ChemiDocXRS ImageLab操作指南

使用Image Lab 软件进行化学发光成像建立您的程序: 1. 在凝胶成像(Gel Imaging)对话框中选择Chemi(化学发光)应用程序 2. 在成像区域(Imaging Area)对话框中的下拉菜单里选择合适的样品大小(非必需) 3. 选择成像曝光(Image Exposure)方法可以人为估计曝光时间并手控设定(Manual Exposure),或者使用信号累积模式(Signal Accumulation Mode,SAM) 在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定,因为您想获得一个充分利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被识别;过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和(也就是说,超出了相机准确信号的能力)。 如果这是您第一次用ChemiDoc XRS+化学发光样品,您需要在使用手控或信号累积模式(SAM)之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取得一个相对短的手工曝光并利用Image Lab里的工具估计最适的曝光时间。 手控曝光 1. 选择手控设定曝光时间(Manually set exposure time)并在读秒框中输入10 秒。 2. 选择Highlight saturated pixels 。 3. 把胶置于透射箱的中心位置。 4. 在程序窗口中点击按钮。 5. 在你的显示器上看样品的实时图像时,打开的成像仪的门并手工移动样品直至它位 于视野的中心区域。 6. 如果必要的话,利用照相机的变焦滑板调 节成像区域的大小。 7. 选择按钮获得你的第一个成像。 如果您所需的图像在计算机的显示器上出现,寻找图像中的不能定量的红色的饱和区域。如果您看到了饱和区域,请重新用一个较短的时间成像。 如果没有饱和区域,移动鼠标置于最暗的条带之上。在较低的右下角Image Lab窗 口中看信号的强度值。在这个例子里,强度为 1994。这大约是照相机能记录的最大值的32分之一(最大值为65,535)。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相机的最大动态范围附近成像你的样品。如果你只需要对单一图像的成像时间估计的话,直接在手工曝光区域里输入300。 信号累积模式(Signal Accumulation Mode,SAM) 如果预估方法不足以精确满足您的目的,请选 择SAM按钮,然后按Setup按钮。一个新的对话 框会跳出来,其包含有可输入细分的成像时间的领 域。 在这个例子中,我们已经输入了小于和大于我 们原始的300秒曝光估计时间,因为我们有理由相 信准确的成像时间将会在这些时间之中。我们总共 想要5个成像,推测其中一个将会与最佳成像极为 接近。一个您的SAM设定的图像显示出现在对话 框里。 在您选择按钮然后按钮后,您会看到一个进度条显示着整体的成像时间。在250秒第一个图像出现在主程序窗口,同时一个小的缩略图将出现在窗口下方。在275秒,第二个图像出现在程序窗口,同时在窗口下方会加入第二个小的缩略图。这个过程将持续至所有的5个图像都被获得。 就像前面做过的那样,通过移动鼠标在图像上,您能判定强度值。您也可以通过使用位于程序窗口左边的图像转换窗口(Image Transform)中的调节划片改变图像的观。在SAM程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。 如果您发现一个符合您的图像,点击按钮放弃任何其它的不满意图像,删除在缩略图窗口中的其它图像,完成建立您的程序。您也能在SAM获得期间或之后保存图像。简单地右键单击缩略图窗口内的任意图像并命名保存在您的系统里。 从相似实验中获得的转印膜经常产生相似的化学发光信号,所以您也能够打开并重新利用一个SAM程序处理一个好的曾经获得的图像。 在决定获取图像的数量时,记住增加SAM图像会导致背景信号的平均。当较多的图像被获得时,在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信号很重要,我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。