盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸检查

实验项目名称:盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸检查 实验计划学时:6 一、实验目的 1.掌握TLC法测定有关物质的原理与测定方法。 2.熟悉粘合薄层板的制备与活化。 二、实验和要求 (一).薄层色谱法 (1)玻板用5cm×20cm或l0cm×20cm的规格,要求光滑、平整,洗净后不附水珠,晾干。 (2)固定相常用固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254等。其颗粒大小.一般要求直径为10-40 μm,取各品种项下规定的固定项一定量,按“薄层板制备”法制备薄层板。 (3)薄层涂布一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系固定相直接涂布于玻板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合剂,一般常用10%-15%煅石膏(CaSO4.2H2O 在140o C加热4h),混匀后加水适量使用,或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5%-0.7%)适量调成糊状,均匀涂布于玻板上。 (4)展开室应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸,并有严密的盖子,底部应平整光滑,便于观察。 薄层板制备根据各品种项下规定,取1份固定相和3份水(或粘合剂)在研钵中向一方向研磨混合,去除面的气泡后,用倾注法或平铺法或涂布器法,在玻板上涂布厚度为0.2-0.3 mm的薄层板。将涂 好薄层的玻板置水平台上,于室温下晾干后在110o C烘30min;置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视). 点样用微量注射器或微量吸管吸取规定量样品溶液,点样于薄层板上,—般为圆点,点样基线距底边2.0 cm,样点直径为2-4 mm,点间距离约为1.5-2.0 cm,点样时必须注意勿损伤薄层表面。 展开展开缸如需预先用展开剂饱和,可在缸个加入足够量的展开剂,并在壁上贴两条与缸一样高、宽的滤纸条,一端浸入展开剂中,一端浸入展开剂中,密封缸顶的盖,使系统平衡.将点好样品的薄层板放人展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底0.5-1.0 cm(切勿将样点浸入展开刑中),密封缸盖,待展开至规定距离(一般为10-15cm),取出薄层板,晾干,按各品种项下的规定检测。 三、实验主要仪器设备和材料 层析缸,玻板,喷雾器,点样用微量注射器或微量吸管。硅胶H,硅胶GF254,对二甲氨基苯甲醛,盐酸普鲁卡因注射液. 四、实验方法、步骤及结果测试 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸检查 精密量取本品,加乙醇制成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液,作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1mL中含30 ug的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录A)试验,吸取上述两种溶液各10 uL,分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上,用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇(14:1:l:4)为展 开剂,展开后,取出晾干,用对二甲氨基苯甲醛溶液(2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100 mL,加冰醋酸5 mL制成)喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点,其颜色与对照品溶液的主斑点比较,不得更深。 五、实验要求 记录实验详细步骤及结果。 六、思考题 1.TLC分析定性定量方面的应用? 七、实验说明及注意事项 1.薄层色谱分析中为使斑点集中,点样应分次点加,每次点加后,候其自然干燥、低温烘干或经温热气流吠干。 2.荡层板故入层析缸时,薄板底边应水平浸入展开剂中,待展开至溶剂前沿距玻板顶端2-3cm时,取出薄层板。 3.展开缸必须密封,为使缸内展开剂饱和,薄层板故人前可在层析缸内壁贴滤纸条,让滤纸条一端浸入展开剂中,密封层析缸,待系统平衡后再将薄层板故入,展开。