RP-HPLC法测定复方泰妙林注射液中泰妙菌素、磺胺嘧啶钠的含量

RP-HPLC法测定复方泰妙林注射液中泰妙菌素、磺胺嘧啶钠的含量 RP-HPLC法测定复方泰妙林注射液中泰妙 菌素、磺胺嘧啶钠的含量 第36卷第l2期 20o7年l2月 辽宁化工 HaoningChemicalIndustry Vo1.36,No.12 December,2007 PDA—RP—HPLC法测定复方泰妙林注射液中 泰妙菌素,磺胺嘧啶钠的含量 张小华,葛竹兴,秦枫,陶冠红 (1.江苏畜牧兽医职业技术学院药物中心,江苏泰州225300;2.苏州大学化学化工学院,江苏苏州215123) 摘要:目的建立反相液相色谱分离二极管阵列双波长检测法测定复方泰妙林注射液中泰妙 菌素,磺胺嘧啶钠的含量的方法.方法采用Shim—packCLC—ODS柱(150mm×6mm,5m),流动相 为8O%乙腈一O.7%磷酸氢二铵(体积比为0.3:0.7),并用氨试液调节pH至8.0?0.1,流速为1.0 mlJmin,泰妙菌素和磺胺嘧啶钠的检测波长分别为208nm,241nm,柱温为4o?.结果在此色谱条件 下两者能完全分离,泰妙菌素和磺胺嘧啶钠分别在5—4Og/mL,10—80I~g/mL范围内,浓度与峰面积 呈良好的线性关系(R=0.9999),泰妙菌素和磺胺嘧啶钠回收率分别为99.6O%一99.99%和99.7O %一100.3%,相应的相对标准偏差分别为0.40%,0.75%和0.45%,0.80%.结论方法简便,快 速,准确,可用于复方泰妙林注射液的含量测定. 关键词:反相液相色谱法;复方泰妙林注射液;泰妙菌素;磺胺嘧啶钠 中图分类号:O657.7文献标识码:A文章编号:1004—0935(2007)l2一o824一o4 复方泰妙菌素注射液是我院独立研制的三类 新兽药,其主要成分为泰妙菌素,磺胺嘧啶钠.磺 胺嘧啶钠属中效磺胺类药物,在结构上类似对氨 基苯甲酸(PABA),可与PABA竞争性作用于细 菌体内的二氢叶酸合成酶,从而阻止PABA作为 原料合成细菌所需的叶酸,减少具有代谢活性的 四氢叶酸的量,抑制细菌的生长繁殖.对非产酶 金黄色葡萄球菌,化脓性链球菌,肺炎链球菌,大 肠埃希菌,克雷伯菌属,沙门菌属,变形杆菌属,摩 根菌属,志贺菌属等肠杆菌科细菌,淋病奈瑟菌, 脑膜炎奈瑟菌,流感嗜血杆菌均具有良好抗菌活 性.但近年来细菌对本品的耐药性增高,尤其是 链球菌属,奈瑟菌属以及肠杆菌科细菌.泰妙菌 素,又称泰妙林,是通过发酵培养和半合成生成的 一 种双萜类畜禽专用抗生素.它的抑菌机制是在 核糖体水平上抑制微生物体内蛋白质的合成而发 挥抑菌作用,对革兰氏阳性菌及支原体有特效,特 别是金黄色葡萄球菌,链球菌,多种霉形体和某些 螺旋体具有较强的作用.药效试验明:磺胺嘧 啶钠,泰妙菌素合用具有协同抗菌作用.在临床 上可用于细菌感染引起的猪和家禽腹泻,也可用 于细菌,支原体的引起的呼吸道感染疾病的治疗. 目前,文献报道:磺胺嘧啶钠含量测定方法主要有 亚硝酸钠滴定法?,紫外分光光度法;泰妙菌 素含量测定方法主要有抗生素检测法,高氯酸滴 定法. 1实验部分 1.1仪器与试药 1.1.1仪器 日本岛津高效液相色谱仪(配有SCL一 10AVP系统控制器,LC一10ATVP泵,CTO一 10ATvp柱温箱,SPDM10AVP二极管阵列检测器, CLASS—VP6.14spl色谱工作站).KQ3200DB超 声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司); 1810B自动双重纯水蒸馏器(上海嘉定生声玻璃 仪器厂). 收稿日期:2007.o8一l2 作者简介:张小华(1970一),男,讲师. 第36卷第12期张小华,等:PDA—RP—HPLC法测定复方泰妙林注射液中泰妙菌 素,磺胺嘧啶钠的含量825 1.1.2试药 乙腈(HPLC级);磷酸氢二铵(AR级);双重 蒸馏水;泰妙菌素,磺胺嘧啶钠对照品(江苏倍康 药业有限公司提供);复方泰妙林注射液(江苏动 物药品工程研发中心). 1.2实验方法 1.2.1色谱条件 shim—packODS—C18色谱柱(150nqIn×6 nqIn,5ta~rn);流动相为8O%乙腈一O.7%磷酸氢 二铵(体积比O.3:O.7),并用氨试液调节pH至 8.0?0.1,流速为1.0mL/min;柱温为4Oc【=;泰 妙菌素检测波长为208nln,磺胺嘧啶钠检测波长 为241nlTl;进样量2OL. 1.2.2对照品溶液的配制 分别精密称取泰妙菌素对照品25mg,磺胺 嘧啶钠对照品50mg,置于100mL容量瓶中,流 动相溶解,再用流动相稀释至刻度,摇匀,作为储 备液.从中吸取精密2.00mL置于50mL容量 瓶,再以流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶 液,备用. 1.2.3供试品溶液的配制 精密吸取复方泰妙林注射液适量(约相当于 泰妙菌素4Omg,磺胺嘧啶钠100mg).置于100 mL容量瓶中,流动相溶解,再用流动相稀释至刻 度,摇匀,作为储备液.从中精密吸取2.00mL置 于50mL容量瓶,再以流动相稀释至刻度,摇匀, 作为供试品溶液,备用. 1.2.4含量测定 分别取对照品溶液及供试品溶液各进样2O ,测定峰面积,按峰面积外标法定量.其色谱 图如图1和图2所示. 2结果与讨论 2.1测定波长的选择 根据二极管阵列检测器所检测的泰妙菌素, 磺胺嘧啶钠三维色谱图,在其色谱峰处,可以分别 得到两者的吸收光谱曲线,如图3所示.由图可 见,为了使泰妙菌素,磺胺嘧啶钠二者的测定结果 都有较高紫外检测灵敏度和精密度,可将二者的 检测波长分别定为208nm,241nm. 1:208nm,2nm ?--—— huang?tml S-sd?tml?l0.dat Pk# l2 t/min 图1对照品溶液在检测波长为208nm, 241nnl处的层叠色谱图 l一泰妙菌素;2一磺胺嘧啶钠. l:208nm.2nln ?-—— huang-tml s?sd?tml?l0.dat l2 t/rain 图2供试品溶液在检测波长为208nm, 241nm处的层叠色谱图 l一泰妙菌素;2一磺胺嘧啶钠. 图3泰妙菌素和磺胺嘧啶钠的吸收光谱 l一泰妙菌素;2一磺胺嘧啶钠. 2.2流动相的选择 本实验参照文献曾以乙腈一水为流动相, 826辽宁化工2007年12月 但泰妙菌素和磺胺嘧啶钠不能正常出峰.经过多 次试验证明,流动相为8O%乙腈一O.7%磷酸氢 二铵(体积比O.3:O.7),并用氨试液调节pH至 8.0?0.1,流速为1.0mIMmin时,泰妙菌素和磺 胺嘧啶钠能正常出峰,而且分离完全. 表1不同批号样品中泰妙菌素,磺胺嘧啶钠的 分析结果(,l=5) 样品批号泰妙菌素/%RSD/%磺胺嘧啶钠/%RSD/% 2007021297.5O.7197.2O.6O 2007021695.6O.4297.5O.46 2007031094.80.5395.20.80 2007031594.60.6695.50.48 200703179560.6695.50.47 注:以上分析结果为标示量百分数. 2.3线性回归方程 精密吸取对照品储备液1.00,2.0o,4.00,6. 00,8.00mL分别置于50mL棕色容量瓶中加流 动相稀释至刻度,摇匀.在上述色谱条件下分别 进样2OL,得回归方程.泰妙菌素A=47205. 9p+2003.72,R=0.9999;磺胺嘧啶钠A=95 906.8p+10140.1,R=0.9999.结果表明:泰妙 菌素在5,40~g/mL和磺胺嘧啶钠在l0,80 ~g/mL范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关 系. 2.4回收率和精密度实验 按复方泰妙林注射液处方比例精密称定泰妙 菌素和磺胺嘧啶钠对照品及辅料适量,配成模拟 品.精密量取模拟品适量,用流动相配成高,中, 低3种不同浓度水平的溶液,按实验方法测定,每 一 浓度样品平行测定5次,分别计算平均回收率 和相应的相对标准偏差(RSD).泰妙菌素和磺胺 嘧啶钠的平均回收率分别为99.6o%一99.99% 和99.7O%一100.3%;RSD分别为0.40%一0. 75%和0.45%一0.80%. 2.5稳定性 精密吸取上述回收率试验溶液1份,在6h 内每隔1h时进样一次,测量泰妙菌素,磺胺嘧啶 钠的峰面积,按法计算其峰面积RSD分别为0.8O %,0.86%.这说明在6h范围内,溶液的稳定性 良好. 2.6样品分析 按含量测定方法测定5份样品,每份样品平 行测定5次,所得分析结果如表1所示. 3结论 本法简便,快速,准确,可用于复方泰妙林注 射液质量控制. 参考文献 [1]国家兽药典委员会编.中华人民共和国兽药典(二部) [M].化学工业出版社,2005:352. [2]常雪君,李艳.紫外法测定磺胺嘧啶钠注射液的含量[J]. 黑龙江医药科学,2002,25(3):23. [3]中华人民共和国农业部.进口兽药质量标准[M].2006年 版:7O一71. DeterminationofTiamulinandSulfadiazineSodiuminCompoundTiamulinInjection byRP—HPLCwitIlPhotodiodeArrayDetection ZHANGXiao.hua,伽Zhu.xing,QINFeng,TA0,l一/tong (1.DrugAnalysisCenter,JiangsuAnimalHusbandryandVeterinaryCollege,Taizhou22530 0,China; 2.DepartmentofChemistryandChemicalEngineering:S~houUniversity:Suzhou215123. China) Abstract:objective:ToestablishaPDA—RP— HPLCmetllodfordeterminationoftiamulinandsulfadiazlnesodiumintom. poundtiamulininjection.Shim—packCLC—ODScolumn(150mill× 6mm,5II,m)wasused.Themixtureof8O%aeetion. trile一 0.7%an'l/noniullldihydrogenphosphate(0.3:0.7)WgSadoptedasthemobile,andaajustedt opH8.0?0.1byallllno- nialiquor.Theflowratewas1.0mL/min.Thewavelengths208nmand241amwereusedfordetectionoftiamulinandsulfadia- zincsodium,respectively.Thetemperatureofcolumnwas40.Results:Undertheadoptedchromatographiccondition.the tiamulinandsulfadiazinesodiumCOuldbecompletelyseparated.Thestandardcurvesfortiarnulinandsulfadiazinesodium眦 linearintheconcentrationrangeof5—4og/mLand10— 8Og/mL(R=0.9999),respectively.eaveragerecoveriesof tiamulinandandSulfadiazineSodiumwere99.60%一99.99%and99.70%一 1oo.3%.thRsDO.40%一O.75%and0. 45%一 O.8O%,respectively.Conchsions:ThemethodWasconvenient.rapid,accuratefordeterminationoftiamulinandsulfa- diazinesodiumincompoundtiamulininjection. Keywords:PDA—RP— HPLC:Compoundtiaraulininiection:Tiamulin:SulfadiazineSodium