临床医学毕业论文igfⅱ,igfⅰr在结肠腺瘤中的表达及其生物学意义

临床医学毕业论文igfⅱ,igfⅰr在结肠腺瘤中的表达及其生物学意义 X X 大学 毕业论文 IGF ?,IGF ?R在结肠腺瘤中的表达及其生物学意义 姓 名:__________ 2014年6月25日 IGF ?,IGF ?R在结肠腺瘤中的表达及其生物学意义 作者:赵凯， 范 钰， 沈琰， 李新忠， 张小平， 袁永翀 【摘要】 目的: 观察IGF ?,IGF ?R在结肠腺瘤中的表达，探讨其生物 学意义。方法: 免疫组化方法分别检测IGF ?,IGF ?R,PCNA在正常结肠黏 膜组(A组n=20)、低级别上皮内瘤变组(B组n=50)、高级别上皮内瘤变组(C 组n=50)和结肠癌组(D组n=20)中的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果: IGF ?,IGF ?R,PCNA在结肠癌组和高级别上皮内瘤变组中呈高表达，两者 之间无显著差异(P0.05)，分别与低级别上皮内瘤变组、正常大肠黏膜组相比表达 有显著差异(P0.01);低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、结肠癌组的凋 亡指数(apoptotic index,AI)逐渐降低，且两两比较有显著差异(P0.01)。IGF ?,IGF ?R的表达与增殖指数(proliferative index,PI)成正相关、与AI成负相 关;PI,AI在低级别上皮内瘤变组IGF ?,IGF ?R阴性和阳性中无显著差异 (P0.05)，在高级别上皮内瘤变组则有显著差异(P0.01)。结论: IGF ?,IGF ? R的异常表达与结肠腺瘤癌变密切相关;IGF ?,IGF ?R促进细胞异常增殖， 抑制肿瘤细胞凋亡，在结肠腺瘤癌变过程中起了重要的作用。 【关键词】 胰岛素样生长因子 ?; 胰岛素样生长因子 ?受体; 结肠腺瘤 ,Abstract, Objective: To observe the expression of IGF ?and IGF ?R in colorectal adenoma and investigate its biologial significance. Methods: 140 patients were divided into four groups:20 cases of normal colon mucosa(A group)， 50 cases of low grade colon intraepithelial neoplasia(B group)，50 cases of high grade colon intraepithelial neoplasia(C group) and 20 cases of colorectal carcinoma(D group). The expressions of IGF ?,IGF ?R,PCNA and apoptosis were detected by immunohistochemical and TUNEL. Results: The expressions of IGF ?, IGF ?R and PCNA in C and D group was higher than A and B group and there was no significant difference between C and D group(P0.05); compared with A and B group there were significant differences(P0.01); AI(Apoptotic index) in adenomas and adenocarcinomas of adenoma carcinoma sequence was gradually less(P0.0l).The expressions of IGF ?, IGF ?R had positive correlation with the expression of PI(proliferative index) and negative correlations with the expression of AI. The expression of PI,AI in B group had no significant difference between the positive and negative expression of IGF ?,IGF ?R(P0.05),but in D group had significant difference(P0.01). Conclusion: Abnormal expressions of IGF ?,IGF ?R have intently relations from colorectal adenoma to carcinoma; IGF ?and IGF ?R can promote cell abnormal proliferation and inhibit tumor cell apoptosis.And have an important effect on the process from colorectal adenoma to carcinoma. ,Key words, IGF ?; IGF ?R; colorectal adenoma 结肠癌是常见的恶性肿瘤之一，是经腺瘤阶段多基因改变、多阶段发展的 过程，结肠癌的癌变机制与细胞的增殖、分化、凋亡调控异常密切相关。胰岛素 样生长因子(insulin like growth factors, IGF)与细胞增殖、凋亡以及肿瘤的发 生密切相关，IGF ?,IGF ?R作为IGF家族的重要成员，与结肠癌的相关性 日益受到关注,1,。本实验通过免疫组化SP法检测IGF ?,IGF ?R,增殖细 胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在结肠腺瘤组织中的表达， TUNEL法检测细胞凋亡，进一步探讨IGF ?,IGF ?R在结肠腺瘤癌变中的 作用。 1 对象与方法 1.1 研究对象 本实验收集了2004年1月,2007年3月我院及江苏大学附属医院手术切 除或结肠镜活检的结肠腺瘤组织存档蜡块100例，并按照《全国大肠癌病理研究 统一》之标准进行腺瘤分类、不典型增生分级以及腺瘤癌变的诊断。实验中 将不典型增生分为两大类:低级别上皮内瘤变组50例和高级别上皮内瘤变组50例，另选20例正常结肠黏膜组织及20例结肠腺癌黏膜组织作为对照。所有患者均未行化疗、放疗及免疫治疗。实验前行HE染色以证实诊断。 1.2 方 法 所有标本经4 μm厚连续切片，免疫组化SP法进行染色，显微镜观察结果。兔抗人IGF ?多克隆抗体、兔抗人IGF ?R多克隆抗体购自博士德生物工程有限公司，兔抗人PCNA多克隆抗体、TUNEL试剂盒购自博奥森生物工程有限公司。IGF ?,IGF ?R的染色结果判定参考Kawamato的标准:光学显微镜下棕黄色细胞数30%为阴性;31%,50%记为(+);51%,80%记为(++);?81%记为(+++)。细胞增殖指数(proliferative index,PI)以PCNA阳性细胞数为判断结果:即平均每100个细胞中PCNA阳性细胞数。TUNEL法检测细胞凋亡，以凋亡指数(apoptotic index,AI)为判断结果:即平均每100个细胞中凋亡细胞数。 1.3 统计学分析 采用SPSS11.5统计学软件对实验数据进行统计学处理，率的比较采用χ2检验及Fisher确切概率计算法，以α=0.05为显著性检验水准。 2 结 果 2.1 各组中IGF ?,IGF ?R阳性表达率及细胞增殖和凋亡指数 IGF ?阳性表达率,IGF ?R阳性表达率和细胞增殖指数(PI)在正常结肠黏膜组、结肠腺瘤组、结肠癌组中逐渐增高;结肠癌组和高级别上皮内瘤变组比较无显著差异(P0.05);结肠癌组和高级别上皮内瘤变组分别与正常结肠黏膜组、低级别上皮内瘤变组比较有显著差异(P0.01);正常结肠黏膜组、低级别上皮内瘤变组比较有显著差异(P0.05)。细胞凋亡指数(AI)在低级别上皮内瘤变 组、高级别上皮内瘤变组、结肠癌组中逐渐降低，两两比较均有显著差异(P0.01)。见表1。表1 各组中IGF ?,IGF ?R的阳性表达率及细胞增殖和凋亡指数 2.2 IGF ?,IGF ?R的表达与PI的关系 IGF ?在结肠腺瘤中的表达与PI呈正相关(r=0.747，P0.01);IGF ?R在结肠腺瘤中的表达与PI呈正相关(r=0.738，P0.01);PI在低级别上皮内瘤变组(B组)IGF ?,IGF ?R阳性与阴性组之间无显著差异(P0.05)，在高级别上皮内瘤变组(C组)两者之间有显著差异(P0.01)，见表2。 2.3 IGF ?,IGF ?R的表达与AI的关系 IGF ?在结肠腺瘤中的表达与AI呈负相关(r=-0.655，P0.01);IGF ?R在结肠腺瘤中的表达与AI呈负相关(r=-0.661，P0.01);AI在低级别上皮内瘤变组IGF ?,IGF ?R阳性与阴性无显著差异(P0.05)，在高级别上皮内瘤变组两者之间有显著差异(P0.01)，见表3。表2 IGF ?,IGF ?R在结肠腺瘤中的表达与PI的比较表3 IGF ?,IGF ?R在结肠腺瘤中的表达与AI的比较 3 讨 论 胰岛素样生长因子(IGF)主要与肿瘤的自分泌和旁分泌生长调节有关，作为促有丝分裂因子对肿瘤的生长有促进作用，在多种肿瘤组织中过度表达，促进肿瘤细胞的形成与增殖，与恶性肿瘤的发生、发展有密切的关系。目前研究认为IGF ?促进细胞增殖生长的活性主要由IGF ?R介导，IGF ?R的表达上调与结肠癌的发生发展关系密切,1,。郭宝文等,2,研究发现IGF ?,IGF ?R表达与大肠癌的发生、发展和侵袭转移密切相关。本实验研究结果显示IGF ?,IGF ?R的阳性表达率在正常结肠黏膜组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、结肠癌组中逐渐增高;在结肠癌组和高级别上皮内瘤变组呈高表达，两者比较无显著差异，但两者分别与正常大肠黏膜组、低级别上皮内瘤变组比较 有显著差异。提示结肠腺瘤癌变过程中IGF ?,IGF ?R出现过度表达。 IGF ?,IGF ?R的主要功能为促进细胞增殖和分化。增殖细胞核抗原(PCNA)与肿瘤的发生、发展、浸润、转移密切相关，已作为一项评估细胞增殖状态的指标广泛用于恶性肿瘤的研究,3,。Kawamoto等采用免疫组化法检测92例大肠癌标本,4,，发现肿瘤组织中IGF ?高表达，并且与PCNA表达呈正相关。本研究结果显示，PI在正常结肠黏膜组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组及大肠癌组中逐渐增高。提示腺瘤组织的细胞异常增殖促进了大肠癌的发生，高级别上皮内瘤变组腺瘤上皮已具有与恶性细胞十分相似的异常细胞增殖能力。本研究结果还表明:IGF ?,IGF ?R在腺瘤中的表达与PI均呈正相关;PI在低级别上皮内瘤变组IGF ?,IGF ?R阴性及阳性组中均为低增殖指数，两者之间无显著差异;在高级别上皮内瘤变组均为高增殖指数，且阳性组与阴性组的表达有显著差异。提示IGF ?,IGF ?R可能通过促进细胞异常增殖促进了结肠癌的发生。 肿瘤的发生与细胞凋亡的紊乱有关，IGF及其受体是抗凋亡信号的主要调节者,5,。Wu等,6,发现IGF ?R过度表达可以阻止肿瘤细胞凋亡，并指出IGF ?R阻止肿瘤细胞凋亡的作用是通过作用于其受体，最终导致位于细胞内的受体活性部位酪氨酸激酶的活化。张亚武等,7,采用免疫组化法检测人大肠癌细胞株HT 29中IGF ?R及其抗体的表达发现，IGF ?R McAb通过阻断IGF ?R抑制结肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。本研究显示随着腺瘤向腺癌转化，凋亡细胞比例逐渐下降，这一结果与Bedi等,8,及孙保存等,9,报道的基本一致;IGF ?,IGF ?R的表达均与AI呈负相关;AI在低级别上皮内瘤变组IGF ?,IGF ?R阳性与阴性之间无显著差异，在高级别上皮内瘤变组IGF ?,IGF ?R阳性与阴性之间则有显著差异 。结果提示IGF ?,IGF ?R可能通过抑制肿瘤细胞凋亡促进了结肠癌的发生。 综上所述，IGF ?,IGF ?R的异常表达与结肠腺瘤癌变密切相关;IGF ?,IGF ?R可能通过促进细胞异常增殖、抑制肿瘤细胞凋亡，而导致结 肠腺瘤癌变的发生;IGF ?,IGF ?R作为结肠腺瘤癌变的预测指标，值得临 床进一步探讨。 【参考文献】 ,1, 苏文利.大肠癌中胰岛素样生长因子的研究进展,J,.医学综述，2004， 10(5):259-260. ,2, 郭宝文，吴敏兰，杨 琳，等.IGF ?和IGF ?R在大肠癌中的表达,J,. 山东医药,2005,45(10):6-8. ,3, 肖秀英.PCNA在恶性肿瘤中的研究进展,J,. 张家口医学院学报，2003， 20(6):42-44. ,4, Kazuyki K,Onodera H,Kondo S,et al.Expression of insuln like growth factor 2 can predict the prognsis of hunan colorectal cancer patients:correlation with tumor progression,proliferative activity and survival ,J,.Oncology,1998,55(1):242-248. ,5, 牛朝诗. IGF ?R与细胞增殖、凋亡和肿瘤,J,. 国外医学:生理、病 理科学与临床分册，2000，20(3):212-215. ,6, Wu X,Fan Z,Masui H,et al.Apoptosis induced by an anti epidermal growth factor receptor monoclonal antibody in a human colorectal carcinoma cell line and its delay by insulin ,J,.J Clin Invest，1995，95(4):1897-1905. ,7, 张亚武，张有成，张小明，等.胰岛素生长因子?型受体单克隆抗体对结 肠癌细胞生长的影响,J,.中国普外科杂志，2006，21(3):200-202. ,8, Bedi A,Pasricha PJ,Akhtar AJ,et al.Inhibition of apoptosis during development of colorectal cancer ,J,.Cancer Res,1995,55(9):1811-1816. ,9, 孙保存，赵秀兰，惠 京，等.大肠癌及其癌前病变中细胞凋亡与细胞增 殖关系的原位观察 ,J,.中华医学杂志，1996,76(4):848.