妇肤康喷雾剂对阴道常见微生物增殖影响的体外研究

妇肤康喷雾剂对阴道常见微生物增殖影响的体外研究 中华女性生殖道感染峰会论文集 妇肤康喷雾剂对阴道常见微生物增殖影响的 体外研究 王奔 肖冰冰 那日苏 牛小溪 韦晓煜 张瑞 廖秦平 北京大学第一医院 妇产科，北京 100034 【摘 要】 目的 体外了解妇肤康喷雾剂溶液对阴道常见的益生乳杆菌和致病菌的影响,为阴道感染疾病提供药物应 用的理论依据,指导临床用药。方法 对从中国健康妇女阴道分离的乳杆菌、ATCC 阴道来源的加德纳菌和白色念珠菌进行 体外培养,以中药制剂妇肤康喷雾剂作为培养基,通过绘制生长曲线,评价妇肤康溶液对阴道常见微生物的影响。结果 妇 肤康实验组中,乳杆菌和白色念珠菌生长曲线随着时间延长轻微下降。加德纳菌在 15 h 后可完全杀灭。结论 体外培养时, 妇肤康溶液轻微抑制乳杆菌生长,其能够抑制白色念珠菌生长,可以杀灭加德纳菌。 【关键词】 妇肤康喷雾剂 阴道乳杆菌 加德纳菌 白色念珠菌 中图分类号:Q939.11 文献标识码:A 文章编号:1005-376X:2014:03-0000-03 DOI 编码:10.13381/j.cnki.cjm.201403001 Effect of FuFuFang Spray on proliferatio onf vagina lcommon microb ein vitro WANG Ben，XIAO Bing-bnig，NA Ri-shu，NIU Xiao-xi，WEI Xiao-y，uZHANG Ru，iLIAO Qin-pnig Department of Obstetrcsi and Gynecology, Pekngi University First Hospital Corresponding auther:LIAO Qin-pnig，Email:qinping_liao@163.com Abstract: Objectiv e To assess the effect of FuFuFang Spray on proliferation of vaginal commo n microbe in vitro. Methods Vaginal Lactobacillu,sGardnerel lvaginalia ansd Candid aalbican wsere cultivated on the FuFuFang Spray medium. Contro lgroup used the special bacterial corresponding medium. Growht curves of microbe were measured. Result s In the FuFuFang experimental group, as the time wen ton,growt hcurves of vaginal Lactobacill uansd Candida albican swere down lightly,Gardnerell vaginalia cousld be killed withni fifteen hours. Conclusion The FuFuFang Spray have little influence on the proliferation of vaginal Lactobacillu ins vitro. This solution can inhibit growth of Candid aalbican,sand even kill the Gardnerell vaaginali. s Key words FuFuFan:g spray;Vaginal Lactobacill;usGardnerell vaginalia;sCandid aalbicans [2]响了女性生殖健康。加德纳菌是阴道菌群的重要 乳杆菌属维持正常阴道酸性环境,卷曲乳杆 菌、詹式乳杆菌和惰性乳杆菌是中国健康女性最常 组成部分,并且一直被认为是细菌性阴道病的一个 [1]见优势菌种。如果优势乳杆菌减少,其他多种微 重要的致病菌。外阴阴道假丝酵母菌病是由假丝酵 生物:主要为厌氧菌:增多,将导致的无阴道黏膜 母菌感染引起的外阴阴道炎症,是最常见的妇女外 炎症现的临床综合征——细菌性阴道病,它与宫 阴阴道炎症之一,致病菌主要是白色假丝酵母菌。 颈炎、盆腔炎、不孕症、异位妊娠、性传播感染等 中药制剂妇肤康喷雾剂是妇产科常用外用药物之 发生相关,妊娠期可增加自然流产、早产、胎膜早 一,在临床上主要用于各种阴道疾病的治疗。然而 破、绒毛膜羊膜炎、新生儿感染等并发症,严重影 该药在阴道使用后,是否会对阴道微环境中的益生 ?87? 中华女性生殖道感染峰会论文集 菌或致病菌的生长及增殖产生影响尚未见报道,本 于 Medium 1685 中,白色念珠菌种吸取 100 μL 菌 液接种于营养肉汤培养基中,37 ?静置培养 24 h 课题将体外了解妇肤康喷雾剂对阴道常见的两种 待用。 益生乳杆菌和常见的两种致病菌的影响和杀灭作 1.2.3 制备实验组和对照组的生长曲线 实验 用,为临床阴道感染用药提供药物应用的理论依 组按 5%的接种量分别接种到 50 mL 妇肤康溶液作 据,指导临床用药。 为培养基三角瓶中。对照组中使用相应的液体培养 1 材料与方法 基。在 0、3、6、9、12、15、18、24、30 和 36 h 1.1 材料 分别取上述 37 ?静置培养的实验组和对照组培养 -1-2-31.1.1 菌种来源 为了真实的反应该药物对阴 液 100 μL 并用无菌水分别稀释为 10、10、10、 -4-5 -6-3-4-5 道中乳杆菌生长的影响,本实验中所用阴道乳杆菌 10、10和 10,用滴注法分别取 10、10、10菌株均是从中国健康妇女阴道分泌物中分离纯化 -6 和 10四个稀释梯度点滴到 MRS 固体平板:乳杆 所得,革兰染色后经油镜镜检证实为革兰阳性大杆 -1-2-3 -4 菌:,取 10、10、10和 10四个稀释梯度点滴 菌,并且进行 16rRNA 测序鉴定为 1#卷曲乳杆菌、 -1到沙氏葡萄糖固体平板:白色念珠菌:,取 10、 CC:14018: 2#詹氏乳杆菌。致病菌:加德纳菌:AT-2-3 -4 10、10和 10四个稀释梯度点滴到 Medium 7:加 和白色念珠菌:ATCC 90029:。 德纳菌:,每次滴加 100 μL,每个稀释度做 2 个 1.1.2 药物来源 平行对照,48 h 后计数菌落数。 妇肤康喷雾剂:100 毫升/瓶,贵州良济药业有 1.3 结果判定 计算细菌浓度:CFU/mL:=平 限公司,国药准字 Z20026246: 均菌落数目×稀释倍数×10。生长曲线的制作:取 1.1.3 培养基 本实验中,乳杆菌培养使用 BD 细菌浓度的对数值:lgCFU:与时间点的对应关系, 公司的 MRS 培养基:MRS Broth 和 MRS Agar:, 更加直观的了解细菌数量级的变化情况 白色念珠菌:固体培养使用沙氏葡萄糖培养基、液 2 结 果 体培养使用营养肉汤培养基,加德纳菌:固体培养 使用 Medium 70: Casma'ns medium base with 5% 2.1 实验使用细菌培养 共收集健康女性阴道 rabbit blood、液体培养基使 Medium 1685 :NYC III 分泌物 3 份,全部经革兰染色判定。从 3 份标本中, medium。 分离出 2 株乳杆菌,经过菌落 PCR 鉴定。 1.2 方法 2.2 妇肤康喷雾剂对阴道乳杆菌生长曲线比较 结果见图 1、图 2:妇肤康组的生长曲线随着时间 1.2.1 细菌的分离纯化 按照张瑞等的方法完 [3] 延长有一个数量级的下降:10 倍:,乳杆菌轻微下 成。 降。对照组正常生长,曲线上升了 2 个数量级:100 1.2.2 制备菌悬液 分别将分离得到的 1#,2# 倍:。 乳杆菌分别吸取 100 μL 菌液接种于 MRS 液体试 管中,将 ATCC 加德纳菌种吸取 100 μL 菌液接种 ?88? 中华女性生殖道感染峰会论文集 图1 2#菌生长曲线:妇肤康组 vs 对照 组: 图2 1#菌生长曲线:妇肤康组 vs 对照 组: 数量级的下降:10 倍:。而对照组生长曲线随着时 2.3 妇肤康喷雾剂对白色念珠菌生长曲线比较 结果见图 3:妇肤康组生长曲线随时间延长有一个 间延长上升了 4 个数量级:10 000 倍:。 图3 白色念珠菌生长曲线:妇肤康组 vs 对照 组: 2.4 妇肤康喷雾剂对加德纳菌生长曲线比较 纳菌被完全杀灭。而对照组生长曲线上升了 3 个数 结果见图 4:妇肤康组的生长曲线向下到 15 h 加德 量级:1 000 倍:。 图 4 加德纳菌生长曲线:妇肤康组 vs 对照组: ?89? 中华女性生殖道感染峰会论文集 3 讨 论 本次实验选择的研究菌种是健康人和疾病人群中 最常见的益生菌和致病菌。 妇肤康喷雾剂主要是女性阴道是一个复杂的微生态体系,由阴道的 以千里光,爵床经现代制 解剖结构、微生态菌群、局部免疫及机体的内分泌 药做成的复方制剂。千里光属植物为多年生草 调节功能共同组成。多种微生物共同寄生在健康妇 本,我国资源丰富,各地民间广泛用于治疗各种炎 女阴道微环境中,包括:乳杆菌、大肠埃希菌、链 症和皮肤病,疗效显著。据文献报道:千里光有明 球菌、棒状杆菌、韦荣球菌、加德纳菌和除了细菌 显的广谱抗菌作用,对炎症有较好的疗效。化学成 以外的病毒、原虫、白假丝酵母菌、支原体等。乳 分研究表明含酚酸类及生物碱。药理实验表明酚酸 杆菌分解阴道上皮细胞的糖原产生乳酸,降低 pH, 类化合物为千里光的抑菌有效部分。抑菌实验结 拮抗致病微生物。还可以产生过氧化氢而杀菌,乳 果,醌类和对羟基苯乙酸对流感杆菌、肝炎球菌、 杆菌还能产生细菌素或者占位效应等多种功能共 甲链球菌、卡他球菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌 同维持健康阴道微环境。乳杆菌是公认的阴道内最 [5] 等均有抑菌作用 。爵床有抗肿瘤抗病毒的作用, 常见的优势菌种。最新调查发现健康人群中,正常 [6] 并能治疗女性急性尿路感染 。中药制剂妇肤康喷 菌群可以分为 5 大类,其中 I 型为卷曲乳杆菌为主, 雾剂已经在临床广泛用于阴道炎的治疗,因此明确 [4]V 型为詹氏乳杆菌为主。中国健康女性调查也发 该药物对常见阴道益生菌和致病菌的增殖影响有 [1]现,最常见的两种乳酸杆为卷曲和詹氏乳杆菌。 重要意义。本研究结果表明:妇肤康溶液在体外情 细菌性阴道病:BV:是育龄期妇女最常见的阴 况下对阴道乳杆菌的增殖有轻微的影响,但是大部 道感染,症状特点是:阴道乳杆菌被厌氧菌取代, 分乳杆菌能够存活下来。白色念珠菌在妇肤康溶液 如加德纳菌、普氏菌、消化道链球菌、类杆菌等。 中曲线有下降,本实验对妇肤康溶液中的念珠菌进 Gardner 和 Dukes 第一次将加德纳菌和 BV 联系起 行革兰涂片镜检,发现其没有菌丝,只含有孢子。 来,其报道能从 92%的 BV 患者体内分离出加德纳 这说明其对念珠菌能起到明显的抑菌功能,可以在 菌,而健康女性未分离出来。加德纳菌曾经被认为 VVC 疾病治疗中发挥作用。加德纳菌在妇肤康溶液 是 BV 的主要致病菌。随着研究的深入,人们认为 中 15 h 后可完全杀灭,提示对细菌性阴道病的治疗 加德纳菌不再是主要因素,而是因为阴道正常的细 可能是通过杀灭加德纳菌等致病菌而发挥功效。由 菌数量增长了 100,1000 倍。但是现在分子生物学 于体内药物效果与体外实验之间存在着一定的差 的进展发现,加德纳菌使微环境改变而适合严格厌 别,因此该药物在人体内使用时,上述作用的发挥 [2]氧菌的生长,同时可形成生物膜而产生耐药,于 可通过进一步的研究来加以证实。 是其在细菌性阴道病的发病过程中的作用又开始 参考文献 重新被认识。白色假丝酵母菌是最常见致病菌之 一,虽然随着抗真菌药物的广泛应用,非白色假丝 [1] Zhang R,Darocz y K,Xiao B, et al〃Qualitati v ande 酵母菌造成的疾病比例在逐渐上升。但是国内刘朝 semiquantitati vanealysis of Lactobacius ll species in the vaginas of healty h fertile and postmenopausa Chinese l晖等调查发现白色假丝酵母菌仍是造成霉菌性阴 women[J]〃J Med Microbio,l2012,61:Pt 5::729-739〃 道炎:VVC:的最常见的致病菌,占 88.4%,而其 [2] Turovskiy Y,Sutyka NK,Chikinds aML〃The aetioloyg of 他一些非白色假丝酵母菌依次为光滑假丝酵母菌 bacterial vaginois[Js]〃J Appl Microbiol,2011,110:5:: 1105-1128〃 :5.2%:、伪热带假丝酵母菌:1.6%:、星型假丝酵 [3] ZHANG Ru,iCHEN Ru,iSANG Jia-t,eet al〃Effect of 母菌:1.2%:、近平滑假丝酵母菌:1.2%:、平滑假 compound Hippopha eRhamnoide seesd oil suppository on 丝酵母菌:0.8%:及季也蒙假丝酵母菌:0.8%:等。 ?90? 中华女性生殖道感染峰会论文集 proliferation of vagina lLactobacillus in vitro[J〃]Chin J PHARMACEUTICAL JOURNAL, 2008 , 23 : 1 :: Microeco,l2013,25:4::390-392〃:in Chines:e 张55-56〃:in Chines:e 刘国瑞,吴军,杨美华,等〃药用瑞,陈锐,桑佳特,等〃复方沙棘籽油栓对阴道乳杆菌增 植物爵床的研究进展[J]〃西 殖影响的体外研究[J]〃中国微生态学杂志,2013,25 北药学杂志,2008,23:1::55-56〃 :4::390-39〃2 [4] Ravel J,Gaje rP,Abdo Z,et al〃Vaginal microbiome of 基金项目:总基金名称国家自然科学基金 : reproductive- agewomen[J]〃Proc Natl Acad Sc iU S A, 中 国 健康女 性 阴道乳 杆 菌菌种 多 样性研 究 2011,108:Suppl 1::4680-4687〃 :81170535:;国家自然科学基金 :细菌性阴道病 [5]WU Bing,WU li-jun. Advances in Studies on Chemical 复发与阴道菌群的研究:81200411: Constituents of Seneco[Ji]. CHINA JOURNAL OF 作者简介:王奔:1985-:,男,医师,从事妇 CHINESE MATERIA MEDICA,2003,28:2::97-100〃:in 产科微生态与感染性疾病研究,Email:wb111222 Chinese: 吴斌,吴立军〃千里光属植物的化学成分研@sina.com 究进展[J]〃中国 通讯作 者:廖秦平 , Email : qinping_liao@ 中药杂志,2003,28:2::97-100〃 163.com [6]LIU guo-rui,W U JUN,YANG mei-hua.Study advances of Medicin alPlan tJusticia procumbens L[J].NORTHWEST AHPV 在宫颈癌筛查中的作用 郭艳利 游珂 耿力 乔杰 北京大学第三医院妇产科 目的:评价 APTIMA? HPV Assay(AHPV)在 出 CIN3+的敏感性为 94.1% (95% CI, 71.3, 99.9), ASC-US 和 LSIL 的处理中的应用价值。 方法:在HC2 检出 CIN3+的敏感性为 100% (95% CI, 80.5, 阴道镜检查前收集宫颈液基细胞学标 100)。AHPV 检出 CIN3+的特异性为 30.2% (95% CI, 25.7, 34.7),HC2 检出 CIN3+的特异性为 5.3% (95% 本,以宫颈活检病理学结果为金标准,对 AHPV 检 CI, 3.3, 8.0) ,差异有统计学意义(p<0.001)。 结论:测结果与 HC-2 进行比较。 和 HC2 比较,在检出 CIN3+方面,AHPV 结果:411 名妇女入组:231 例 ASC-US&180 有好的敏感性和更高的特异性,及低的漏诊率,适 例 LSIL:, 检出 17 例 CIN3+和 55 例 CIN2。AHPV 用于 ASC-US 和 LSIL 的分流管理。 阳性率 70.8% (95% CI, 66.4, 75.2) 低于 HC2 阳性率 作者简介:郭艳利,37 岁,硕士,助理研究员, (94.9%, 95% CI, 92.3, 96.8),差异有统计学意义 研究方向:宫颈病变,yanliguo121@sina.co,电m (p<0.001。)120 例 AHPV 阴性妇女中只检查 1 例灶 状 CIN3:该妇女细胞学结果为 LSIL:。AHPV 检 话:82265611。 ?91?