文章编号:16738640(2013)06051603 中图分类号:R446.5 文献标志码:A DOI:10.3969/j.issn.16738640.2013.06.015
HRHPVDNAPCR联合 TCT检测对
宫颈癌前病变的诊断价值
陈炎添, 陈青龙, 熊 燕, 苏雪棠, 黄伟刚, 石 胜, 郭翼华, 陈荣策
(江门市人民医院检验科,广东 江门 529020)
摘要:目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HRHPV)DNA聚合酶链反应(PCR)联合液基薄层细胞学检查
(TCT)对宫颈癌前病变筛查的应用与诊断价值。方法 对540例TCT结果为非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)及
以上的患者进行HRHPVDNAPCR检测,并对检测结果进行
。结果 TCT阳性合并 HPV阳性患者共259
例,其中ASCUS、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)的例数(阳性率)
分别为155例(59.8%)、81例(31.3%)、15例(5.8%)、8例(3.1%);259例患者中 ASCUS、LSIL、HSIL、SCC合
并HRHPV的阳性例数(阳性率)分别为28例(18.1%)、20例(24.7%)、10例(66.7%)、8例(100.0%)。HR
HPV和TCT单独检测的敏感性与两者联合检测的敏感性比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。HRHPV、TCT
及两者联合检测的阳性预测值分别为25.5%、11.1%、28.2%,阴性预测值分别为68.8%、59.2%、40.8%。结论
TCT与HRHPVDNAPCR检测是筛查宫颈病变的有效方法,能最大程度地发现宫颈异常细胞并及时发现宫
颈癌的诱因。
关键词:聚合酶链反应;液基薄层细胞学检查;高危型人乳头瘤病毒;宫颈癌;诊断
ThesignificanceofTCT combinedwithHRHPV DNA PCR determinationforthediagnosisof
precancerouslesions CHENYantian,CHENQinglong,XIONGYan,SUXuetang,HUANGWeigang,SHISheng,GUO
Yihua,CHENRongce. (DepartmentofClinicalLaboratory,JiangmenPeople′sHospital,GuangdongJiangmen
529020,China)
Abstract:Objective Toinvestigatetheapplicationandsignificanceofhighriskhumanpapillomavirus(HR
HPV)DNApolymerasechainreaction(PCR)combinedthinprepcytologytest(TCT)determinationforthediagnosisof
precancerouslesions.Methods Atotalof540patientsundergoingTCTdeterminationandshowingpositiveatypical
squamouscellsofundeterminedsignificance(ASCUS)andabovewereenrolledandperformedHRHPVDNAPCR,and
theresultswereanalyzed.Results ThenumberofTCTpositivecombinedHPVpositivewas259cases,including
ASCUS155cases(59.8%),lowgradesquamousintraepitheliallesion(LSIL)81cases(31.3%),highgradesquamous
intraepitheliallesion(HSIL)15cases(5.8%)andsquamouscellcarcinoma(SCC)8cases(3.1%).Inthe259
cases,thepositiveratesofASCUS,LSIL,HSILandSCCwere18.1% (28cases),24.7%(20cases),66.7%(10
cases)and100.0%(8cases),respectively.Thesensitivityofthecombinationdeterminationofthe2methodswas
higherthanthesensitivitiesofHRHPVdeterminationandTCTdeterminationwithstatisticalsignificance(P<0.05).
ThepositivepredictivevaluesofHRHPVdetermination,TCTdeterminationandthecombinationdeterminationofthe2
methodswere25.5%,11.1% and28.2%,respectively,andthenegativepredictivevalueswere68.8%,59.2% and
40.8%,respectively.Conclusions TCTcombinedwithHRHPVDNAPCRinthediagnosisofprecancerouslesionsis
aneffectivemethod.Itisanapproachforthediagnosisofearlycervicalcancerandprecancerouslesions.
Keywords:Polymerasechainreaction;Thinprepcytologytest;Highriskhumanpapillomavirus;Cervicalcancer;
Diagnosis
作者简介:陈炎添,男,1978年生,学士,主管技师,主要从事医学检验工作。
宫颈癌作为妇科生殖道三大恶性肿瘤之一,严
重影响女性身心健康及生命安全。我国宫颈癌的
发病率及病死率比较高,年发病率超过全世界发病
率的30%,每年大约死于宫颈癌的患者约有5万
人[1]。有文献报道,早期宫颈癌患者的5年治愈率
可高达90%,所以早发现、早诊断、早治疗对于宫
·615· 检验医学2013年6月第28卷第6期 LaboratoryMedicine,June2013,Vol28.No6.
网络出版时间:2013-06-14 10:51
网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/31.1915.R.20130614.1051.015.html
颈上皮内瘤变的患者有重大的意义 [2]。人乳头瘤
病毒(humanpapillomavirus,HPV)的持续感染是癌
前病变及宫颈癌发病的重要致病因子[3],有学者将
高危型(higurisk,HR)HPVDNA检测作为宫颈癌
筛查方法之一[4]。本研究拟探讨宫颈液基薄层细
胞学检查(thinprepcytologytest,TCT)联合 HR
HPVDNA聚合酶链反应(PCR)检测在提高宫颈癌
前病变的早期诊断中的价值。
和方法
一、研究对象
收集2009年10月至2011年9月来江门市
人民医院妇产科门诊进行宫颈癌前病变筛查的女
性948例,年龄20~65岁,平均年龄41.8岁,所
有病例均无子宫颈锥切、急性生殖道炎症及子宫
切除等病史。
二、仪器、试剂及试验方法
1.HPVDNAPCR 采用广州中山大学达安
基因股份公司生产的核酸扩增仪 DA7600型检
测系统进行PCR扩增、杂交、洗膜及显色,使用原
装配套试剂 HRHPV(18个型)核酸定量检测试
剂盒(PCR荧光法),可同时检测 18种 HRHPV
亚型,包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、
53、56、58、59、66、68、73、83、MM4。用宫颈刷置于
宫颈口转动4圈,以取得足量的分泌物及脱落细
胞,然后将宫颈刷放入备有1mL洗脱液的专用洗
脱管中送检或保存于 -20℃冰箱待测。检测时
将宫颈刷在洗脱管中充分漂洗,把洗脱液全部转
移到 1.5mL微量离心管中,11600×g离心
10mim,弃去上清液,保留管底的细胞块。加入
50μL裂解液悬浮沉淀,100℃水浴加热10min,
11600×g离心 10min,保留上清液待用。HPV
基因扩增:取1μLDNA抽提液,加入 HPVPCR
扩增体系,按照试剂盒的扩增程序进行扩增反应。
导流杂交法进行HPV基因的分型:将20μL生物
素标记的 PCR产物经过变性,与 1mL预热至
45℃的杂交缓冲液混合,在导流杂交仪HybriMax
上45℃孵育 5min后进行导流杂交。杂交后再
用0.8mL杂交缓冲液冲洗3次。在25℃下用封
阻液封阻孵育5min。封阻后加入0.5mL酶标液
孵育3.5min。用冲洗缓冲液 A冲洗杂交膜,去
除未结合的酶标液,显色过程中加入0.5mL四唑
硝基蓝(NBT)/5溴4氯3吲哚磷酸(BCIP)底物
在36℃保持3~5min或直到显色完成为止。在
显色后1h内察看分析结果。
2.TCT 擦去宫颈表面黏液,将宫颈细胞刷
插入距宫颈管内1cm处,顺时针旋转5圈左右,
取出转入细胞保存液中,对于瓶中收集到的细胞
经Prep2000系统程序化进行薄片涂片染色,TCT
制片后,均由专门医师阅片报告。诊断
采用
2001年国际癌症协会 TBS诊断系统:(1)正常范
围;(2)意义不明的非典型鳞状上皮细胞(AS
CUS)和腺细胞(AGUS);(3)不除外高度鳞状上
皮病变不典型鳞状细胞(ASCH);(4)低度鳞状
上皮内病变(LSIL);(5)高度鳞状上皮内病变
(HSIL);(6)鳞状细胞癌(SCC)和腺癌。
3.病理学检查 对于 TCT以及 HRHPV
DNAPCR结果呈阳性的病例均通过电子阴道镜
下或宫颈锥切下行病理活检,组织病理学 CIN分
级按Riehart标准判定诊断结果。
三、统计学方法
数据分析采用SPSS19.0统计软件进行统计
处理,本研究数据为成对计数数据,采用χ2检验,
P<0.05表示差异具有统计学意义。
结 果
一、TCT阳性合并 HPV阳性者共259例,其
中的AUSCS、LSIL、HSIL、SCC4种类型的阳性例
数及HPV感染率,见表 1。各组间的 HPV感染
率、HRHPV感染率、低危型(LR)HPV感染率互
相比较,差异具有统计学意义(P<0.05),即随着
癌前病变级别的升高,HRHPV的感染率亦明显
升高。
ASCUS和 LSIL患者多为 HPV阴性
或LRHPV感染的患者,HSIL和 SCC患者多为
HRHPV感染的患者,同时提示 SCC与 HRHPV
感染密切相关。
二、TCT结果异常者540例,其中活检为异常
者144例,符合率为26.7%;TCT正常者408例,其
中活检为正常者408例,符合率为100.0%,两者差
异具有统计学意义(P<0.01)。
三、活检确诊 CINⅡ级以上者 73例,HR
HPV阳性66例,敏感性90.4%,TCT阳性60例,
敏感性为82.2%,两者敏感性差异无统计学意义
(P>0.05)。2种方法联合检测敏感性升高,与
TCT和HRHPV单独检测敏感性比较差异具有
统计学意义(P<0.05)。活检确诊为阴性者804
例,HRHPV检测阴性。HRHPV、TCT及HRHPV
和TCT联合检测的阳性预测值分别为25.5%、
·715·检验医学2013年6月第28卷第6期 LaboratoryMedicine,June2013,Vol28.No6.
11.1%、28.2%,阴性预测值分别为 68.8%、 59.2%、40.8%,见表2。
表1 ASCUS、LSIL、HSIL、SCC4种类型的阳性例数及HPV感染率的比较
类型
HPV
阴性 阳性 感染率(%)
HRHPV
阳性 感染率(%)
LRHPV
阳性 感染率(%)#
ASCUS 209 155 59.8 28 18.1 127 81.9
LSIL 68 81 31.3 20 24.7 61 75.3
HSIL 4 15 5.8 10 66.7 5 33.3
SCC 0 8 3.1 8 100.0 0 0.0
注: 为在HPV阳性中HRHPV所占的比例;#为在HPV阳性中LRHPV所占的比例
表2 宫颈癌HRHPV和TCT的敏感性、特异性 (%)
类型 敏感性 特异性 阳性预测值 阴性预测值
HRHPV 90.4(66/73) 59.0(474/804) 25.5(66/259) 68.8(474/689)
TCT 82.2(60/73) 50.7(408/804) 11.1(60/540) 59.2(408/689)
HRHPV和TCT联合 100.0(73/73) 35.0(281/804) 28.2(73/259) 40.8(281/689)
讨 论
由于从宫颈癌前病变发展为宫颈癌是一个时
间漫长的过程,如果能及时早期发现宫颈癌并给
予恰当的处理,宫颈癌是可以治愈的。女性在感
染HPV后,30%~50%会出现宫颈上皮内轻度病
变,但大部分在感染 HPV后转为正常,只有 HR
HPV持续感染的女性,才成为宫颈癌的高发人
群[5]。由HRHPV感染到发展成为宫颈癌约需9
~25年时间,潜伏期长有可能与病毒整合到宿主
核基因组适当的位置需要很长时间有关[6],因
此,选择合理、
的宫颈癌早期筛查的方法对于
提高其检出率具有重要意义[7]。目前使用 TCT
方法能够采集到颈管细胞,制作时剔除了宫颈黏
液和炎性细胞,其清晰度和检出率均明显高于常
规的宫颈涂片,但同时也发现 TCT对 HPV诊断
有一定的漏诊率[8]。从本研究结果可以看出,联
合检测TCT和 HRHPV对宫颈癌的检出率比单
独检测TCT或HRHPV高,联合检测方法对诊断
宫颈癌具有重要意义。
本研究中TCT阳性的患者,HRHPV感染率
随着宫颈病变程度的加重呈上升趋势,从而认为
HRHPV感染与宫颈病变的严重程度呈正相关。
宫颈癌的筛查中 HRHPV检测是一个非常有意
义的指标。本研究还发现,ASCUS与 LSIL患者
多为HPV阴性或 LRHPV感染的患者,HSIL与
SCC患者多为HRHPV感染的患者,从而说明感
染HPV的危险类型与细胞学分级一致,低危型者
细胞分化好,高危型者细胞分化差,与文献[9]报
道相类似。
参 考 文 献
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(收稿日期:20120421)
(本文编辑:姜 敏)
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