植物环核苷酸门控通道（CNGC）基因家族的结构与功能

植物环核苷酸门控通道（CNGC）基因家族的结构与功能 植物环核苷酸门控通道(CNGC)基因家族 的结构与功能 植物生理学通讯第43卷第1期,2007年2月 植物环核苷酸门控通道(CNGC)基因家族的结构与功能 王月,侯和胜 辽宁师范大学生命科学学院,辽宁大连116029 StructureandFunctionofPlantCyclicNucleotide-gatedChannel(CNGC)Gene Family WANGYue,HOUHe-Sheng' CoUegeofLifeScience,LiaoningNormalUniversity,Dalian,Liaoning116029,China 提要:环核苷酸门控通道(cNGc)是近年来被确认的在动植物细胞中普遍存在的离子通道基因家族.文章就近年来植物 中CNGC基因的种类,分子结构,作用机制及其在植物生长发育中的功能的研究进展作了概述. 关键词:环核苷酸门控通道(CNGC);离子吸收;信号转导 生物在进化过程中,形成了包括离子通道, 离子泵和载体的复杂的营养吸收和转运系统.通 过电生理学和分子生物学技术,人们已经确定了 这些转运系统的存在.而且,有许多转运蛋白已 经在基因水平上得到确认,这些转运蛋白在行使 功能时受细胞内外不同因子的调控,因此,遂表 现出信号转导和代谢调节的作用,在生长发育中 有某些调控功能. 1985年,Fesenko等报道,cGMP能直接活 化视网膜杆状细胞中对光依赖的通道,即环核苷 酸门控通道(cyclicnucleotide—gatedchannel, CNGC),由此揭开了CNGC研究的序幕(王正朝等 2006).已经证明,动物组织和细胞中,CNGC 的特异性功能可介导视杆细胞光感受器的光转换和 嗅觉神经元的嗅觉转换(董先平等2002).人们已 经在拟南芥(Arabidopsisthaliana),大麦(Hordeum vulgrare),水稻(Oryzasativa),玉米(Zeamays)等 许多植物中发现了CNGC的存在(Talke等2003), 但对它们的功能还不完全清楚. 1植物CNGC家族的种类和分布 植物CNGC离子通道是1998年在筛选大麦钙 调素结合转运蛋白(HordeumvulgareCaM—binding transporter,HvCBT1)时首次确认的(Schuurink等 1998;M菹ser等2001).目前,人们已经确定单 子叶植物和双子叶植物中都存在CNGC.在拟南 芥基因组中有20个编码CNGC的基因序列,水稻 基因组中有16个类似假定序~lJ(Yuan等2003),另 外,在烟草(Nicotiana~abacum),菜豆(Phaseolus vulgaris)等植物中都发现了许多CNGC同源序列 (Talke等2003),说明植物CNGC离子通道基因可 能是一个较大的基因家族.在GenBank中,还可 以通过搜索查询(BLASTqueries)找到植物的CNGC 同源序列(表1). 图1展示的是拟南芥CNGC基因家族成员间以 及它们与部分水稻中假定的CNGC和烟草CNGC 之间的亲缘关系.如图1所示,根据CNGC序列 中的2个功能结构域,比较所有序列的结果表 明,CNGC主要分成4个亚群(I,II,III,IV), 其中,I,II,III亲缘关系很近,而且各组成 员之间也比较近;第1v亚群与其他亚群的关系较 远,它又分为IVA组和IVB组2个亚组,这2 个亚组中成员间的距离也相对比较远. 水稻基因组序列草图中包含许多与AtCNGC 有同源性的序列,拟南芥的CNGC系统发育中的 亚群分区也适合于水稻,说明这5个CNGC亚群 在植物进化区分为单子叶植物和双子叶植物之前可 能就已经形成.另外,众多不同植物中存在的 收稿2006.10.13修定2006.12.26 资助国家自然科学基金(3067J439). 通讯作者(E—mail:hesheng—hou@l26,com;Tel: 0411—84259112). 2植物生理学通讯第43卷第1期,2007年2月 '假定的;"不再继续使用. CNGC说明它们在植物生理过程中的重要性,均 属于同一亚群,但来自不同植物的CNGC可能具 有相似的生理功能. 2植物CNGC的分子结构及作用机制 2.1植物CNGC的分子结构植物CNGC属于多基 因编码的离子通道超家族成员,与Shaker型钾离 子电压门控通道的分子结构有很高的相似性 (Bridges等2005).植物CNGC结构包括6个跨膜 区(Sl6),S5和S6之间的孔区(Ploop)及C端 的钙调素结合域(calmodulinbindingdomain, CaMBD)和环核苷酸结合域(cyclicnucleotidebind. ingdomain,CNBD)(图2).其中,跨膜区S4带 有1个正电荷,是电压门控通道中的电压传感器 (Kaupp和Seifert2002),但当CNGC通道处于开 放状态时,S4却是被锁定的.在S5和S6之间 是包含20~30个氨基酸的离子传导孔区,即P结 构域,也称之为P环,它是CNGC通道的离子选 择过滤器.但与Shaker通道不同,CNGC的P结 构域没有高度选择性基序,即带有高度选择 通道标志的酪氨酸.甘氨酸.天冬氨酸,谷氨酸基 序(Flynn等2001).如图2所示,动植物的CNGC 的N末端和C末端都延伸进入到细胞质中,除了 , CaMBD的位置不同以外,其他基本相同.其中CNBD在多肽的C末端,由3个0【螺旋(姒,o【B, aC)和2个p折叠(131和132)构成,pl和p2组成 的片层结构位于otA和orb之间.动物CNGC的 CaMBD位于多肽的N末端的上游,而CaMBD在 植物CNGC中则位于C末端,在被截短的CNBD 的0【C螺旋的开头.因此,植物CNBD是一个重 叠结合域,它既参与环核苷酸的结合,又参与钙 调蛋白的结合. 从进化的角度看,目前,人们仅在动植物的 植物生理学通讯第43卷第l期.2007年2月3 圈l植物CNGC转运蛋白系统树(Talke等2003) 拟商捧CNGC曲名称是根据帕斯卡命名法命名的.水稻的假定CNGC的名称是根 据它们所在染色体的名称进行的初步命名.图 巾At为拟南芥.Os为水稻.Nt为烟草HvCBT1为大麦钙调素结台转运蛋白水稻 CNGC中,a,b,c表示在唰一条染色 体上的不同的CNGc 多种细胞组织中鉴别出CNBD转运蛋白或离子通 道,而已知序列的单细胞真菌类则缺乏此类通道 蛋白因为植物是在动物和真菌进化区分之前进 化形成的,这说明,或是单细胞真菌已经失去了 CNGC通道基因.或是植物和动物的CNGC是各 自独立进化的,二者有不同的功能. 很早就认为哺乳动物的功能性CNGC是异四 聚体复合物(heterotetramer),有6个不同基因编码 动物CNGC蛋白,分别是4个A亚单位(A14)和 2个B亚单位(Bl,B3),动物cNGC蛋白是由这 2种亚单位组成的异四聚体复合物(Kaupp和Seifert 2002).生化分析也证明,牛视杆细胞(boyine rod)中CNGC是由3A1:1Bl组成(Zhong等2002), 及嗅觉神经元中的CNGC是由2A2:1A4:1B1组成 的等.植物CNGC也可能是异四聚体复合物,但 目前还不知道有哪些亚单位可能组合在一起,而 共同形成功能通道,且对植物CNGC是否编码A 或B亚单位还尚不清楚.植物中有庞大的CNGC 基因家族存在,这为证明异源多聚体通道存在多 样性,高度功能多样性以及专一性的说法提供了 依据. 2.2植物CNGC的作用机制作为膜上的非选择性 配体阳离子门控通道,植物中的CNGC是信号转 导级跌系统(signaltransductioncascades)的组成部 分.通过这种级联反应.它们将细胞外部信号转 变为能够跨过细胞膜的阳离子流对细胞起作用 (Zagotta和Siegelbaum1996:Flynn等2001).动 物CNGC分布于化学感受器和光感受器中,参与 膜外信号的转换.例如,当气味分子与化学感受 器中的G蛋白耦联型受体结合时,可激活腺苷酸 环化酶,产生cAMP,开启cAMP门控阳离子通 道(cAMP,gatedcationchanne1),引起钠离子内 流,膜去极化,产生神经冲动,最终形成嗅觉 或味觉.植物CNGC能够直接被激活,也可以通 过与环核苷酸(cAMP/cGMP)的可逆性结合被激 活,但其门控作用主要依赖于cAMP和cGMP的 存在(Leng等1999,Balague等2003),同时受c护 调控.环核苷酸信号的产生和消退则依赖于腺嘌 4植物生理学通讯第43卷第1期,2007年2月 植物 图2动植物CNGC的膜拓扑结构示意(Hua等2003) 呤环化酶和鸟嘌呤环化酶(adenylylandguanylyl cyclases),以及能将环桉苷酸水解为ATP和GTP 的磷酸二酯酶(phospb0diesterase)(Trewavas等 2002).当环核苷酸与通道蛋白结合时就会诱导蛋 白发生构像变化,促使其P区域发生旋转,接着 通道大门打开,从而促进阳离子的跨膜移动. 植物的CNBD是一个重叠结合域,因此CaM 与植物CNGC的结合就会干扰CNGC与环核苷酸 的结合,进而影响通道的激~(Arazi等2000),这 也意味着由CaM调节的植物CNGC与动物CNGC 具有不同的调节机~1](Varnum和Zagottal997; Trudeau和Zagotta2002).作为胞质的第二信使, CaM,环核苷酸和Ca-"可与CNGC相互发生作用, 并且能以一种整合的形式控制离子通过此种植物离 子通道(图3).当CNGC与环核苷酸结合被激活 后,通道打开,胞外Ca内流胞内Ca的增 多,一方面会导致Ca依赖蛋白激酶(calcium.de— pendentproteinkinases,CDPKs)的激活,进而引 起下游靶蛋白的磷酸化;另一方面受Ca激活的 钙调蛋白会与CNGC结合,阻止CNGC与环核苷 酸的结合,通道活性受抑制.从而限制Ca的进 一 步内流.这种反馈机制有效调控了Ca2+信号的 转导,而这种功能上的相互作用主要依赖于胞质 中自由Ca的含量.Hua等(2O03)报道.当胞质 中的Ca"含量增加时,在不蜀加CaM的情况下, 通道的cAMP活性就会受到抑制.因此认为CNGC 是连接环核苷酸与ca"信号转导之间的纽带 3植物CNGC的主要功能 植物CNGC家族成员的数量众多,这说明它 们的生理功能可能会有很大的蔗异.近年来应 用各种植物的不同CNGC核苷酸编码序列在蛙卵 母细胞,动物细胞以及适当的酵母突变体中的表 达,为对众多的植物离了通道的研究提供了很大 的帮助.但由于CNGC在这些异源系统中的功能 性表达经常出现顽拗现象(recalcitrance),因此用 这种方式对植物CNGC通道特性的鉴定受到了一 定的阻碍(Mercier等2004;Ali等2006)随着生 物技术的不断发展和新表达体系的发现,近年来 对植物CNGC的研究主要围绕以下方面腱开 3.1CNGC与植物细胞的离子转运CNGC对离子 的选择性比较低,动物CNGC可以非选择性地转 导Na,Ca和K(Kramer和Molokanova2001: Bridges等2005;Flynn等200i),但植物CNGC 在某些方面显然与动物不同.例如,对于Na来 植物生理学递讯第43卷第l期,2007年2月 图3植物CNGC对环核苷酸和ca信号转导的整和作用模式(Talke等2003) 说.并不是所有的cNGC都能自由地转导, CNGC2对Na就有排斥性(Leng等2002;Hua等 2003;Balague等2003)有研究指出.cAMP和 cGMP在植物气孔的开放中起作用,并发现在气 孔运动过程中出现环核苷酸信号转导和Ca和K 离子流.在蚕豆(Viciaha)保卫细胞原生质体的 电生理学实验中,发现cAMP可抵消由脱落酸或 Ca'诱导的整个细胞对K离子流内流的抑制f』in和 Wu1999).植物生长素诱导的鸭趾草(Contmelina commttnis),其气孔开放可以通过提高cGMP和 Ca水平进行调节(Cousson和Vavasseurl998; Cousson2001).此外,还有人指出,cAMP和 cGMP参与细胞分裂素调节的气孔开放(Pharmawati 等2001)但这些实验并没有完全说明环核苷酸是 如何影响离子流动的. 通过植物cNGC在爪蟾卵母细胞中的异源系 统功能性表达.Leng等(1999,2002)采用双电极 电压膜片钳技术,在表达AtCNGC2,AtCNGC1 和NtCBP4的卵母细胞中观察到cAMP诱导的内向 整流的阳离子流.AtCNGC2显示出对通透性要 远远高于Na.说明它是K选择性通道,采用全 细胞膜片销技术记录AtcNGc2在人胚胎肾脏细胞 (humanembryonickidney,HEK)中的表达也得到 了相似的结果在HEK细胞系统中,当细胞外 Mg浓度增加时.由AtCNGC2调节的胞内ca的 增加就会受到阻碍.AtCNGC4在爪蟾卯母细胞中 Na的透性基本 的功能一性表达+显示出它对和 _牛扫同(Balague等2003).但电生理学研究表明, AtCNGCl和AtCNGC2是内向整流形式(即可使 . 流入细胞)的电压依赖型,而AtCNGC4则不是Sunkar等(2000)在研究烟草NtCBP4时,发现其过 量表达会导致烟草对Pbn产生过敏反应,而删掉 部分胞质C端(删掉部分CaMBD和CNBD)的 NtCBP4蛋白表达,会导致转基因植物表现出很高 的耐pb2性(Sunkar等2O00),说明NtCBt'4对Pb 具有透性.然而,一些动物Ca通道却显示出有 限的Pb透性,这说明NtCBP~对Ca有透性, 可能与Ca的运输有关.NtCBP4与AtCNGCI的 基因序歹0具有很高的同源'陡,说明AtCNGCl与 NtCBP4可能足负责Pb"进入植物细胞的转运途径 中的组成部分 从CNGC在异源系统中的表达和NtCBP4在植 物中的过量表达得到的数据,说明植物CNGC对 一 价和二价阳离子有透性,另外,CNGC孔区选 择性滤器的氮基酸组成与其他离子通道不同,这 就不能排除CNGC对其他阳离子f如NH,或过渡金 6植物生理学通讯第43卷第1期,2007年2月 属元素(transitionmeta1)】也有透性的可能性,对此 仍需进一步研究验证. 3.2CNGC与植物病原体防御应答为了对病原体 的侵袭做出应答,植物必须具备复杂的信号转导 及防御机制以保护自身.其中最有效,最直接的 抗性反应就是过敏反应(hypersensitiveresponse, HR).已经证实,Ca2+,K和环核苷酸在植物防 御应答的早期信号转导中起一定的作用.例如, 在法国_~_(Phaseolusvulgaris)细胞中,抵抗细菌的 活性氧类物质的产生就需要cAMP和Ca的存在 (Bindschedler等001);而在烟草细胞悬浮培养液 中,cAMP能诱导防御基因的表达(Durner等 I998).Clough等(20oo)在对拟南芥突变体 Atcngc2.1ldndl(defeneenodeath)进行定位时发现, AtCNGC2参与植物细胞死亡过程.此种突变体的 基因突变是由于AtCNGC2基因中的一个碱基由G 变为A而在基因内部产生新的终止密码子位点, 从而导致植物不能在病原体侵染时产生超敏反应. 另一个是通过将含有42个碱基的T.DNA插入到第 4个内含子中而形成突变基因的AtCNGC2突变体 Atcngc2.2,也像dndl一样对病原体的感染不发生 过敏反应(Clough等2000;Balague等2003).T. DNA插入AfC?GC4基因获得的突变体hlm., (hypersensitive-response.1ikelesionnlimic1)对病原 体感染也表现出具保卫而不致死的功能(defenceno death),故也称(Balague等2003).因此在 突变体中,具有功能的CNGC的丢失就会在一定 程度上妨碍环核苷酸的信号转导和离子的流动, 以致这些早期的信号反应受到干扰,导致下游的 抗性反应持续处于激活状态.这些都证明CNGC2 和CNGC4与植物病原体抗性反应有关.但是 CNGC2与CNGC4在对一些化学物质信号的转导 和对病原体的防御应答也表现出不同的特点.虽 然dndl和hlml都表现为过敏反应丧失,但dndl 表现出的是完整的基因对基因的病原体抗性(Talke 等2003),而hlm1只对某些病原体表现出抗性. AtcNGC2在叶子中基本上表达并且可以通过感染 而受到抑制;而AtCNGC4则是通过感染诱导才进 行表达的(Kohler等2001:Balague等2003). Yoshioka等(2006)的研究表明,CNGC11和 CNGCl2也参与植物对抗病信号的转导,从而证 明它们的生理功能可能是参与植物病原体防御应 答. 3.3CNGC与植物的生长发育和逆境胁迫CNGC2 和CNG-C4除了参与植物的病原体防御应答的信号 转导外,还对植物的生长发育起一定的作用. Chan等(2003)研究2个拟南芥CNGC2突变株 (Atcngc2..,和Atcngc2.2)与野生型受到各种不同离 子胁迫的结果表明,突变株仅对Ca有显着的敏 感性,在Ca胁迫的条件下,突变体和野生型植 株生长受阻的差异最为明显,并且还观察到,当 生长环境中的Ca'浓度增加时,突变体植株的繁 殖能力也大大下降. Ali等(2006)将酵母l(+吸收缺失突变体(trkl,2), 大肠杆菌吸收缺失突变体(LB650)以及酵母Ca2+ 吸收突变体midl和cch.,,应用于鉴定拟南芥 CNGC的功能中,并以之确定影响植物CNGC在 异源系统中的功能的培养和生理条件.他们的实 验表明,AtCNGC1可在LB650中表达,这证明 没有内源CaM的大肠杆菌突变体也能用于植物 CNGC的功能鉴定.AtCNGC2和AtCNGC4的表 达可增强trkl,2抗潮霉素的能力和促进突变体在有 潮霉素存在条件下的生长,而AtCNGC1则缺少这 种功能.在外部K浓度很低的情况下,删除 AtCNGC1中的CaMBD可促进trkl,2的生长,但 对LB650则没有效果,说明酵母的CaM可以与这 种植物离子通道结合并对其有负调节作用.绿色 荧光蛋白和GCl的融合蛋白在缺少AtCNGCl 通道的异源体系统中表达的Northern分析结果证 明,在有活性的cAMP配体存在时,被删除掉 CaMBD的AtCNGCl的表达可提高trkl,2的细胞内 K的含量.这项实验首次证明,删除掉CaMBD 的植物CNGC仍然能够保留它离子通道的功能, 酵母的CaM能与其结合并可能对它进行负调节. Li等(2005)将从拟南芥中分离出来的 AfIGD基因分别转入到LB650,CYl62和akt1. .,中进行功能性表达的结果显示,AtCNGCl0对广 谱l(+通道阻断剂四乙铵表现出非敏感性,并且缺 少典型的信号基序.将正义的35SfC?GD 基因转入到缺少AtCNGCl0的l(+吸收功能的拟南 芥akt1..,突变体后,在有限的K条件下,突变 体生长状况比以前好很多,其生长率是未转入 植物生理学通讯第43卷第1期,2007年2月7 AtCNGCIO突变株同期生长率的1.7倍.CaM和 AtCNGC10在大肠杆菌中的共表达显示Ca/CaM 可抑制细胞生长.然而,对AtCNGC10依赖的类 型中cGMP可以通过Ca/CaM反转这种抑制.在 大肠杆菌中的表达证明AtCNGC10没有耐Cs性, 但在转基因AtCNGC10的酵母K吸收突变体中, 当K浓度很低时,却表现出很高的Na和Cs耐 性.在l(+浓度相同的生长条件下,反义AtCNGCIO 的转基因拟南芥对的吸收量是哥伦比亚野生型 的一半.这些证明CNGCIO在植物中有调节l(+吸 收的功能. 最近,Gobert等(2006)通过对T.DNA插入拟 南芥a\,GC?基因的不同位点而获得的3个独立突 变系(Atcngc3.J,Atcngc3.2,Atcngc3.3)的实验 验证了非选择性离子通道CNGC3在植物生长发育 中的生理功能.主要包括以下几点:(1)对这3株 突变系和野生型的种子分别进行Na+,和NI-I4+ 的盐胁迫时,只有在Na浓度增加的情况下,突 变体和野生型的种子萌发率差异最为明显.说明 AtCNGC3在种子萌发时对Na胁迫有一定的抵御 作用,而与K和NH等阳离子无关.(2)分别用 不同的阳离子对3株突变体和野生型的幼株进行胁 迫时,只有在Na+和l(+的浓度增加的情况下,突 变体生长明显好于野生型植株.这说明AtCNGC3 在细胞中可能参与对Na和K离子的吸收和转 运.(3)分析突变株中离子含量和组成的结果表 明,培养基中K浓度增加时,突变体中的K积 累量远远少于野生型,其他离子含量则没有明显 差别.但AtCNGC3对Na+离子流的控制只是短时 间的.说明AtCNGC3参与植物的离子吸收是有限 度的.(4)AtCNGC3在酵母不同阳离子缺失突变体 系中表达,进一步证明它是转运Na和的离子 通道,而对Ca的吸收运输作用很小.(5)GUS. AfC?GC3融合基因在转基因拟南芥中的表达显 示,AtCNGC3主要在种子的胚芽,根部的表皮 和皮层中高度表达;在中柱中没有;幼苗中表达 很少;在叶子生长发育的过程中,其表达量逐渐 增加,并广泛地分布在维管束周围.(6)AtCNGC3 定位于细胞膜上;AtCNGC3几乎没有改变植物向 地性和抵抗病原体侵袭的能力,它很少参与重金 属离子的吸收和转运. 4结语 综上所述,作为膜上的非选择性配体阳离子 门控通道,植物CNGC对植物细胞的离子转运, 植物病原体防御应答,植物的生长发育以及抗胁 迫性都有作用.虽然这方面的研究已取得了很大 的进步,但由于它们在异源系统中的功能表达受 到一定的阻碍,因此对众多植物CNGC的具体功 能特性了解和认识还不很清楚.至于植物CNGC 家族成员之间是如何相互作用和调节植物对各种离 子吸收转运的,以及其对病原体防御应答的调节 也知之甚少.这些都是植物CNGC家族研究的方向. 参考文献 董先平,智刚,徐天乐(2002).钙调素参与离子通道和受体功能的 调控.自然科学进展,l2:232-239 王正朝,黄瑞华,潘玲梅,李学斌,石放雄(2006).环核苷酸门控离 子通道的结构,功能及活性调节.中国生物化学与分子生物 ,22(4):282-288 AliR,ZielinskiRE,BerkowitzGA(2OO6).Expressionofplant cyclicnucleofide-gatedcationchannelsinyeast.JExpBot, 57:l25一l38 AraziT,KaplanB,FrommH(2oo0).Ahigh-affinitycalmodulin— bindingsiteinatobaccoplasma-membranechannelprotein coincideswithacharacteristicelementofcyclicnucleotide— bindingdomains.PlantMolBiol,42(4):591--601 BalagueC,LinBQ,AlconC,FlottesG,MalmstromS,KohlerC, NeuhausG,PelletierG,GaymardF,RobyD(2003).HLMl, anessentialsignalingcomponentinthehypersensitive response,isamemberofthecyclicnucleotide—gatedchannel ionchannelfamily.PlantCell,15:365-379 BindschedlerLV,MinibayevaF,GardnerSL,GerrishC,Davies DR,BolwellGP(2001).Earlysignallingeventsinthe apoplasticoxidativeburstinsuspensionculturedFrenchbean cellsinvolvecAMPandCa2~.NewPhytologist,151:185-194 BridgesD,FraserME,MoorheadGBG(2005).Cyclicnucleotide bindingproteinsintheArabidopsisthalianaandOryzasativa genomes.BMCBioinformatics.6:6doi:10.1l86,l47l-2105- 6.6 ChanCWM,SchorrakLM,SmithRKJr,BentAF,SussmanMR (2003).Acyclicnucleotide-gatedionchannel,CNGC2,is crucialforplantdevelopmentandadaptationtocalcium 3l stress.PlantPhysio1.132:728— CloughSJ,FenglerKA,YuIC,LippokB,SmithRKJr,BentAF (2000).TheArabidopsisdndl"defense,nodeath''gene encodesamutatedcyclicnucleotide-gatedionchanne1.Proc NatlAcadSciUSA,97:9323--9328 CoussonA(2001).Pharmacologicalevidencefortheimplication ofbothcyclicGMP?-dependentand?-independenttransduc?- tionpathwayswithinauxin?inducedstomatalopeningin CommelinacommunisL.PlantSci.16l:249-258 8植物生理学通讯第43卷第1期,2007年2月 CoussonA,VavasseurA(1998).Putativeinvolvementofcytos0一 licCaandGTP—bindingproteinsincyclic—GMP—mediated inductionofstomatalopeningbyauxininCommelinacorn— munisL.Planta.206:308,314 DurnerJ,WendehenneD,KlessigDF(1998).Defencegene inductionintobaccobynitricoxide,cyclicGMP,andcyclic ADP—ribose.ProcNatlAcadSciUSA.95:10328一l0333 FlynnGE,JohnsonJP,ZagottaWN(2001).Cyclicnucleotide— gatedchannels:sheddinglightontheopeningofachannel pore.NatRevNeurosci,2(9):643—52 GobertA,ParkG,AmtmannA,SandersD,MaathuisFJM(20o6). 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