干粉引物溶解稀释方法：

干粉引物溶解稀释方法： 干粉引物溶解稀释方法: 收到引物后，在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟，以防开盖时引物干粉散失。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。引物一般配制成10-100pmol/ul(umol/l)。 三博远志的引物在出厂时都标有1OD 相当于多少umol 的计算结果，进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算: 稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量(ul)=1OD相当于umol 数×10000 例如，您拿到的引物DNA合成单上标有1OD?0.0035umol ，包装量是1OD/管，如果您希望将引物浓度定为100umol/L，那么只需用35ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可。 ?液体引物再稀释可用下列公式: 稀释引物要达到的浓度(pmol/ul),母液浓度(pmol/ul)×汲取母液的体积(ul)?(汲取母液的体积(ul)，加水量(ul)) ( Oligo DNA是以OD260单位来计算的，这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，260nm波1 长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位，根据此定义，1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA，您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量，计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。 2( 引物序列的分子量计算公式如下: MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61 A=1 C=3 G=11 T=6 例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=6541 3( Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算:Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5，则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。 例:您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA 分子量=20×324.5=6490 质量数=5×33=165μg 摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol 若加灭菌双蒸水400μl溶解，则浓度为25nmol/400μl=62.5μM 4( 装有引物的eppendorf管一般保存于-20?，临用前稀释。 5( 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管子前请先离心10,000rpm，1min，然后再慢慢打开管盖。 6( 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水，盖上管盖，充分上下振荡5-10分钟，再次离心10,000rpm，1min。 7( 计算原引物管primer的浓度(必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确)。 8( 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。 9( 标明原引物管、应用引物管、稀释方法，置-20?保存。