定的整个线性范围。2．标本进行双份测定时，第二次测定的标本顺序应倒过来，且在4小时内完成测定。3．相关系数r表示两个变量间相互关系的密切程度。在做直线回归统计时，除实验点间的离散程度会影响r值的大小外，实验点对应的分析物含量分布宽度也会影响r值大小。若实验点过于密集，尽管离散程度不大，但r值也会偏小。因此可用，值的大小检验x取值范围是否合适。一般要求r≥0．975或r2≥0．95，否则必须增加标本数量以扩大浓度范围。如扩大浓度范围，仍然小，认为两种方法相关性的密切程度不够好；某些项目难于通过扩大浓度范围来提高，，则应考虑选择配对t检验进行评估。4．在进行方法比较试验时，及时绘制散点图，发现异常值立即复做，及时纠正，可减少离群点出现的机会。数据呈非线性表现时，肉眼判断其线性部分，减少数据分布范围，以线性部分作统计，可减少影响。【评价与思考】1.在临床常规实验室，很难用参考方法进行比对试验，因此，实验室常通过候选方法分析一系列参考资料来保证其准确度，以保证比对试验的准确可靠性。常见的参考包括CRM（certifiedreferencematerial）和SRM（standardreferencematerial）。此外，在实际工作中，方法比对试验不仅仅用于准确度的验证，当实验室准备引进一个新的检测系统或测定方法应用于临床，或者实验室同时使用两个或两个以上的检测系统测定相同的检测项目时，必须首先确定各个检测系统的测定结果是否存在差异，这种差异是否在允许的误差范围之内，也需要进行方法比对试验。图12-1显示了方法比较试验的主要评价步骤。2.方法比对实验数据可进行t检验分析来评价其误差大小，但t检验结果只能说明在统计学上的差异是显著或极其显著的。需要注意的是：①配对资料的t检验有助于发现系统误差的存在，但不能进一步区分误差的类型，如恒定误差与比例误差；②t值受样本配对数的影响较大，故不应将t值大小作为候选方法是否可以接受的唯一依据，而还要根据d及Sd值大小做全面的考虑。3.用于方法比较试验的标本例数和浓度有何要求？4.根据两种方法得到的相关系数r<0.975，说明说明？第二节、精密度的评价精密度是指同一标本在一定条件下多次重复测定得到的一系列单次测定值之间的接近程度，是反映测定结果中随机误差大小的指标。精密度的大小可采用标准差（standarddeviation,SD）或变异系数（coefficientvariation,CV）表示，重复性试验是评价方法精密度的常用方法。重复性试验（replicationexperiment）是将同一份材料分成数份标本，进行多次分析测定（一般为20次），评价或验证试验方法的随机误差或不精密度的试验。重复性试验包括批内重复性、批间重复性、日内重复性、日间重复性等。批内重复性试验是将同一份材料分成数份标本，在相同的条件下，尽可能短的时间内平行测定20次；批间重复性试验是取5个不同批次的试剂盒，对于同一份样品或者质控品进行测定，每个批号测定4次，分别计算每批4次检测的平均值，再计算R；日内重复性试验是将同一份材料分成数份标本，在第一天做5轮，每轮4次测定，获得20个测定数据；日间重复性试验是将同一份材料分成20份试验样本，每天测定1份，连测20天。分别统计处理即可测得候选方法的批内、日内和日间的随机误差。实验13批内重复性试验【实验原理】批内重复性试验是将同一材料分成数份试验标本，在相同条件下(同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一实验室由同一人操作)，尽可能短的时间内进行多次分析测定(一般为20次)，从而求得批内精密度，反映测定方法随机误差的大小。本实验采用批内重复性试验评价GOD—POD法试剂盒的批内精密度及随机误差的大小。【试剂与器材】1．样本高、中、低血糖浓度的混合血清(浆)各一份，如可选取2．8mmol/L、7mmol/L、1lmmol/L三个浓度水平附近的标本。2．GOD-POD法试剂盒。【操作步骤】1．分别将高、中、低三个浓度水平的混合血清(浆)分成5份，进行4轮平行测定，获得20个检测值。2．分别记录每个浓度水平的检测结果。【结果计算】1．检查离群值检验20次测定数据中的离群值，如存在异常值应剔除。对小样本量的测定，可采用Grubbs检验，其统计学公式是：式中，Xd为离群值；、s分别为包括离群值在内的均值、标准差，如果计算得到的G值大于系数表（表13-1）中相应显著水平的a和测定次数力时的临界值Ga．n，则将托作为异常值弃舍，具体可按下述三种情况来处理：(1)若只存在一个离群值，设有n个测定数(X1<X2<X3<X4…<Xn），其中X1为离群值，即可利用上述公式，直接对X1进行检验。(2)若存在两个或两个以上离群值，且均分布在均数的同一侧，例如X1、X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据(X2)，即通过检验值G2来决定X2是否应该弃舍。如果X2应该弃舍，X1自然也应弃舍；如果X2不应舍去，则再检验X1，但在检验X1时，测定次数不应减少一次。(3)若存在两个或两个以上离群值，且分布于均数两侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn，是否应该舍去。如有一个数据决定舍去，那么再检验另一个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此时应该选择99％的置信水平。表13-1Grubbs检验临界值Ga．n 测定次数 显著性水平 测定次数 显著性水平 （n） 0.05 0.01 （n） 0.05 0.01 3 1.135 1.155 29 2.730 3.086 4 1.426 1.493 30 2.745 3.103 5 1.671 1.700 31 2.759 3.119 6 1.822 1.944 32 2.773 3.135 7 1.938 2.097 33 2.786 3.150 8 2.032 2.221 34 2.799 3.164 9 2.110 2.323 35 2.811 3.178 10 2.174 2.410 36 2.823 3.191 11 2.234 2.484 37 2.834 3.204 12 2.285 2.549 38 2.845 3.216 13 2.331 2.607 39 2.856 3.228 14 2.372 2.658 40 2.867 3.239 15 2.409 2.705 41 2.877 3.250 16 2.443 2.747 42 2.886 3.261 17 2.475 2.785 43 2.896 3.272 18 2.504 2.821 44 2.905 3.282 19 2.531 2.853 45 2.914 3.292 20 2.557 2.884 46 2.926 3.301 21 2.580 2.912 47 2.931 3.310 22 2.603 2.939 48 2.940 3.319 23 2.624 2.963 49 2.948 3.328 24 2.644 2.987 50 2.956 3.337 25 2.663 3.009 60 3.03 3.41 26 2.681 3.029 70 3.08 3.47 27 2.698 3.049 80 3.13 3.52 28 2.714 3.086 90 3.17 3.56 100 3.21 3.602.计算均值、标准差和变异系数按上述方法剔除离群值后，计算批内测定值的平均数（）、标准差（sw）和变异系数（CV），具体计算如下：（1）（2）（3）变异系数（CV）=批内标准差sw/批内均数×100%【参考区间】批内不精密度的判断限是1/4TEa。批内不精密度≤1/4TEa时，检测系统的不精密度属可接受；>1/4TEa时，批内精密度不符合要求。CLIA88（临床实验室修正法规1988）能力比对试验的质量要求规定，血糖的可接受范围为靶值±0.33mmol/L或±10%（取大者）。即1/4TEa为2.5%，即变异系数CV小于2.5%则认为方法的精密度可接受。【注意事项】1.重复性试验的标本应覆盖检测方法的线性范围，特别应选择医学决定水平的标本进行检测。2.为了避免偶然误差的影响，用于评价方法精密度的变异系数应该是剔除离群值之后计算得到的。【评价与思考】1.在临床应用中，常用批内重复性试验来反映批内精密度，日间重复性试验来反映总精密度的大小。批内精密度是反映批内进行分析物检测的一组重复检测值离散程度的量值，而总精密度是反映了较长的时间内，将所有已知的主要误差因素考虑在内的某分析物的重复检测值离散程度的量值。在评价某方法的精密度时，批内不精密度的判断限为1/4允许误差范围，批间不精密度的判断限为1/3允许误差范围。允许误差范围可以根据CLIA88规定的能力比对试验的TEa确定。2.剔除离群点的目的是什么？3.为什么不可以直接计算变异系数而要剔除离群点之后再计算变异系数？第3节、线性范围评价线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性）与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特性。线性范围评价是测定被测物质浓度/活性的反应曲线接近直线的程度。实验14线性范围测定【实验原理】线性范围评价试验是指使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，测定各自的浓度，以标准液预期浓度为横坐标，实际测得的浓度为纵坐标，在坐标纸上做图绘制出计量反应曲线，根据建立的直线方程进行线性范围的评价。本实验用GOD-POD法试剂盒测定不同浓度葡萄糖标准溶液的浓度，以评价GOD-POD法试剂盒的线性范围。【试剂与器材】1．369．4mmol/L葡萄糖标准液。2．葡萄糖浓度为3．4mmol/L的混合血清(浆)。3．40mmo1/L葡萄糖标准溶液将369．4mmol/L葡萄糖标准液与3．4mmol/L的混合血清(血浆)按1：9的体积混合制得浓度为40mmol/L的葡萄糖标准液。4．GOD-POD试剂盒。【操作步骤】1．将40mmo1／L葡萄糖标准溶液与生理盐水进行如下稀释，制作系列标准管（表14-1）。表14-1线性范围评价试验样本制备 加入物 标准管 1 2 3 ... 9 10 葡萄糖标准液（ul） 10 20 30 ... 90 100 生理盐水（ul） 90 80 70 ... 10 0 预期浓度（mmol/L） 4 8 12 ... 36 402.用GOD-POD法分别测定系统标准管血糖浓度，测定时做二次重复测定，且测定顺序应随机排列。【结果计算】以葡萄糖浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图。观察图中试验点变化趋势，如果所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，建立直线回归方程y=a+bx，若a接近于0，b在0.97~1.03之间，则可以直接判断该测定方法线性范围在实验中已涉及浓度；若a较大，b>1.03或<0.97则认为在高浓度或低浓度处的实测值和预期值存在较大偏差。试着舍去某组离群值，另做回归分析，直到a接近于0，b在0.97~1.03之间，此时缩小的分析范围是真实的可报告范围。【参考区间】建立直线回归方程y=a+bx，若a接近于0，b在0.97~1.03之间，则可以直接判断该测定方法线性范围在实验中已涉及浓度。【注意事项】1.结果计算中的葡萄糖预期浓度是根据标准液稀释计算得到的，因此，试验中的称量及稀释过程必须准备。2.在本实验中，最好有5个或以上的系列浓度的实验标本，浓度范围应遍布整个预期可报告范围。实验时，最高浓度的样本浓度应高于线性上限30%，低值标本浓度应低于线性低限。3.线性实验使用的样本最好和真实标本尽可能相似，即与真实标本具有相同的基质状态。通常在线性实验中使用的样品包括：混合患者血清（理想的标本基质）；加入待测物的混合人血清（如本实验）；经过特殊处理（如透析、热处理）的混合人血清，用于降低分析物浓度，此法可能存在基质效应问题；质控品和校准品等由于不是正常的生理形式，可能会掩盖实际的线性结果。【评价与思考】1.建立回归方程y=a+bx，使a尽量接近于0，b在0.97~1.03时的测定范围为该方法的线性范围。理想的状况是该方法的线性范围的上限应能使95%的临床标本不经过稀释均能得到正确的测定结果。分析范围（analyticalrange），又称分析测量范围（analyticalmeasurementrange，AMR），是指样品不经过稀释或浓缩，分析方法能直接测定的待测物浓度或质量的范围，它反映整个系统的输出特性，可通过线性实验来评价。校正曲线是分析物浓度或质量与信号值之间的曲线，理想的校正曲线是通过零点的直线。如果校正曲线是直线，方法的分析范围即是校正曲线的线性范围。如果校正曲线不成直线，需要多个浓度校正液来确定校正曲线，校正液应包括高值浓度。方法的分析范围要求足够宽，对于实验室所服务的人群，95%~99%的样本不经预处理可以直接分析。临床可报告范围（clinicalreportablerange，CRR）允许应用样本稀释、浓缩和预处理后，分析方法可测定样本中分析物的可靠浓度范围。CRR是扩展的AMR。检测限（limitofdetection）则是检测系统可检测出的最低分析物浓度。2.线性范围实验的标本浓度有何要求？哪些类型的标本可用于线性实验，它们有何优缺点？