液相色谱三重四级杆质谱联用法同时测定豆芽中2,4―滴和6―苄基腺嘌呤

液相色谱三重四级杆质谱联用法同时测定豆芽中2,4―滴和6―苄基腺嘌呤 摘要:建立一种超声提取-液相色谱三重四级杆联用法(LC-MS/MS)同时测定豆芽中2，4-滴、6-苄基腺嘌呤2种植物生长调节剂的方法。酸化甲醇作为提取溶剂，涡旋2 min，超声波提取10 min，酸化甲醇定容;反相色谱柱分离，电喷雾离子化(ESI+/-)和多离子反应监测(MRM)方式定量测定;加标回收试验2，4-滴添加浓度分别为5，10，20 μg/kg，6-苄基腺嘌呤添加浓度为5，10，20 μg/kg，平均回收率为85.0%,105.3%，相对标准偏差(RSD) ，4-滴，6-苄基腺嘌呤检出限分别为1.0、2.0 μg/kg。方法快捷、简便、样1.0%,3.2%;2 品前处理时间少，适合食品监管中大批量样品快速测定使用。 本文采集自网络，本站不保证该信息的准确性、真实性、完整性等，仅供学习和研究使用，文中立场与本网站无关，版权和著作权归原作者所有，如有不愿意被转载的情况，请通知我们删除已转载的信息。 关键词:2，4-滴;6-苄基腺嘌呤;液相色谱三重四级杆质谱联用法(LC-MS/MS);豆芽 中图分类号:S481+2;TS202.3 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2016)23-6228-03 DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.23.057 Abstract: A method for the simultaneous determination of 2，4-Dichlorophenoxyacetic and 6-benzyladenine in bean sprouts was developed by ultrasonic extraction and LC-MS/MS. Samples were extracted using acidulated methanol as extraction solvent，with 2 min vortex，10 min ultrasonic extraction， and constant volume by acidulated methanol，then were separated with reversed phase column and determined quantitatively with the multiple reaction monitoring(MRM) mode and electrospray ionization(ESI+/-). The standard recovery tests showed that the additive concentration of 2，4-Dichlorophenoxyacetic were 5，10，20 μg/kg respectively， the additive concentration of 6-benzyladenine were 5，10，20 μg/kg respectively，and the average recovery was in the range of 85.0%,105.3%， the relative standard deviations(RSDs) was in 1.0%,3.2%，and the limit of detections of 2，4-Dichlorophenoxyacetic and 6-benzyladenine was 1 μg/kg and 2 μg/kg respectively. The method was rapid， convenient and cut down pretreatment time of samples， suitable for the rapid determination of large batch samples. Key words:2，4-Dichlorophenoxyacetic;6-benzyladenine;liquid chromatography-tandem triple quadruple mass spectrometry; bean sprouts 6-苄基腺嘌呤(6-benzylarninopuring，6-BA)是一种人工合成的细胞分裂素，结构见图1。为白色或类白色晶体，难溶于水，微溶于乙醇，在酸、碱中稳定。具有抑制植物叶内叶绿素、核酸和蛋白质分解的作用，主要用于粮食、果树栽培和园艺，作物各个生长阶段都可应用[1]。6-BA目前被广泛用作无根豆芽的生长调节剂。人体摄人过多6-BA会刺激皮肤黏膜，造成食道、胃黏膜损伤，出现恶心、呕吐等?F象[2]。中国将6-BA作为允许使用的食品添加剂，但尚未建立食品中6-BA残留检测的国家标准检测方法。豆芽样品中6-BA残留检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法等[3-5]。根据6-BA的性质，目前前处理技术多为酸化甲醇提取目标物供液相色谱或质谱进行测定。 2，4-滴(2，4-Dichlorophenoxyacetic acid，2，4-D)，化学名2，4-二氯苯氧乙酸，结构见图1。不同浓度的2，4-D应用也不同，在高浓度时可杀死双子叶植物，常用作田间的除草剂。中、低浓度时可以调节植物生长，可防止落花落果、诱导无子果实形成和保鲜果实[6]。2，4-D检测方法没有相关的国家标准，已报道的检测方法有气相色谱法、离子色谱法、液相色谱串联质谱法[7-12]。 结合6-BA和2，4-D的性质，本研究建立一种快速、方便的LC-MS/MS同时检测方法，适 用于大量样品的快速筛查。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 液相色谱-串联三重四级杆质谱(Agilent 1200-6410B，配有电喷雾离子源ESI，美国安捷伦公司);色谱柱ZORBAX-C18，2.1 mm×50 mm，3.5 μm(美国安捷伦公司);涡旋振荡器XW-80A(上海精科实业有限公司);超声清洗仪+SK250H(上海科导超声仪有限公司);0.22 μ 甲醇(默克)、甲酸(默克)均为m聚四氟乙烯过滤头(上海安普科学仪器有限公司)。 色谱纯，试验室用水均为超纯水。2，4-D，6-BA标准物质均购于中国标准物质中心。 1.2 色谱质谱条件 色谱柱为ZORBAX-C18(2.1 mm×50 mm，3.5 μm，)美国安捷伦公司;柱温35 ?;进样体积10 μL;流动相A0.1%甲酸水溶液;流动相B甲醇;等度洗脱A?B=10?90。流速为0.2 mL/min。 电喷雾电离负离子模式ESI(2，4-D)，正离子模式ESI(6-BA);多反应监测扫描(MRM);分段检测，0,3.2 min排废液，3.2,4.3 min正离子模式扫描(226.3/91.1、226.3/148.2);4.3,7.0 min负离子模式扫描(221.1/163.2、221.1/124.9)。离子源温度350 ?;气流量入10 L/h，倍增电压4 000 V。 1.3 样品前处理 准确称取粉碎豆芽5.00 g于50 mL聚丙烯离心管中，量筒加入10 mL酸化甲醇提取，涡旋2 min，再超声提取10 min，5 000 r/min离心10 min，上清液转入25 mL容量瓶中，样品加10 mL酸化甲醇重复提取一次。合并上清液并用纯水定容至刻度，经0.22 μm水相滤膜 MS/MS分析。 过滤，上清液供LC- 1.4 标准溶液配置 分别称取2种植物生长调节剂标准物，并用甲醇溶解、定容，配制2种植物生长调节剂的混合标准溶液，浓度为1.0 mg/mL。 2 结果与分析 2.1 质谱条件优化 用甲醇稀释储备液，配制浓度为0.1 mg/L混合标准溶液。在质谱上先进行全扫描，ESI(+)模式下得到6-BA的分子离子峰，ESI(-)模式下得到2，4-D的分子离子峰，母离子分别为221.1、226.3，应用SIM和Product Ion模式确定2种植物生长调节剂的定量和定性离子及相应的质谱参数，见1。2种植物生长调节剂的质谱裂解规律见图2。 2.2 前处理条件优化 2.2.1 不同提取剂的影响 考察环己烷、正己烷、甲醇、乙腈、酸化甲醇、酸化乙腈和1%甲酸水溶液提取效果。在5.00 g样品中加入20 μg/L添加剂混合标准样溶液2.0 mL，待溶液完全被样品吸收后，分别用环己烷、正己烷、甲醇、乙腈、酸化甲醇、酸化乙腈和1%甲酸水作为提取溶剂，按照“1.3”方法进行样品前处理，应用“1.2”的色谱质谱条件上机测定。结果表明，1%甲酸水、环己烷、正己烷几乎无法提取目标物。甲醇、乙腈提取率在40%,50%之间，酸化甲醇提取率为90.5%，酸化乙腈的提取率为80.2%。因此，采用酸化甲醇作为提取溶剂。 2.2.2 提取时间的影响 考察了相同频率下，超声波提取时间的对提取效果的影响。提取时间分别为2、5、10、20、30 min时，5种混标的回收率分别为85.3%，87.6%，87.1%，88.1%，87.4%。从数据上分析超声波提取时间对2种植物生长调节剂的提取影响不显著，超声5 min以上提取率已基本稳定。选择超声波提取时间为5 min，可满足分析要求。 确定样品的处理为酸化甲醇超声波提取时间为5 min，2种植物生长调节剂混标(10.0 ng/mL)，测得的质谱见图3。 2.3 线性方程、检出限 配制一系列含2，4-D和6-BA混合标准溶液，浓度范围在0.1,1 000.0 ng/mL之间。在优化的试验条件下进行测定，以峰面积为x，对应各组分的浓度为y作图。试验结果表明，2，4-D在0.1,50.0 ng/mL范围内呈线性;6-苄基腺嘌呤在0.2,50.0 ng/mL范围内呈线性关系，其线性方程和相关系数见表2。 采用空白基质加标进行测量，以信噪比S/N=3的含量为方法的检出限(LOD)，以信噪比S/N=10的含量为定量限(LOQ)，2种植物生长调节剂的检出限和定量限见表2。 2.4 回收率及精密度 在优化试验条件下，选用阴性的豆芽分别添加3个浓度水平的植物生长调节剂混合标准溶液，每个添加水平平行测定6次，结果见表3。2种植物生长调节剂的平均回收率为85.0%,105.3%，相对标准偏差(RSD)小于5.0%，方法的准确度与精密度均满足日常监测要求。 3 结论 建立了豆芽中2种植物生长调节剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法。利用酸化甲醇为提取溶剂，采用超声提取，应用高效液相色谱-串联质谱的ESI正负切换模式同时测定豆芽中2种生长激素，2，4-D、6-BA检出限分别为1.0、2.0 μg/kg。该方法前处理简单，应用仪器的MRM模式，大大降低了干扰，适合进行大批量样品的测定。 参考文献: [1] 谢 君，张义正.植物内源激索的反相高效液相色谱法测定[J].分析测试学报，2001，20(1):60-62. 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