日本血吸虫虫卵,毛蚴,尾蚴及成虫的采集,固定与制片方法

日本血吸虫虫卵,毛蚴,尾蚴及成虫的采集,固定与制片方法 日本血吸虫虫卵,毛蚴,尾蚴及成虫的采集,固 定与制片方法 1虫卵 】.1采集 ,,居,,成,?剖 血吸虫虫卵,毛蚴,尾蚴及成虫 的采集,固定与制片方法 蚴)-在感染后43,45天解剖t取肝脏.击除大血管,胆 管和结缔组织,剪成碎块.置组织捣碎机内,加适量生 理盐水,用8000r/min速度捣碎3rain分别经目,80 目,120目及180目舟佯筛过滤,去除肝渣用300目分 样筛收集虫卵(180目过滤击渣.300目收集虫卵豆复3 攻).再将虫卵放 “C以下清水中漂浮-由于残余的肝 渣比重小漂浮在水中.虫卵比重太沉降在盆底部t轻轻 摇动盆使虫卵集中,进一步纯化虫邸用上述方法收集 虫卵与传统方法相比具有操作简便,分离虫卵速度快? 虫卵收量高,虫卵纯度高的优点. 1.2固定将采集的纯虫卵放人蛋白甘油固定液中 (甘油:甲醛:鸡蛋白为1:4:5)虫卵在固定渡中不 易变形可长久保存 1.3制片将蛋白甘油固定渡中虫卵含量调节至每 一 小漓1O0t左右,同时加人虫卵太小的碎玻片(占虫 卵数的5以防盖片压碎虫卵),用毛细吸管吸取虫卵 嚣自甘油液一漓于载玻片中心-盖hlOmm×lOram的 盖玻片,用滤纸吸去多余的固定液,待盖片四周干燥 后,再加中性树跤一盏上18ram×lgmm的盖玻片封国. 2毛蚴 z’1采集取新鲜分离的虫卵hn!,放人lOOOm|三角 烧瓶内.加满脱氯水(指自来水在常温下放置10天以 上),祷三角烧瓶放在温度为28,30C环境下,并用灯 光照射,2,3h后t可见大量毛蚴孵出t由于鼾壳自然沉 降.毛蚴有向上,向光的特性,此时大量毛蚴集中在三 角饶瓶颈部; 2.2固定毛蚴在适宜的温度下,在水中不断地运 动形态不断变化.此时固定毛蚴形态极不规则.有梨 形,乒乓扳形,瓜子形等.我们经过反复试验获得一种 较好的方法.将毛蚴吸出后放人2,4C环境下-约2h, 毛蚴停止运动t加人鲍氏固定液-可得到形态规则呈椭 圆形的毛蚴. 2.3制片取已固定的毛蚴,用清水浸泡3h-洗净加 人胺明矾卡红染料,染色2h,用2钾明矾脱色至内部 结掏清晰用3o,1O0酒精脱水.每级]Om[n,再经 无水酒精加二甲苯(1:1)1Omint二甲苯1Om[n.然后将 毛蚴放人二甲苯加胶水(5:1)中,调节毛蚴含量一小 漓5O只毛蚴用毛细吸管取一滴于载玻片中.3h后.加 中树胶封国. 199j年第3D卷第12期 阳性钉螺在28环境下饲养10天,使钉螺内的子孢蚴 发育成尾蚴-取活钉螺5o只t洗净放人1OOml烧杯中, 用尼龙纱罩住钉螺,使其活动范围限制在烧杯下半部, 加满脱氡水,在室温30C环境下,并有灯光照射t3,4h 后.烧杯内的水面上可见大量尾蚴用此法进出的毛蚴 活动性好,纯度高t每杯可达2万条左右. 3.2固定将逸出的尾蚴轻轻倒人烧杯中t将烧杯故 C水洛内.尾蚴受热开始从水面下沉-身体慢慢伸 直,尾部分叉,此时加人鲍氏固定液.可得到身体伸直. 尾部分叉形态理想的尾蚴 3.3制片取固定的昆蚴t用清水浸泡3h一洗净用 30,70酒精脱水,每级ltmin-加人盐酸卡红染料t 染色2h.用1盐酸酒精分色t直到内韩结构清晰.再 用805{,100谭精脱水,每级1Omln.再经无水酒精 加冬青油(1i1)lOmint冬青油10min,将尾蚴放人舍中 性树艘2o的冬青油中保存;制片时-吸取一滴于载玻 片中,在解剖镜下,用解剖针挑取尾蚴3,条,放到制 片的载玻片中t5h后加中性树枝封固= 4血吸虫成虫 4.1采集经凡工感染的家兔饲养43天后进行解 剖.而后将医用输液管一端插入家兔胸主动脉(用线扎 住J-另一端连接自来水龙头-之后在肝门静脉处打开 缺口-任自来水祜大循环,肠肝循环流动t使虫体随水 流从肝门静脉缺口处流出,用120目分样筛接住虫体, 待肠系膜静脉中虫体垒部冲出,将虫俸放人大平皿中. 4.2固定从家兔体内冲出的虫体,大多数呈合抱状 态.想得到合抱扶虫体.应立即在冲出的虫体中加人 1的己醇使虫体麻醉,此时虫体卷曲,紧紧合抱-半 小时后虫体自然伸展呈C”字形t且大多数呈合抱状 态,加人5甲醛在平皿内放置1h,使虫俸定型.想得 到分开的雌虫和雄虫t可在平皿内放自来水,在常温下 放置半小时,虫体自然脱开,并伸展,呈”c”字形.如人 5甲醛固定,在平皿内放置1h.使虫体定型用上述方 法固定的虫体形态好t多数呈”c字形.口腹吸盘突出. 4.3制片取固定的虫俸,用清水浸泡1oh.加入胺明 矾卡红染料,染色6h,用2的钾明矾分色t至内部结 构清晰用30,1O0的酒精脱水t每级2h-用无水酒 精加二甲苯(1:【)半小时,再经二甲苯半小时.用中性 树胶封圃. 生物学通报 , f / 舞 醐 , 舢 黼舶 料将 ,蚴禅 东一洲塑愀,魏