结核分支杆菌对莫西沙星的敏感性监测

结核分支杆菌对莫西沙星的敏感性监测 分析结核分支杆菌对莫西沙星（MOX）的耐药现况，莫西沙星对肺结核的治疗作用,为结核病的防治提供依据。方法 采用比例法对莫西沙星和异烟肼（INH）、链霉素（SM）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）、丙硫乙烟胺（TH1321）、氧氟沙星（OFL）、左氧氟沙星（LVF）、对氨基水杨酸（PAS）、环丙沙星（CIP）、阿米卡星(Am)分别做药物敏感性试验。结果 375例肺结核患者痰标本中，培养法共检出阳性标本188例,其中，莫西沙星有30株发生耐药，耐药率为16.0%;异烟肼60.6%、链霉素44.1%、利福平51.5%、乙胺丁醇42.0%、丙硫乙烟胺52.1%、氧氟沙星36.7%、左氧氟沙星26.0%、对氨基水杨酸56.9%、环丙沙星66.5%、阿米卡星44.1 %。结论 莫西沙星是一种有效的抗结核药物，使用时应做结核菌敏感性测试，了解其耐药情况，是指导临床有针对性的采取治疗措施的科学依据。 近年来，随着全球结核病疫情的回升和抗结核药物的广泛使用，耐药菌株不断增加，特别是耐多药结核病(MDR-PTB)已成为结核病防治的难点之一，这类患者一直在传播耐药菌，新感染者发病后则成为初始耐药者。由于耐药结核病治疗难度大、费用高，治愈率低，复发率及病死率高，已成为突出的公共卫生问题。 在研究新药的探索中，氟喹诺酮类药是最活跃的领域之一[1]，近来，一种新氟喹诺酮类抗生素莫西沙星(moxifloxaci， M0X)，8-甲氧-氟喹诺酮类药已作为临床使用的二线抗结核药物，为评价其对结核菌的抗菌性，2007-09 河南省胸科医院检验科开始对临床肺结核患者的痰液分离出的结核菌进行莫西沙星敏感性试验,结果报道如下。 1材料与方法 1.1 材料 1.1.1 对象 2007-12/2009-05 河南省胸科医院肺结核患者送检的痰液，采用培养法，阳性标本经抗酸染色镜检确认后，培养分离出的结核分支杆菌，进行11种抗痨药的敏感性试验，对结果进行统计分析。 1.1.2 抗结核药物 莫西沙星（MOX）拜耳医药保健股份公司生产,异烟肼（INH）、链霉素（SM）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）由Sigma公司生产，丙硫异烟胺（TH1321）辽宁倍奇药业生产,左氧氟沙星（LVF）、氧氟沙星（OFL）重庆莱美药业公司生产,对氨基水杨酸（PAS）山西泰盛药业生产,环丙沙星（CIP）四川科伦药业生产,阿米卡星(Am)上海旭东海普药业生产。 1.1.3 仪器设备 1.2 方法 1.2.1培养基制备 ①药敏试验基础培养基为改良罗氏培养基，成分及制备方法见结核菌诊断细菌学检验[2]⑴;②含药培养基的制备：药物有效成分浓度如表2所示,制备含药培养基时每100ml基础培养基中加入1ml稀释后的药液使得培养基的终浓度如表2所示，分装至灭菌螺旋盖试管，每管7ml，斜置于培养基蒸汽灭菌箱内，85℃凝固50min，凝固后培养基自然冷却，置37℃无菌试验24h，无污染培养基4℃保存备用。 1.2.2 质量控制 每批培养基配制后均用结核分支杆菌菌株（H37RV）作为敏感对照，确定不存在耐药后方可使用。 1.2.3 药物敏感性试验 采用比例法⑵。刮取2～3周新鲜菌落，置于加有1～2滴10%吐温-80的磨菌瓶中，旋紧瓶盖在涡旋震荡器上混旋1min，静置后，加生理盐水，至其浓度与1号麦氏比浊管相同，即得1mg/ml菌液，倍比稀释得10-2mg/ml， 10-4mg/ml菌液，用划线法分别接种0.1ml至对照及含药培养基表面，置37℃培养，观察四周后菌落生长情况。 1.2.4 计算耐药百分比 （含药培养基菌落数/对照培养基菌落数）×100%。 注：对照培养基生长菌落数少于20个菌落，应重复试验。 2 结果 375例肺结核患者痰标本中，培养法共检出阳性标本188例，阳性检出率为50.1%（188/375），培养阳性标本药物敏感性试验中,莫西沙星有30株发生耐药，耐药率为16.0%;分离出的结核分支杆菌对11种抗痨药物耐药率见表3。 结核细菌对至少两种最强有力的一线抗结核药物异烟肼和利福平具有耐药性时，为耐多药结核（MDRTB）。188株中MDRTB 42株，占22.3%(42/188);42株耐多药结核菌对7种二线抗痨药的耐药详情见表4。 表4 42株耐多药结核菌对7种二线抗痨药的耐药情况 药物 耐药株 所占比例/% CIP 32 76.2 TH1321 31 73.8 OFL 30 71.4 PAS 25 59.5 Am 23 54.8 LVF 18 42.8 M0X 15 35.7 检测结果两种氟喹诺酮类药莫西沙星、左氧氟沙星耐药率较低，敏感性较好，比较42株多耐结核菌对这两种药物敏感性测试结果，MOX敏感LVF耐药株，MOX耐药LVF敏感株，MOX、LVF均耐药株均有一定的比例，详见表5。 表5 42株多耐结核菌对MOX与LVF敏感性测试结果比较/% 项目 MOX耐药株 MOX敏感株 LVF耐药株 26.2 (11/42) 16.7 (7/42) LVF敏感株 9.5 (4/42) 47.6 (20/42) 3 讨论 188株结核菌对11种抗痨药物的耐药顺序由高到低依次为CIP 66.5%、INH60.6%、PAS56.9%、TH1321 52.1%、RFP51.1%、SM44.1%、 EMB42.0%、Am44.1% 、OFL36.7 %、LVF26.0%、MOX 16.0%。188例肺结核患者多为来自河南省及周边地区的难治性结核，分离出的结核分支杆菌对11种抗痨药物耐药率较高，CIP、INH、PAS、TH1321、RFP五种抗痨药物的耐药率大于50%；在不同的抗痨药物中，莫西沙星的耐药率最低仅16.0%，莫西沙星的敏感性最好。结核通常可采用四种标准或一线抗结核药物的疗程进行治疗。如果这些药物被滥用或管理不当，则可发展为耐多药结核（MDR-TB）。结核菌对至少两种最强有力的一线抗结核药物异烟肼和利福平具有耐药性时，即为耐多药结核。188株中MDR-TB 42株，占22.3%(42/188);比较42株耐多药结核菌对7种二线抗痨药的耐药率可见：对耐多药结核菌仍是莫西沙星的敏感性最好；莫西沙星和左氧氟沙星两种氟喹诺酮类抗生素是耐药率较低，敏感性较好的抗生素，比较二者对MDR-TB株的药敏结果， MOX耐药LVF敏感株，MOX、LVF均耐药株，都有一定的比例，若无药敏结果，盲目用药，莫西沙星费用昂贵，将给患者造成极大的经济负担；而且新药被滥用或管理不当也会因此变得无效，所以莫西沙星虽是一种有效的抗结核药物，使用时仍应做结核菌敏感性测试，了解结核病患者的耐药情况，科学指导临床用药。